• Текст документа
  • Статус
Оглавление
Поиск в тексте
Действующий


Приложение N 1
к приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 21.11.1979 г. N 1175

     1. ОБЩЕКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
     

1.1. Определение рН мочи

1.1.1. Определение реакции мочи с помощью индикатора бромтимолового синего

1.1.2. Определение рН мочи с помощью индикаторной бумаги

1.2. Определение количества форменных элементов в моче

1.2.1. Определение количества форменных элементов в суточном объеме мочи по методу Каковского-Аддиса

1.2.2. Определение количества форменных элементов в 1 мл мочи по методу Нечипоренко

1.3. Обнаружение кетоновых тел в моче

1.3.1. Обнаружение кетоновых тел в моче с помощью реакции с нитропруссидом натрия

1.3.2. Обнаружение кетоновых тел в моче с помощью экспресс-тестов

1.4. Определение уробилиноидов в моче и кале

1.4.1. Определение уробилиногена в моче и кале реакцией с пара-диметиламинобензальдегидом

1.4.2. Обнаружение уробилина в моче реакцией с соляной кислотой (проба Флоранса)

1.4.3. Обнаружение уробилина в моче реакцией с сернокислой медью (проба Богомолова)

1.4.4. Обнаружение уробилина (стеркобилина) в кале реакцией с двухлористой ртутью

1.5. Обнаружение порфобилиногена в моче реакцией с пара-диметиламинобензальдегидом

     2. ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
     

2.1. Морфологическое исследование форменных элементов крови с дифференциальным подсчетом лейкоцитарной формулы

2.2. Определение гематокрита

2.2.1. Определение гематокрита с помощью микроцентрифуги МЦГ-8

2.2.2. Определение гематокрита микрометодом в модификации Й.Тодорова

     3. БИОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
     

3.1. Определение альбумина в сыворотке крови по реакции с бромкрезоловым зеленым (БКЗ)

3.2. Определение белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы

3.3. Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорновольфрамовым реактивом

3.4. Определение триглицеридов в сыворотке крови по цветной реакции с ацетилацетоном (Hantzsch-реакция)

3.5. Определение свободного и эстерифицированного холестерина в сыворотке крови непрямым методом по реакции Златкиса-Зака

3.6. Определение общего кальция в сыворотке крови по цветной реакции с ортокрезолфталеинкомплексоном (о-КФК)

3.7. Определение активности аспартатаминотрансферазы по оптическому тесту (UV-тест)

3.8. Определение активности у-глутамилтранспептидазы в сыворотке крови с субстратом L-у-глутамил-4-нитроанилидом

3.9. Скрининг-тесты для выявления наследственных или приобретенных дефектов обмена веществ у детей. Первый этап обследования (исследование мочи)

3.9.1. Обнаружение белка

3.9.2. Проба на гипераминоацидурию

3.9.3. Обнаружение цистина и гомоцистина

3.9.4. Обнаружение пролина и других аминокислот

3.9.5. Обнаружение кетокислот (проба с треххлористым железом)

3.9.6. Обнаружение кетокислот по реакции с (2,4-динитрофенил)-гидразином

3.9.7. Обнаружение кетоновых тел

3.9.8. Обнаружение гомогентизиновой кислоты

3.9.9. Обнаружение индикана (проба Обермейера)

3.9.10. Обнаружение глюкозы

3.9.11. Обнаружение фруктозы (проба Селиванова)

3.9.12. Обнаружение лактозы и мальтозы (проба Велька)

3.9.13. Обнаружение пентоз (проба Биаля)

3.9.14. Обнаружение глюкозоаминогликанов (проба с цетил-триметиламмонием бромистым)

3.9.15. Обнаружение кальция (проба Сулковича)

3.9.16. Определение хлора

     4. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
     

4.1. Определение поверхностного антигена вирусного гепатита B (HBSAG) в сыворотке крови

4.1.1. Метод двойной диффузии в геле

4.1.2. Метод встречного иммуноэлектроосмофореза

4.1.3. Метод прерывистого встречного иммуноэлектроосмофореза

4.2. Определение иммуноглобулинов методом простой радиальной иммунодиффузии в геле.

Приложение N 2
к приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 21.11.1979 г. N 1175


МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ УНИФИЦИРОВАННЫХ КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Введение

Настоящим приказом вводятся в действие Методические указания по применению унифицированных методов клинических лабораторных исследований по следующим разделам: общеклинический, гематологический, биохимический, иммунологический.

Методические указания, утвержденные приказами МЗ СССР N 290 от 11 апреля 1972 г., N 960 от 15 октября 1974 г., N 250 от 13 марта 1975 г., N 558 от 8 июня 1978 г., настоящим приказом не отменяются.

Методические указания составлены с учетом разработанных требований к унифицированным методам.

Работу по унификации клинических лабораторных методов исследования и по составлению настоящих методических указаний выполнили сотрудники I ММИ им.И.М.Сеченова, Всесоюзного научно-методического и контрольного центра по лабораторному делу МЗ СССР:

профессор

В.В.Меньшиков - научный руководитель,

канд. биол. наук

Л.Н.Делекторская,

канд. мед. наук

Л.М.Пименова,
Н.А.Сентебова,
С.П.Михайлова,
М.Г.Москвитина,

канд. биол. наук

Н.Б.Самецкая,
Л.Д.Добрянская,

канд. мед. наук

И.Д.Ертанов,
Л.М.Борисенко,
Т.Н.Александровская,
Л.А.Медведева,
Н.Н.Турковская,

канд. мед. наук

Н.М.Плотникова

при техническом содействии

Т.С.Уткиной.


Материалы по скрининг-тестам для выявления наследственных или приобретенных дефектов обмена веществ у детей подготовили сотрудники Научно-исследовательского института педиатрии и детской хирургии МЗ РСФСР:

профессор

Ю.Е.Вельтищев,

профессор

А.А.Ананенко,

док. мед. наук

Э.А.Юрьева.


Методы по определению поверхностного антигена вирусного гепатита В подготовлены на основе:

материалов, разработанных Институтом эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи АМН СССР (канд. биол. наук П.З.Будницкая) и

методических рекомендаций, составленных Центральным научно-исследовательским институтом гематологии и переливания крови МЗ СССР (профессор Т.В.Голосова) и утвержденных МЗ СССР.

Работа проводилась под руководством Комиссии по унификации и контролю качества клинических лабораторных методов исследования:

председатель

- профессор В.В.Меньшиков,

зам. председателя

- профессор И.С.Балаховский,

зам. председателя

- канд. биол. наук Л.Н.Делекторская


при содействии Консультативного совета по лабораторному делу МЗ СССР:

председатель

- профессор В.Т.Морозова


и Всесоюзного научного общества врачей-лаборантов:

председатель

- профессор А.С.Петрова.


В рецензировании методических указаний приняли участие сотрудники:

клинических кафедр I ММИ им.И.М.Сеченова,

кафедры биохимии I ММИ им.И.М.Сеченова,

Института биологической и медицинской химии АМН СССР,

Всесоюзного кардиологического научного центра АМН СССР,

Института ревматизма АМН СССР,

Института питания АМН СССР,

Института сердечно-сосудистой хирургии им.А.Н.Бакулева АМН СССР,

Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи АМН СССР,

Института вирусологии им.Д.И.Ивановского АМН СССР,

кафедры клинической лабораторной диагностики ЦОЛИУ врачей,

III кафедры терапии ЦОЛИУ врачей,

кафедры госпитальной хирургии и анестезиологии II ММИ* им.Н.И.Пирогова,
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.


ЦНИЛа II МНИ* им.Н.И.Пирогова,
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.


кафедры энзимологии химического факультета МГУ им.М.В.Ломоносова,

Центрального научно-исследовательского института гематологии и переливания крови МЗ СССР,

Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии МЗ СССР,

Всесоюзного научно-исследовательского и испытательного института медицинской техники МЗ СССР,

Московского научно-исследовательского института педиатрии и детской хирургии МЗ РСФСР,

Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии МЗ РСФСР,

Института кардиологии им.Л.А.Оганесяна Армянской ССР,

Куйбышевского медицинского института им.Д.И.Ульянова МЗ РСФСР,

городской клинической больницы N 31 г.Москвы,

городской больницы N 1 г.Москвы.

Общие указания к унифицированным методам

За период, прошедший со времени утверждения последнего приказа Министерства здравоохранения СССР "Об унификации клинических лабораторных методов исследований", проводилась работа в рамках Комплексной программы стандартизации и управления качеством клинических лабораторных исследований, предусматривающая стандартизацию важнейших сторон деятельности клинико-диагностических лабораторий.

В целях подготовки условий для перехода от унификации к стандартизации методов в настоящих указаниях приводится краткая характеристика требований к системе стандартных методов.

В соответствии с требованиями Международной системы единиц (СИ) и Стандарта СЭВ "Метрология. Единицы физических величин (СТ СЭВ 1052-78), который вводится в качестве государственного стандарта СССР с 1 января 1980 г., а также в соответствии с рекомендациями по применению единиц СИ в медицине (1, 2, 3), в "Методических указаниях по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследования" результаты и нормальные величины выражены в единицах СИ и дан пересчет ранее применявшихся единиц в рекомендуемые.

Для методов клинической биохимии представлены результаты оценки аналитической надежности методов - воспроизводимость и правильность.

Воспроизводимость оценивалась в серии и изо дня в день на контрольных сыворотках с расчетом коэффициента вариации.

Правильность оценивалась путем сравнения с выбранными наиболее точными методами с определением достоверности различий по тесту Стьюдента (t-тест) при n>20 или по тесту Вилкоксона (непараметрический критерий - T-тест) при n<20, а также оценкой статистической связи с расчетом коэффициента корреляции и уравнения регрессии (4, 5, 6).

Приведенные данные свидетельствуют о хорошей воспроизводимости представленных методов клинической биохимии и об отсутствии существенных систематических погрешностей по отношению к сравниваемым методам.

Оценка аналитической надежности методов проводилась на приборах:

1) Фотоэлектроколориметр типа ФЭК-М. Пределы измерений светопропускания от 100% до 1%; допустимая абсолютная погрешность показаний прибора ±1%, вариации показаний прибора (воспроизводимость) ±0,3% (7, 8).

2) Спектрофотометр типа СФ-4А. Рабочий диапазон 220 нм - 1100 нм. Пределы измерения: оптической плотности 0-2, пропускания 100%-0%; абсолютная погрешность показаний прибора ±1%; точность длины волны ±1 нм (9, 10).

При проведении исследований по унифицированным методам рекомендуется руководствоваться следующими указаниями:

- взвешивание на аналитических весах производят с точностью до 0,0002 г, на технических весах - с точностью до 0,01 г;

- для измерения объемов жидкости и приготовления растворов используют мерную посуду, соответствующую ГОСТам: ГОСТ 1770-74 - "Цилиндры, мензурки, колбы мерные" и ГОСТ 20292-74 - "Бюретки, пипетки";

- под "холодной", "прохладной" температурой подразумевают температуру 12°С-15°С; под "теплой" - 40°С-50°С; под "горячей" - 80°С-90°С. Под "комнатной" - подразумевают температуру 18°С-20°С. Под температурой "кипящей водяной бани" подразумевают температуру 98°С-100°С (11);

- если для растворов не указан растворитель, то подразумевают водные растворы;

- под названием "вода", если нет особых указаний, следует понимать дистиллированную воду (11);

- для приготовления растворов реактивов используют дистиллированную воду, соответствующую ГОСТу 6709-72;

- используют химические реактивы, срок хранения которых не истек, а условия хранения и упаковки соответствуют ГОСТу на данный реактив, или указаны на этикетке.

Растворы реактивов для унифицированных методов готовятся в объеме, приемлемом для данной лаборатории, в зависимости от стабильности растворов реактивов и числа проводимых исследований; для большинства реактивов указаны допустимые квалификации. В тех случаях, когда квалификация реактивов не указана, можно пользоваться реактивами квалификации ч., ч.д.а. или х.ч.

Для реактивов, которые не производятся отечественной промышленностью, квалификация не указана.

Правила приготовления растворов кислот и щелочей приведены в руководствах по технике лабораторных работ (12, 13).

Описание предварительных операций - очистка, мытье и сушка лабораторной посуды приведены в соответствующих руководствах (12, 14).

В связи с переходом на Международную систему единиц, концентрация растворов реактивов в унифицированных методах выражена в молярной (моль/л) или в массовой (г/л раствора) концентрации.

Литература

1. Методические указания. Внедрение и применение СТ СЭВ 1052-78 "Метрология, Единицы физических величин". РД 50-160-79. М., Изд-во Стандартов, 1979.

2. Методические рекомендации по применению в клинической лабораторной диагностике наименований и обозначений единиц физических величин. М., 1977.

3. Единицы СИ в медицине. Подготовлено по предложению Тридцатой Всемирной ассамблеи здравоохранения. Женева, ВОЗ, 1979.

4. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск, "Вышэйшая школа", 1973.

5. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л., "Медицина", 1973.

6. Делекторская Л.Н., Меньшиков В.В. Оценка надежности клинических лабораторных методов исследования. Лабор. дело, 1976, 9, 556-562.

7. Фотоэлектрический колориметр. Модель ФЭК-М. Руководство по пользованию, Загорск, 1969.

8. Крейцер А.Г. Справочник по медицинским приборам. Под ред.Е.М.Крепса. Л., "Медицина", 1962.

9. Спектрофотометр СФ-4 А. Инструкция к пользованию. Л., 1970.

10. Кац А.М., Канторович А.С. Руководство по приборам и оборудованию для медико-биологических исследований. Л., "Медицина", 1976.

11. Государственная Фармакопея Союза Советских Социалистических Республик. Десятое издание. М., "Медицина", 1968.

12. Воскресенский П.И. Техника лабораторных работ. М., "Химия", 1966.

13. Карякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические реактивы. М., Госхимиздат, 1955.

14. Кац А.М., Канторович А.С. Мерные и дозирующие устройства для клинико-диагностических лабораторий. Л., "Медицина", 1970.

1. ОБЩЕКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ рН МОЧИ

1.1.1. Определение реакции мочи с помощью индикатора бромтимолового синего.

Принцип. Реакцию мочи определяют, используя раствор индикатора бромтимолового синего, имеющего зону перехода окраски от желтой через зеленую к синей в диапазоне рН 6,0-7,6.

Реактивы.

1. Бромтимоловый синий (3', 3"-дибромтимолсульфофталеин): 0,1 г тонко растертого в фарфоровой ступке индикатора растворяют в 20 мл теплого этилового спирта и после охлаждения до комнатной температуры доводят водой до 100 мл.

Специальное оборудование. Не требуется.

Ход определения и оценка результатов. Исследуют мочу в первые 2-3 часа после мочеиспускания. К 2-3 мл мочи добавляют 1-2 капли раствора индикатора. Желтый цвет соответствует кислой реакции, бурый - слабокислой, травянистый - нейтральной, буровато-зеленый - слабощелочной, зеленый и синий - щелочной.

Примечание. В Государственной Фармакопее СССР (М., 1968) приведены 2 способа приготовления раствора индикатора бромтимолового синего; способ приготовления не влияет на результаты.

1.1.2. Определение рН мочи с помощью индикаторной бумаги.

Можно использовать любую индикаторную бумагу, пригодную для измерения значения рН в интервале 5,0-8,0. В таблице представлены пригодные для определения рН мочи индикаторные бумаги и дана их характеристика.

Таблица

Индикаторные бумаги, пригодные для определения рН мочи

N
п/п

Наименование

Производство

Интервал значений рН

Другие показатели, определяемые реактивной бумагой

1.

Бумага лакмусовая синяя

СССР

Не меняет цвета в щелочной среде, краснеет в кислой среде

2.

Бумага лакмусовая красная

СССР

Не меняет цвета в кислой среде, синеет в щелочной среде

3.

Бумага индикаторная универсальная

СССР

1,0-10,0

4.

Бумага "Рифан"

I

СССР

4,0-5,4

II

5,8-7,4

III

7,4-8,8

5.

Бумага нитразиновая желтая

ГДР

5,4-7,4

6.

Биофан-3

ГДР

5,0-9,0

Белок, глюкоза

7.

Альбуфан

ЧССР

5,0-9,0

Белок

8.

АГ-фан

ЧССР

5,0-9,0

Белок, восстанавливающие вещества, глюкоза

9.

Тетрафан

ЧССР

5,0-9,0

Белок, восстанавливающие вещества, глюкоза

10.

Пентафан

ЧССР

5,0-9,0

Белок, восстанавливающие вещества, глюкоза, кетоновые тела


Нормальные значения рН мочи: 5,0-7,0.

Литература:

Тодоров Й. - Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София, 1968.

Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. проф.Е.А.Кост. М., 1975, 233-235.

1.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ В МОЧЕ

1.2.1. Определение количества форменных элементов в суточном объеме мочи по методу Каковского-Аддиса.

Принцип. Определение количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в суточном объеме мочи с помощью счетной камеры.

Специальное оборудование.

1. Микроскоп.

2. Счетная камера.

Сбор мочи. Мочу собирают за 10-12 часов. В день сбора мочи необходимо ограничение приема жидкости для поддержания постоянных величин плотности мочи и рН, что важно для подсчета гиалиновых цилиндров, которые легко разрушаются в щелочной и малоконцентрированной моче низкой плотности.

Наиболее рационально собирать ночную порцию мочи: обследуемый мочится перед сном, отмечая время, и затем собирает мочу в течение 10-12 часов в один сосуд. Для предотвращения разрушения форменных элементов в сосуд добавляют 4-5 капель формалина или кристаллик тимола.

Ход определения. Собранную мочу тщательно размешивают и измеряют ее объем. Для исследования осадок получают из количества мочи, выделенного за 12 мин (1/5 часа), которое рассчитывают по формуле:

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований, (1)


где: Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - объем мочи, выделенный за 12 мин (мл),

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - объем мочи, собранный за 10-12 час (мл),

t - время сбора мочи (час),

5 - коэффициент пересчета на 1/5 часа.

Рассчитанное количество мочи центрифугируют в мерной центрифужной пробирке при 3500 об/мин в течение 3 мин или при 2000 об/мин в течение 5 мин. Отделяют верхний слой, оставляя 0,5 мл мочи вместе с осадком. Если осадок превышает 0,5 мл, то оставляют 1 мл мочи. Осадок с надосадочной жидкостью тщательно перемешивают и заполняют счетную камеру. Подсчитывают раздельно количество лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров (эпителиальные клетки мочевыводящих путей не считают) и рассчитывают содержание форменных элементов в 1 мкл осадка мочи.

Расчет. Если подсчет проводят в камере Горяева, объем которой равен 0,9 мкл, то количество форменных элементов в 1 мкл определяют по формуле:

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований, (2)


где: Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - число форменных элементов в 1 мкл,

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - число форменных элементов, подсчитанных во всей камере Горяева,

0,9 - объем камеры Горяева в мкл.

Для камеры Фукса-Розенталя, объем которой - 3,2 мкл:

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований. (3)


Количество форменных элементов, выделенных с мочой за сутки, рассчитывают по формуле:

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований, (4)


если для исследования взято 0,5 мл (500 мкл) из 12-минутной порции мочи или:

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований, (5)


если осадок был обильным, и был оставлен 1 мл (1000 мкл),

где: Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - число форменных элементов, выделенных за сутки,

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - число форменных элементов в 1 мкл мочи, оставленной для исследования с осадком,

500 или 1000 - количество мочи (мкл), оставленное вместе с осадком для исследования из 12-минутной порции мочи.

Умножение на 5 и 24 дает расчет выделенного количества клеток за 24 часа.

Нормальные величины суточной экскреции форменных элементов с мочой: до 2000000 лейкоцитов, до 1000000 эритроцитов, до 20000 цилиндров.

Примечание. Для подсчета цилиндров необходимо просматривать не менее четырех камер Горяева или одну камеру Фукса-Розенталя.

1.2.2. Определение количества форменных элементов в 1 мл мочи по методу Нечипоренко.

Принцип. Определение количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в 1 мл мочи с помощью счетной камеры.

Специальное оборудование. То же.

Ход определения. Берут одноразовую порцию мочи (желательно утреннюю) в середине мочеиспускания, определяют рН (в моче щелочной реакции может быть частичный распад клеточных элементов). 5-10 мл мочи центрифугируют при 3500 об/мин в течение 3 мин, отделяют верхний слой, оставляя вместе с осадком 0,5 мл (500 мкл) мочи при небольшом осадке или 1 мл (1000 мкл) - при большом. Хорошо перемешивают осадок и заполняют счетную камеру. Подсчитывают отдельно лейкоциты, эритроциты и цилиндры во всей сетке камеры.

Расчет. Рассчитывают количество клеток в 1 мкл осадка мочи по формуле (2) или (3). Установив эту величину, рассчитывают число форменных элементов в 1 мл мочи по формуле:

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований, (6)


если оставлено 0,5 мл (500 мкл) мочи с осадком,

или Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований, (7)


если оставлен 1 мл (1000 мкл) мочи с осадком,


где: Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - число форменных элементов в 1 мл мочи,

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - число форменных элементов в 1 мкл мочи, оставленной вместе с осадком,

500 (или 1000) - объем мочи (мкл), оставленной вместе с осадком,

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - количество мочи, взятое для центрифугирования.

Нормальные величины: в 1 мл мочи выделяется до 2000 лейкоцитов и до 1000 эритроцитов; цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более одного на камеру Фукса-Розенталя или на 4 камеры Горяева (до 20 в 1 мл).

Литература

Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. проф. Е.А.Кост. М., 1975, 233-235.

Нечипоренко А.З. - Определение количества лейкоцитов и эритроцитов в 1 мл мочи. Лабор. дело, 1969, 2, 121.

Каковский А.О. - К методике счисления организованных элементов мочи. Русский врач, 1910, 9, 41, 1444.

Addis Т.J. - J. clin. Invest. 1925, 2, 409.

1.3. ОБНАРУЖЕНИЕ КЕТОНОВЫХ ТЕЛ В МОЧЕ

1.3.1. Обнаружение кетоновых тел в моче с помощью реакции с нитропруссидом натрия.

Метод 1 (проба Ланге)

Принцип. Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами (ацетоуксусной кислотой и ацетоном) с образованием комплекса, окрашенного в красный цвет.

Реактивы. 1. Натрий нитропруссидный, 50 г/л раствора. Готовят перед употреблением.

2. Уксусная кислота, концентрированная.

3. Аммиак водный (NHПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийOH) (примерно 25%).

Специальное оборудование. Не требуется.

Ход обнаружения. Исследуют мочу в первые 2-3 часа после мочеиспускания. В пробирку к 3-5 мл мочи приливают 5-10 капель раствора нитропруссида натрия и 0,5-1,0 мл уксусной кислоты, смешивают, после чего осторожно наслаивают пипеткой 2-3 мл водного аммиака.

Оценка результатов. Проба положительна, если в течение 3 мин на границе с аммиаком обнаруживается красно-фиолетовое кольцо.

Схема обнаружения

Компоненты

Количество

Оценка результатов

Моча

3-5 мл

50 г/л раствор нитропруссида натрия

5-10 капель

Уксусная кислота

0,5-1,0 мл

Смешать

Водный аммиак

2-3 мл
наслаивать

При положительной реакции - появление на границе с аммиаком красно-фиолетового кольца.


Метод II (модифицированная проба Ротеры)

Принцип. Тот же.

Реактивы. 1. Натрий нитропруссидный, 50 г/л раствора. Готовят перед употреблением.

2. Аммоний сернокислый.

3. Аммиак водный (NHПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийOH) (примерно 25%).

Специальное оборудование. Не требуется.

Ход обнаружения. Приблизительно 200 мг сухого сернокислого аммония, 5 капель мочи и 2 капли раствора нитропруссида натрия тщательно смешивают в пробирке, после чего осторожно наслаивают на поверхность 10-15 капель водного аммиака.

Оценка результатов. При наличии кетоновых тел на границе раздела в течение 3-5 мин появляется красно-фиолетовое окрашивание. При слабоположительной реакции кольцо может появиться в течение 10 мин. Реакция позволяет дать ориентировочную количественную оценку.

Схема обнаружения

Компоненты

Количество

Оценка результатов

Моча

5 капель

Аммоний сернокислый

200 мг

50 г/л раствор нитропруссидного натрия

2 капли

Водный аммиак

Смешать

10-15 капель наслаивать

При положительной реакции - появление красного кольца на границе раздела



Ориентировочная количественная оценка

Интенсивность окраски

Обнаруживаемые вещества

Ацетоуксусная кислота

Ацетон

мг /100 мл

мг/л

мг/100 мл

мг/л

Следы

5

50

20

200

Умеренная

30

300

250

2500

Интенсивная

80

800

800

8000

1.3.2. Обнаружение кетоновых тел в моче с помощью экспресс-тестов.

Принцип обнаружения кетоновых тел с помощью экспресс-тестов основан на реакции с нитропруссидом натрия.

Перечень экспресс-тестов представлен в таблице:

N
п/п

Наименование

Производство

Форма выпуска

Другие показатели, определяемые с помощью теста

Оценка результатов

1

Набор для экспресс-анализа ацетона в моче

СССР

Таблетки

Без количественной оценки

2

Реагност-Ацетон

ГДР

Таблетки

Без количественной оценки

3

Кетофан

ЧССР

Пластиковые полоски

Ориентировочная количественная оценка

4

Пентафан

ЧССР

Пластиковые полоски

рН, глюкоза, восстанавливающие вещества, белок

Ориентировочная количественная оценка


Анализ проводится строго по инструкции.

Нормальные величины. В норме с мочой выделяется 20-50 мг кетоновых тел за 24 часа. Эти количества не обнаруживаются качественными пробами, поэтому в норме качественные пробы - отрицательны.

Примечание. Ацетоуксусная кислота в стерильной моче стабильна в течение 8-10 дней; в присутствии микробов или дрожжей - может полностью исчезнуть за сутки. Около 20% ацетона испаряется за сутки при комнатной температуре. Кетоновые тела могут исчезнуть при наличии инфекции мочевого тракта.

Литература

Тодоров Й. - Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София, 1968.

Henry R.J. - Clinical chemistry. Principles and technics. New York, 1964, 689-698.

Методические рекомендации по применению экспресс-тестов (сухих диагностических проб) в медицинской практике. М., 1977.

1.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОБИЛИНОИДОВ В МОЧЕ И КАЛЕ

1.4.1. Определение уробилиногена в моче и кале реакцией с пара-диметиламинобензальдегидом.

Принцип. Уробилиноген с пара-диметиламинобензальдегидом образует окрашенный в красный цвет комплекс, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию уробилиногена. Для восстановления уробилина в уробилиноген используют аскорбиновую кислоту и гидрат окиси железа. Для увеличения специфичности реакции добавляют уксуснокислый натрий.

Реактивы.

1. 4-(диметиламино)-бензальдегид (пара-диметиламинобензальдегид).

2. Соляная кислота концентрированная, х.ч.

3. Реактив Эрлиха. 0,7 г пара-диметиламинобензальдегида растворяют в 150 мл концентрированной соляной кислоты, приливают к 100 мл дистиллированной воды и смешивают. Раствор должен быть бесцветным или слегка желтым. Хранят в посуде из темного стекла. Реактив стабилен.

4. Натрий уксуснокислый, ч.д.а., х.ч., насыщенный раствор. 375 г CHПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийCOONa·3НПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийO (или 226 г CHПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийCOONa) растворяют в 250 мл теплой дистиллированной воды, охлаждают до комнатной температуры. Хранят при комнатной температуре. Раствор должен быть бесцветным и прозрачным.

5. Железо сернокислое (FeSOПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследований·7 HПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийO), ч.д.а., 200 г/л раствора. Стабилен при хранении в холодильнике в течение суток.

6. Аскорбиновая кислота.

7. Натр едкий: а) 100 г/л раствора; б) 0,5 г/л раствора.

8. Барий хлористый, 100 г/л раствора.

9. Фенолсульфофталеин (феноловый красный). Используют для приготовления калибровочного раствора.

10. Основной калибровочный раствор. 20,0 мг фенолсульфофталеина растворяют в 100 мл 0,5 г/л раствора едкого натра. Стабилен при хранении.

Рабочий калибровочный раствор готовят разведением основного раствора 0,5 г/л раствором едкого натра в 100 раз. Стабилен при хранении при комнатной температуре в течение недели. Рабочий раствор содержит 0,2 мг фенолсульфофталеина в 100 мл и эквивалентен по окраске 0,346 мг/100 мл раствору уробилиногена. Точность приготовления можно проверить измерением оптической плотности раствора на спектрофотометре: при длине волны 562 нм оптическая плотность должна быть 0,38-0,39.

Специальное оборудование.

Фотоэлектроколориметр или спектрофотометр.

Ход определения уробилиногена в моче.

Подготовка образца. Исследуют мочу в первые 2-3 часа после мочеиспускания. При наличии мутности мочу центрифугируют. Затем проводят обнаружение билирубина одной из качественных проб. При наличии билирубина смешивают 8 мл мочи с 2 мл 100 г/л раствора хлористого бария и фильтруют через бумажный фильтр. Конечный результат умножают на 1,25, чтобы внести поправку на это разведение.

Ход определения. 100 мг аскорбиновой кислоты растворяют в 10 мл исследуемой мочи и помещают по 1,5 мл в две пробирки (опытная и холостая пробы).

В пробирку с холостой пробой прибавляют 4,5 мл свежеприготовленной смеси одного объема реактива Эрлиха и двух объемов насыщенного раствора уксуснокислого натрия.

В пробирку с опытной пробой прибавляют 1,5 мл реактива Эрлиха и немедленно приливают 3,0 мл насыщенного раствора уксуснокислого натрия.

Через 5 мин измеряют экстинкцию обеих проб против воды на ФЭКе при длине волны 500-590 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см или на спектрофотометре при длине волны 562 нм. Рабочий калибровочный раствор измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу.

Результаты выражают в единицах Эрлиха (1 ед. соответствует 1 мг уробилиногена). Концентрацию уробилиногена выражают количеством единиц Эрлиха в 100 мл мочи.

Расчет проводят по формуле:

Ед. Эрлиха на 100 мл мочиПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследований,

где: Ео - экстинкция опытной пробы,

Ех - экстинкция холостой пробы,

Ек - экстинкция калибровочной пробы,

0,346 - концентрация уробилиногена в растворе (0,346 мг/100 мл), окраска которого эквивалентна окраске калибровочного раствора фенолсульфофталеина,

6,0 - объем пробы (мл),

1,5 - количество мочи в пробе (мл).

Схема определения уробилиногена в моче

NN
п/п

Компоненты

Количество (мл)

Опытная проба

Холостая проба

Калибро-
вочная проба

1.

10 мл мочи + 100 мг аскорбиновой кислоты

1,5

1,5

-

2.

Реактив Эрлиха

1,5

-

-

3.

Насыщенный раствор уксуснокислого натрия

3,0

-

-

4.

Смесь реактивов 2 и 3 (1:2)

-

4,5

-

5.

Рабочий калибровочный раствор

-

-

6,0


Измерение экстинкции на ФЭКе (длина волны - 500-590 нм, кювета - 1 см).

Нормальные величины. В моче здорового человека содержатся следы уробилиногена - за сутки у взрослых выделяется с мочой 0-6 мг уробилиногена, у детей - 0-2 мг.

Примечания:

1. Моча не должна стоять при дневном свете, так как это ускоряет окисление уробилиногена в уробилин. Рекомендуется собирать мочу в посуду из темного стекла.

2. Чтобы получить величину выделения уробилиногена за определенный промежуток времени (например, за 2 часа), анализ проводят в образце мочи, собранной точно за это время, и рассчитывают выделенное количество уробилиногена, учитывая объем мочи, по формуле:

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований,

где Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - объем мочи (мл), выделенной за определенный промежуток времени;

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований - коэффициент для расчета количества уробилиногена в 100 1 мл.

Ход определения уробилиногена в кале.

Подготовка образца. Исследуют кал в первые 2 часа после дефекации. Переносят 10 г кала в ступку. Отмеривают в цилиндре 190 мл воды. Из отмеренного количества воды наливают около 20 мл в ступку, растирают кал с водой, добавляют еще 80-90 мл воды и растирают снова, оставляют стоять до оседания. В коническую колбу, объемом 500 мл, наливают 100 мл 200 г/л раствора сернокислого железа и надосадочную жидкость из ступки. К оставшемуся в ступке калу добавляют еще воды из цилиндра, растирают, оставляют стоять, переносят надосадочную жидкость в колбу. Повторяют процедуру, используя оставшееся от 190 мл количество воды. В колбу добавляют 100 мл 100 г/л раствора едкого натра, встряхивают и ставят колбу в темное место при комнатной температуре на 1-3 часа.

Хорошо смешивают содержимое колбы и фильтруют. Разводят 5 мл фильтрата водой до 50 мл. В 10 мл разведенного фильтрата растворяют 100 мг аскорбиновой кислоты и помещают по 1,5 мл в 2 пробирки (опытная и холостая пробы). Дальнейший ход определения и схему определения см. "ход определения уробилиногена в моче".

Расчет проводят по той же формуле, что и при определении в моче, и полученный результат (концентрация уробилиногена в 100 мл) умножают на 400 для пересчета на 100 г кала (для экстракции уробилиногена из 10 г кала используют объем жидкости - 390 мл и затем разводят фильтрат еще в 10 раз; таким образом, в 100 мл фильтрата, используемого для анализа, содержится уробилиноген из 0,25 г кала).

Ед. Эрлиха на 100 г калаПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследований,

где 400 - коэффициент пересчета количества уробилиногена на 100 г кала. Остальные обозначения - см. определение уробилиногена в моче.

Нормальные величины. В норме с калом выделяется 75-350 мг уробилиногена на 100 г кала.

1.4.2. Обнаружение уробилина в моче реакцией с соляной кислотой (проба Флоранса).

Принцип. Уробилин с соляной кислотой образует соединения красного цвета.

Реактивы.

1. Кислота серная, концентрированная.

2. Диэтиловый эфир.

3. Кислота соляная, концентрированная.

Специальное оборудование.

Не требуется.

Ход обнаружения. 8-10 мл мочи в пробирке подкисляют 8-10 каплями концентрированной серной кислоты, перемешивают, приливают 2-3 мл эфира и осторожно перемешивают. В другую пробирку наливают 2-3 мл концентрированной соляной кислоты. Эфирный слой отбирают и осторожно наслаивают на соляную кислоту.

Оценка результатов. При наличии уробилина на границе жидкостей образуется кольцо красного цвета.

1.4.3. Обнаружение уробилина в моче реакцией с сернокислой медью (проба Богомолова).

Принцип. Уробилин с сернокислой медью образует соединение розово-красного цвета.

Реактивы.

1. Медь сернокислая, ч.д.а., насыщенный раствор. 23 г CuSOПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследований·5HПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийO растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

2. Хлороформ.

Специальное оборудование.

Не требуется.

Ход обнаружения. К 10-15 мл мочи приливают 2-3 мл насыщенного раствора сернокислой меди. Если образуется помутнение, то прибавляют несколько капель концентрированной соляной кислоты до прояснения раствора. Через 5 мин приливают 2-3 мл хлороформа и перемешивают.

Оценка результатов. При наличии уробилина слой хлороформа окрашивается в розово-красный цвет.

1.4.4. Обнаружение уробилина (стеркобилина) в кале реакцией с двухлористой ртутью.

Принцип. Стеркобилин с двухлористой ртутью образует розово-красное окрашивание.

Реактивы.

1. Ртуть двухлористая (HgClПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследований), (ртуть хлорная, сулема), 70 г/л раствора. Растворяют при кипячении, после охлаждения фильтруют.

Специальное оборудование.

Не требуется.

Ход обнаружения. Комочек кала, размером с горошину, растирают в фарфоровой чашечке или в пробирке с 2-3 мл 70 г/л раствора двухлористой ртути, закрывают крышкой или пробкой и оставляют при комнатной температуре в вытяжном шкафу на сутки. Холостую пробу ставят как опытную, но вместо двухлористой ртути берут воду.

Оценка результатов. В присутствии стеркобилина в опытной пробе появляется розовое окрашивание.

Оценку результатов можно провести немедленно, если подогреть пробирки с опытной и холостой пробкой на пламени горелки.

При наличии билирубина образуется зеленое окрашивание.

В норме - реакция положительна.

Литература

Й.Тодоров - Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София, 1968.

Henry R.J., Cannon D.C., Winkelman J.W. Clinical chemistry. Principles and technics. New York, 1974, 1354-1369.

1.5. ОБНАРУЖЕНИЕ ПОРФОБИЛИНОГЕНА В МОЧЕ РЕАКЦИЕЙ С ПАРА-ДИМЕТИЛАМИНОБЕНЗАЛЬДЕГИДОМ

Принцип. Порфобилиноген (ПБГ) реагирует с пара-диметиламинобензальдегидом с образованием окрашенного в красный цвет соединения. Для повышения специфичности реакции добавляют ацетат натрия. Соединения, дающие аналогичную реакцию с пара-диметиламинобензальдегидом (уробилиноген, производные индола, скатола и др.), удаляют путем экстракции хлороформом и бутанолом. ПБГ не растворяется ни в хлороформе, ни в бутаноле.

Реактивы.

1. 4-(диметиламино)-бензальдегид (пара-диметиламинобензальдегид).

2. Соляная кислота концентрированная, х.ч.

3. Реактив Эрлиха. 0,7 г пара-диметиламинобензальдегида растворяют в 150 мл концентрированной соляной кислоты, приливают к 100 мл дистиллированной воды и смешивают. Раствор должен быть бесцветным или слегка желтым. Хранят в посуде из темного стекла. Реактив стабилен.

4. Натрий уксуснокислый, х.ч. или ч.д.а. - насыщенный раствор. 375 г CHПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийCOONa·3НПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийO (или 226 г CHПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийCOONa) растворяют в 250 мл теплой дистиллированной воды, охлаждают до комнатной температуры. Хранят при комнатной температуре. Раствор должен быть бесцветным и прозрачным.

5. Хлороформ.

6. Бутиловый спирт.

7. Бумага индикаторная для измерения рН (в интервале 4,0-5,0).

Специальное оборудование - не требуется.

Ход обнаружения и оценка результатов. Исследуют мочу в первые 2-3 часа после мочеиспускания. Смешивают в пробирке 2,5 мл реактива Эрлиха и 2,5 мл мочи. Добавляют 5 мл насыщенного раствора уксуснокислого натрия и перемешивают. Измеряют рН индикаторной бумагой; рН должно быть в интервале 4,0-5,0; если рН меньше 4,0, добавляют раствор ацетата натрия для установления нужного рН.

Если окраски не образуется - результат отрицательный.

При образовании розовой или красной окраски добавляют 5 мл хлороформа и встряхивают. Если окраска переходит в слой хлороформа, а верхний водный слой становится бесцветным или желтым, результат - отрицательный.

При сохранении окрашивания водной фазы переносят 6-8 мл водного слоя в другую пробирку, добавляют бутиловый спирт в соотношении 2:1 и встряхивают. Обычно фазы разделяются быстро; в противном случае смесь центрифугируют. При переходе окраски в бутиловый слой - результат отрицательный. Если водная часть остается окрашенной, результат - положительный для ПБГ.

Схема обнаружения ПБГ и оценки результатов

Компоненты

Количество (мл)

Оценка результатов

Наличие розовой или красной окраски

Обнаруживаемые соединения

Моча

2,5

Реактив Эрлиха

2,5

Насыщенный раствор уксуснокислого натрия

5,0

-

ПБГ не обнаруживается

+

ПБГ, уробилиноген, индол, индол-3-уксусная кислота, скатол, меланоген, опсопирролдикарбоксильная кислота (ОПДК) и др.

Хлороформ

5,0

Водный слой

-

ПБГ не обнаруживается

+

ПБГ, меланоген, ОПДК и др.

Слой хлороформа

+

Уробилиноген, индол, индол-3-уксусная кислота, скатол и др.

Бутиловый спирт

3,0-4,0

Водный слой

-

ПБГ не обнаруживается

+

ПБГ

Слой бутилового спирта

+

Меланоген, ОПДК и др.


В норме (0-2 мг/л) ПБГ в моче не обнаруживается. Данным методом ПБГ обнаруживается при концентрации, превышающей 6 мг/л.

Примечание. При хранении мочи свыше 3 часов при комнатной температуре положительная реакция может стать отрицательной, что, по-видимому, связано с превращением ПБГ в порфирины и образованием ингибиторов реакции. Если нет возможности исследовать мочу в первые 2-3 часа, ее хранят в холодильнике при 4°С или в замороженном состоянии. При хранении в холодильнике и доведении рН мочи до 6,0-7,0 ПБГ стабилен длительное время.

Литература

Henry R., Cannon D.C., Winkelman J. Clinical chemistry. Principles and technics. New York, 1974, 1251-1263.

2. ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ КРОВИ С ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫМ ПОДСЧЕТОМ ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ФОРМУЛЫ

Принцип. Микроскопическое исследование сухих фиксированных и окрашенных мазков крови с описанием морфологии эритроцитов и дифференциальным подсчетом лейкоцитов с расчетом их процентного соотношения.

Этапы метода.

I. Подготовка стекол. Предметные стекла должны быть чистыми и обезжиренными. Для этого стекла (бывшие в употреблении и новые) замачивают в 2% растворе хозяйственного мыла или стирального порошка ("Новость", "Триас-а", "Прогресс", "Астра" - 20,0 г порошка растворяют в 975 мл воды и добавляют 20 мл пергидроля) в эмалированной посуде на 8-10 часов, старый мазок удаляют ватным тампоном и кипятят стекла в этом же растворе 5-10 минут. Кипячение более 10 мин и кипячение в алюминиевой посуде приводит к помутнению стекол. Затем стекла промывают в проточной воде, насухо вытирают и выборочно проверяют полноту отмывки от щелочных добавок моющих средств с помощью 1 г/л спиртового раствора фенолфталеина путем нанесения 2-3 капель на стекло (розовое окрашивание не должно появляться). Отмытые стекла помещают на 30-60 мин в смесь Никифорова (этиловый спирт 96°, и диэтиловый эфир в соотношении 1:1), после чего их хранят в чистой посуде с крышкой.

II. Фиксация мазков.

Реактивы: метиловый спирт, х.ч., или эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду (раствор). При отсутствии вышеуказанных фиксаторов используют этиловый спирт 96°, выдерживая в нем мазки не менее 35 мин.

Оборудование: пинцет, штатив для сушки мазков, широкогорлая банка с притертой пробкой.

Фиксация. Высохшие на воздухе мазки опускают в широкогорлую банку с фиксатором на 5-10 мин, затем извлекают их пинцетом и высушивают на воздухе. Для фиксации отбирают правильно приготовленные тонкие мазки крови: мазок должен иметь желтоватый цвет, располагаться на расстоянии 1-3 мм от края широких сторон стекла и заканчиваться "метелочкой", не доходя 1,5-2 см до края.

III. Окраска мазков. Для окраски используется смесь двух красителей - кислого (эозин калия) и основного (метиленовый синий и его производные - азур I и азур II).

Азур-эозиновые смеси обладают высокой чувствительностью к рН воды. Вода для приготовления красителей и смывания краски должна иметь нейтральную реакцию. При кислой реакции клетки долго не прокрашиваются и имеют красный оттенок, при щелочной - эритроциты окрашиваются в серовато-синий цвет, а ядра и цитоплазма - в очень темные цвета.

а) Окраска по Нохту.

Реактивы: 1. Основные растворы красителей - азур II, 1 г/л водного раствора; 1,0 г растворяют в 1000 мл дистиллированной воды; эозин К, 1 г/л водного раствора: 1,0 г растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. Растворы готовы к употреблению через 14 дней при хранении в посуде темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре.

2. Фосфатный буфер (смесь Вейзе), рН 7,4-7,5.

Калий фосфорнокислый однозамещенный безводный (KHПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийPOПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследований) - 0,49 г.

Натрий фосфорнокислый двузамещенный (NaПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийHPOПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследований·2HПеречень унифицированных методов клинических лабораторных исследованийO) - 1,14 г или безводный - 0,909 г.

Дистиллированная вода - 1000 мл.

3. Рабочий раствор: готовят перед употреблением путем смешивания 25 мл основного раствора азура II, 20 мл основного раствора эозина К и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут несколько варьировать и должны быть установлены опытным путем при приготовлении свежей партии основных растворов красителей.

Окраска. Фиксированные сухие мазки помещают в контейнер, который опускают в кювету с рабочим раствором красителя и выдерживают в нем строго определенное время, подобранное для каждой партии краски - от 20 до 45 мин. Затем контейнер переносят в кювету с водопроводной водой, после чего мазки ставят вертикально в штатив для сушки. При отсутствии штатива-контейнера высушенные мазки красят на "рельсах", заливая мазок рабочим раствором красителя возможно более высоким слоем (3-4 мл на мазок).

б) Окраска по Паппенгейму.

Реактивы: 1. Эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду (раствор). При отсутствии готового раствора готовят 5 г/л раствора сухого красителя в метиловом спирте (х.ч.). Раствор готов к употреблению через 4 дня.

2. Рабочий раствор азур-эозина по Нохту.

Окраска. Сухие нефиксированные мазки помещают в контейнер и опускают в кювету с раствором красителя - фиксатора Май-Грюнвальда на 5 мин, после чего контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой и помещают в кювету с рабочим раствором азур-эозина (по Нохту) на 8-15 мин. Затем смывают краску, перенося контейнер в кювету с водопроводной водой. Мазки высушивают на воздухе.

IV. Микроскопическое исследование.

Реактивы. Иммерсионное масло.

Диэтиловый эфир или этиловый спирт.

Оборудование. Микроскоп.

11-клавишный счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы.

Просматривают мазок крови под малым увеличением (объектив - 10х, окуляр - 7х). Подсчет лейкоцитов и оценка морфологии эритроцитов допустимы только в тонкой части мазка, где эритроциты лежат одиночно, а не сложены в "монетные столбики".

На край мазка помещают каплю иммерсионного масла, переводят на иммерсионный объектив (удобнее пользоваться при монокулярной насадке окуляром 7х, при бинокулярной насадке - окуляром 5х). Подсчет лейкоцитов ведут, отступя 2-3 поля зрения от края мазка, по зигзагу (по линии "Меандра"); 3-5 полей зрения вдоль края мазка, затем 3-5 полей зрения под прямым углом к середине мазка, потом 3-5 полей зрения параллельно краю мазка и вновь под углом 90°, возвратиться к краю мазка. Такое движение продолжают до тех пор, пока не будет сосчитана половина клеток. Затем переходят на противоположную сторону мазка и считают вторую половину клеток.

Оценка результатов. Подсчитывают только целые, неразрушенные клетки. В нормальной крови выявляются следующие формы лейкоцитов: базофилы, эозинофилы, палочкоядерные нейтрофилы, сегментоядерные нейтрофилы, моноциты, лимфоциты. При наличии в мазке крови плазматических клеток, незрелых, бластных и трудно дифференцируемых форм лейкоцитов они должны быть введены в лейкоцитарную формулу, а для последних дано описание их морфологии.

Доступ к полной версии этого документа ограничен

Ознакомиться с документом вы можете, заказав бесплатную демонстрацию систем «Кодекс» и «Техэксперт».

Что вы получите:

После завершения процесса оплаты вы получите доступ к полному тексту документа, возможность сохранить его в формате .pdf, а также копию документа на свой e-mail. На мобильный телефон придет подтверждение оплаты.

При возникновении проблем свяжитесь с нами по адресу spp@kodeks.ru

Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований

Название документа: Перечень унифицированных методов клинических лабораторных исследований

Номер документа: 1175

Вид документа: Приказ Минздрава СССР

Принявший орган: Минздрав СССР

Статус: Действующий

Дата принятия: 21 ноября 1979

Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах