9.1 Экстракция афлатоксина В
из проб зерна и продуктов его переработки, кормов и сырья для их производства, а также орехов, чая, шоколада, какао
В коническую или плоскодонную колбу вместимостью 100 см
помещают от 4,5 до 5,5 г измельченной пробы, 1 г хлористого натрия и 25 см (
, см) смеси ацетонитрил - вода по 8.2.2. После перемешивания в течение 30 мин полученную смесь оставляют на 1-2 мин в покое, затем пропускают через бумажный фильтр "красная лента" и отбирают 10 см (
, см) фильтрата. Подготовленную аликвотную порцию экстракта пробы очищают по 9.3.
9.2 Экстракция афлатоксина В из проб масложировой продукции
В коническую колбу вместимостью 100 см помещают от 2,2 до 2,8 г пробы, добавляют 5 см гексана, 1 см раствора хлорида натрия массовой концентрации 40 г/дм и 20 см ацетонитрила (общий объем водно-ацетонитрильного раствора , см, равен 21 см). Перемешивают 30 мин. Смесь переносят в делительную воронку вместимостью 50-100 см, добавляют 5 см гексана и проводят экстракцию жиров в течение 1 мин. Нижний водно-ацетонитрильный слой пропускают через бумажный фильтр "красная лента" и отбирают 10 см (, см) фильтрата. Подготовленную аликвотную порцию экстракта пробы очищают по 9.3.
9.3 Очистка фильтрата
Аликвоту фильтрата пробы (см. 9.1 и 9.2) пропускают через колонку с оксидом алюминия, подготовленную по 8.9, и собирают в остродонную колбу вместимостью 25 см. Промывают колонку 5 см ацетонитрила, собирая его в ту же колбу. Содержимое колбы упаривают в вакууме досуха.
9.4 Подготовка концентрата пробы
К сухому остатку, полученному по 9.3, добавляют 50 мм ТФУ, тщательно омывают дно колбы, закрывают стеклянной пришлифованной пробкой и выдерживают 10 мин. Остаток ТФУ отгоняют в вакууме досуха до исчезновения ее характерного запаха, сухой остаток растворяют в 1 см (
, см) подвижной фазы, перемешивают, закрывают стеклянной пришлифованной пробкой и выдерживают не менее 10 мин. Допускается растворять сухой остаток в ином объеме подвижной фазы (от 0,4 до 5,0 см(3)) в зависимости от ожидаемой концентрации афлатоксина В.
Затем к полученному концентрату добавляют 2 см гексана, добиваясь перехода маслообразного остатка в гексан. Выдерживают 5 мин и аккуратно отбирают нижний слой, используя для этого пипетку или дозатор, в подходящий сосуд, например в одноразовую пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 см (6.24). Полученный концентрат подвергают хроматографическому анализу до конца рабочего дня согласно 9.5.
9.5 Проведение хроматографических измерений
Регистрируют две хроматограммы концентрата пробы (по 9.4) в тех же условиях, при которых была проведена градуировка хроматографа (по 8.6). Идентификацию афлатоксина В проводят по совпадению времени удерживания афлатоксина В в экстракте пробы с его временем удерживания, полученным при контроле стабильности градуировочной характеристики, установив ширину окна идентификации 5%.
Пример хроматограммы приведен на рисунке Б.1 (приложение Б).
Примечание - При необходимости подтверждения правильности идентификации пика афлатоксина В рекомендуется выполнить добавку раствора афлатоксина В по 8.3.3 к концентрату пробы. О достоверности идентификации можно судить по увеличению высоты предполагаемого пика афлатоксина В. Количество добавляемого раствора афлатоксина В определяют исходя из того, что массовая концентрация афлатоксина В в пробе должна увеличиться на 50%-150% по сравнению с исходным значением.
При наличии на хроматограмме концентрата пробы пика, идентифицированного как пик афлатоксина В, вычисляют значение массовой концентрации афлатоксина В в концентрате пробы для каждой зарегистрированной хроматограммы с использованием градуировочной характеристики, установленной по 8.6, и проверяют приемлемость полученных значений, используя условие (4).
Если условие (4) выполняется, то в качестве результата измерений массовой концентрации афлатоксина В в концентрате испытуемой пробы (
, нг/см) принимают среднеарифметическое полученных значений. Если условие (4) не выполняется, то находят и устраняют причины нестабильности, после чего ввод концентрата пробы повторяют.
Если массовая концентрация афлатоксина В в концентрате превышает 50 нг/см, то концентрат разбавляют подвижной фазой (8.2.1). Коэффициент разбавления (Q) вычисляют по формуле
, (8)
где 
- объем концентрата пробы, полученного в результате разбавления, см;
- объем аликвотной порции исходного концентрата пробы, взятый для разбавления, см.
