ГОСТ Р 56698-2015 Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Изучение репродуктивной токсичности на двух поколениях лабораторных животных

     7 Гистопатологическое исследование

7.1 Животные-производители

7.1.1 У животных, давших потомство (поколения Р и F1), из указанных далее органов и тканей или их репрезентативных образцов должны быть законсервированы и храниться в соответствующей среде для последующего гистопатологического исследования:

- вагина, матка с шейкой матки и яичники (консервируют в пригодном консервирующем растворе);

- одно яичко (консервируют в фиксанале Боуина или аналогичном), один эпидидимис, семенные пузырьки, простата и прилегающие железы;

- предварительно определенные как органы-мишени животных поколений Р и F1, выбранных для спаривания.

7.1.2 Полное гистологическое исследование законсервированных органов и тканей, перечисленных в 7.1.1, следует проводить для животных, получавших высокие дозы исследуемого вещества, и контрольной группы поколений Р и F1, выбранных для спаривания. Оценка яичников животных поколения Р не является необходимой. Для получения дополнительных данных о четком определении NOAEL следует провести гистологическое исследование органов, в которых обнаружены изменения, связанные с исследуемым веществом, от животных, получавших низкие и средние дозы исследуемого вещества. Дополнительно гистопатологическому исследованию должны быть подвергнуты органы репродуктивной системы животных из групп с низкими и средними дозами исследуемого вещества, у которых было заподозрено снижение фертильности, то есть животных, которые не сумели спариться, зачать или стать производителем, или получить жизнеспособное потомство, или животных, у которых были обнаружены нарушения овариального цикла, количества сперматозоидов, их подвижности или морфологии. Должны быть исследованы все физические повреждения органов, такие как атрофия или развитие опухолей.

7.1.3 Для определения признаков фертильной токсичности, таких как неразвитые сперматиды, отсутствие типов или слоев зародышевых клеток, присутствие многоядерных гигантских клеток или присутствие сперматогенных клеток в полости, должно быть проведено тщательное гистологическое исследование (с использованием консерванта Боуина, приготовлением парафиновых препаратов и поперечных срезов толщиной 4-5 мкм) [15]. Изучение неповрежденного эпидидимиса должно включать головку, тело и хвост, а также оценку продольной секции. Орган следует изучить на наличие инфильтрации лейкоцитами, изменений превалирующего типа клеток, наличие клеток аберрантного типа и фагоцитоза сперматозоидов. Для исследования мужских половых органов можно использовать метод PAS и окрашивание гематоксилином.

7.1.4 Яичники после периода лактации должны содержать примордиальные и растущие фолликулы, а также большое желтое тело (связанное с лактацией). При гистологическом исследовании следует оценить качественное уменьшение популяции примордиальных фолликулов. Количественный подсчет примордиальных фолликулов должен быть проведен для самок поколения F1; количество животных, выбор секции яичника и выбор количества секций должны быть статистически обоснованы с учетом используемой процедуры оценки. Исследование должно включать подсчет количества примордиальных фолликулов, которое может быть скомбинировано с небольшими растущими фолликулами с целью сравнения яичников животных контрольной и опытных групп [16]-[20].

7.2 Щенки по окончании периода грудного вскармливания

Для целей гистологического исследования консервируют и хранят в подходящей среде целые дефектные ткани и органы-мишени всех щенков, у которых были обнаружены внешние дефекты или клинические симптомы, а также от не менее одного животного, выбранного случайным образом, - щенок/пол/помет из всех групп поколений F1 и F2, не отобранных для спаривания (см. 6.6.1). Должно быть проведено полное гистопатологическое исследование законсервированных тканей с особым упором на органы репродуктивной системы.