ГОСТ Р 56698-2015 Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Изучение репродуктивной токсичности на двух поколениях лабораторных животных

     4 Процедура

4.1 Количество и пол животных

Все испытуемые группы и контрольная группа должны состоять из количества животных, достаточного для получения предпочтительно не менее 20 беременных самок, достигших родов или практически достигших родов. При испытании веществ, которые вызывают токсический эффект (то есть стерилизацию, избыточный токсический эффект при высокой дозе) это может быть недостижимо. Основная задача - получить достаточное количество беременных животных для обеспечения информативной (достоверной) оценки возможного влияния вещества на фертильность, беременности, послеродовое поведение и вскармливание, рост и развитие поколения F1 от зачатия до полового созревания и развитие их потомства (поколения F2) до окончания грудного вскармливания. Таким образом, невозможность получить желаемого количества беременных самок (то есть 20) не обязательно требует прекращения исследования и должна оцениваться индивидуально для каждого случая.

4.2 Подготовка вещества для введения

4.2.1 Рекомендуется вводить исследуемое вещество внутрь (с кормом, питьевой водой или через желудочный зонд), если другой путь введения (например, накожный или ингаляционный) не будет сочтен более приемлемым.

4.2.2 При необходимости исследуемое вещество растворяют или суспензируют в пригодном растворителе. Рекомендуется, если это возможно, использовать водные растворы/суспензии (первый выбор), затем определяется возможность использования масляных растворов/суспензий (например, кукурузное масло) и затем возможность приготовления раствора с использованием других растворителей. Стабильность вещества в растворителе должна быть подтверждена.

4.3 Дозирование

4.3.1 В план исследования должны быть включены не менее 3 доз и соответствующая контрольная группа. При отсутствии ограничения по физико-химическим параметрам или биологическим эффектам исследуемого вещества выбранная наивысшая доза должна вызывать токсическое действие, но не быть летальной или вызывать тяжелые страдания. В случае неожиданной гибели животных допустимым считают исследования с уровнем смертности первого поколения Р не более 10%. Последующие меньшие дозы определяются с целью продемонстрировать любые эффекты, связанные с дозой, и уровень "отсутствия токсических эффектов" (NOAEL) или дозы, близкие к пределу обнаружения, которые позволяют определить "нетоксичную" дозу. Обычно оптимальным считается 2-4-кратный интервал между используемыми более низкими дозами, и дополнительно для 4-й испытуемой группы рекомендуется использовать очень большой интервал (более, чем десятикратное уменьшение) между дозами. Для исследований, в которых вещество смешивают с кормом, интервал между дозами не должен превышать трехкратную дозу. Уровень доз следует выбирать с учетом имеющихся токсикологических данных, в частности, результатов исследований с многократным введением вещества. Любая имеющаяся информация о метаболизме и кинетике исследуемого вещества или родственных веществ должна быть учтена. Дополнительно такая информация будет также полезна для демонстрации адекватности выбранного режима дозирования.

4.3.2 Контрольная группа должна состоять из животных, не получающих исследуемое вещество или получающих только растворитель, если растворитель используется для введения исследуемого вещества. За исключением отсутствия введения исследуемого вещества, животные контрольной группы должны подвергаться всем тем же процедурам, что и животные опытных групп. При использовании растворителя контрольная группа должна получать растворитель в максимальном используемом объеме. Если исследуемое вещество вводится вместе с кормом и вызывает снижение потребления корма или его использования, то может потребоваться использование парной контрольной группы. Альтернативно, данные из контролируемых исследований, проведенных с целью исследования влияния снижения потребления пищи на репродуктивные параметры, могут быть использованы вместо соответствующей по потреблению пищи парной контрольной группы.

4.3.3 Должны быть учтены ниже приведенные параметры растворителя и других добавок: эффект на абсорбцию, распределение, метаболизм или задержку исследуемого вещества; влияние на химические параметры исследуемого вещества, приводящее к изменению его токсикологических характеристик; и влияние на потребление воды или пищи или статус "откормленности" животных.

4.4 Предельный тест

Если при введении внутрь в одной суточной дозе не менее 1000 мг на 1 кг массы тела с кормом или с водой, эквивалентного процента, при применении процедур, описанных в настоящем стандарте, не наблюдается токсического эффекта, или токсический эффект при этой дозе не ожидается, исходя из данных о структурно и/или метаболически родственных веществах, тогда полное исследование с использованием нескольких доз может быть нецелесообразно. Предельный тест применяется, за исключением случаев, когда действие у человека показывает необходимость использования более высокой дозы при введении внутрь. При использовании других путей введения, таких как ингаляционный или местное применение, часто максимальная достижимая концентрация зависит от физико-химических характеристик исследуемого вещества, таких как растворимость.

4.5 Введение доз

4.5.1 Животные должны получать исследуемое вещество в течение 7 дней в неделю. Предпочтительным является введение внутрь (корм, питьевая вода или желудочный зонд). Если используется другой путь введения, то это должно быть обосновано, и могут потребоваться соответствующие изменения. Все животные должны получать вещество одинаковым методом в течение приемлемой продолжительности эксперимента. При введении исследуемого вещества через желудочный зонд должна использоваться соответствующая канюля. Объем одномоментно вводимой жидкости не должен превышать 1 мл/100 г массы тела животного (0,4 мл/100 г массы тела - максимальный объем для кукурузного масла), за исключением водных растворов, при которых может вводиться 2 мл/100 г массы тела. За исключением раздражающих или коррозивных веществ, у которых, как правило, наблюдаются выраженные токсические эффекты при повышенных концентрациях, вариабельность вводимого объема должна быть минимальной путем корректировки концентраций, чтобы обеспечить постоянный объем для всех уровней доз. При использовании желудочного зонда щенки обычно получают исследуемую субстанцию опосредованно через молоко до момента прямого введения после прекращения грудного вскармливания. При введении вещества с кормом или водой щенки, как правило, будут получать дополнительно испытуемое вещество, когда они начнут кормиться самостоятельно в течение последней недели периода лактации.

4.5.2 При введении веществ с кормом или питьевой водой важно обеспечить отсутствие влияния количества исследуемого вещества на нормальное питание или водный баланс у животных. При введении вещества с кормом используется или постоянная концентрация вещества в корме (ррm), или постоянный уровень дозы в отношении с массой тела животных; использование других подходов должно быть указано. При введении исследуемого веществ через желудочный зонд вводимая доза должна вводиться в одинаковое время каждый день и корректироваться еженедельно для поддержания постоянного уровня дозы в отношении массы тела животного. При расчете дозы, вводимой через зонд, по отношению к массе тела животного, необходимо учитывать информацию о плацентарном распределении.