ГОСТ EN 12014-3-2015 Продукты пищевые. Определение содержания нитрата и/или нитрита. Часть 3. Спектрофотометрический метод определения содержания нитрата и нитрита в мясных продуктах с применением ферментативного восстановления нитрата до нитрита (Переиздание)

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения испытания при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже третьей степени чистоты по EN ISO 3696. При приготовлении растворов следует принимать во внимание массовую долю основного вещества в реактиве.

4.2 Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации c(NaOH)=1 моль/дм.

4.3 Раствор Карреза I

Для приготовления раствора 150 г гексацианоферрата (II) калия растворяют в некотором количестве воды, объем раствора доводят до 1000 см водой, раствор тщательно перемешивают. Полученный раствор хранят в сосуде из темного стекла. Срок годности раствора - 2 мес.

4.4 Раствор Карреза II

Для приготовления раствора 230 г уксуснокислого цинка растворяют в некотором количестве воды, объем раствора доводят до 1000 см водой.

4.5 Реактивы для ферментативного определения нитрата

________________

Комплект для ферментативного определения нитрата и нитрита изготовляет компания Boehringer Mannheim/Roche Diagnostics, Mannheim, дистрибьютором которой является компания R-Biopharm, Дармштадт, Германия. Данная информация приведена исключительно для удобства применения настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой МГС указанного изделия. Допускается использовать аналогичные изделия при условии, что они обеспечивают сопоставимость результатов.

4.5.1 Буферный раствор на основе имидазола с рН 7,8

В мерной колбе вместимостью 100 см растворяют 0,68 г имидазола в 80 см воды. Значение рН раствора доводят до 7,8 добавлением раствора соляной кислоты молярной концентрации с(HCl)=2 моль/дм, после чего объем раствора доводят до 100 см водой.

4.5.2 Раствор тетранатриевой соли бета-никотинамидадениндинуклеотидфосфата в восстановленной форме (, массовая доля основного вещества - не менее 98%)

Растворяют 125 мг восстановленного -никотинамидадениндинуклеотидфосфата и 2,5 мг динатриевой соли флавинадининдинуклеотида с массовой долей основного вещества не менее 88% в 50 см буферного раствора имидазола по 4.5.1. Раствор используют свежеприготовленным.

4.5.3 Буферный раствор нитратредуктазы

Для приготовления раствора 11 мг лиофилизата нитратредуктазы из грибов рода Aspergillus (номер Комиссии по ферментам (ЕС) 1.6.6.2) активностью примерно 0,4 Е/мг растворяют в 10 см буферного раствора на основе имидазола по 4.5.1. В раствор добавляют 50 мг динатриевой соли дигидрата этилендиаминтетрауксусной кислоты.

________________

Обозначение международной (стандартной) единицы активности, определяемой как количество фермента, катализирующее преобразование 1 мкмоль субстрата за минуту в заданных условиях.

Срок годности раствора - 14 сут при температуре хранения 4°С.

4.6 Реактивы для проведения цветной реакции

4.6.1 Реактив 1

Реактив готовят растворением 8 г сульфаниламида в 500 см воды при нагревании на водяной бане по 5.3. Раствор охлаждают до комнатной температуры и при необходимости фильтруют, после чего в него добавляют 330 см соляной кислоты по 4.9 при постоянном перемешивании. Объем раствора доводят до 1000 см водой. Раствор стабилен в течение нескольких недель при хранении при комнатной температуре.

4.6.2 Реактив 2

0,330 г N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида растворяют в 250 см воды. Срок годности раствора - 1 неделя при хранении в сосуде из темного стекла.

4.6.3 Смешанный реактив для цветной реакции

Смешанный реактив для цветной реакции готовят в день проведения испытаний в необходимом количестве путем смешивания равных объемов реактива 1 по 4.6.1 и реактива 2 по 4.6.2.

4.7 Растворы нитрита натрия

4.7.1 Общие положения