ГОСТ 32647-2014

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Комбинированные исследования хронической токсичности и канцерогенности

OECD guidelines for the testing of chemicals. Combined chronic toxicity/carcinogenicity studies

МКС 13.020.01

Дата введения 2015-06-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ"), Техническим комитетом по стандартизации ТК 339 "Безопасность сырья, материалов и веществ" Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 марта 2014 г. N 65-П)

За принятие стандарта проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 октября 2014 г. N 1274-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32647-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2015 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD Test N 453:2009* "Комбинированные исследования хронической токсичности и канцерогенности" ("Combined Chronic Toxicity/ Carcinogenicity Studies", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)     

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Сентябрь 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
     

Введение

Руководства ОЭСР по испытаниям химических веществ (TG) периодически пересматриваются с учетом научного прогресса, изменения норм оценивания и из соображений благополучия животных. Первоначальный проект Руководства 453 был принят в 1981 году. Расширение обновленного TG 453 было необходимо для того, чтобы отразить последние изменения в сфере благополучия животных и норм регулирования [2], [3], [4], [5], [6]. Обновление TG 453 осуществлялось параллельно с исправлениями в TG 451: исследования канцерогенности и 452: исследования хронической токсичности с целью получения дополнительных данных от использованных в исследовании животных и обеспечения дальнейшей информацией по выбору дозы.

     1 Область применения

Настоящий стандарт предназначен для тестирования широкого спектра химических веществ, включая пестициды и промышленные химикаты. Следует отметить, однако, что некоторые детали и требования могут отличаться для фармацевтических препаратов (см. Руководство S1B по тестированию канцерогенности фармацевтических препаратов Международной конференции по гармонизации).

Большая часть исследований хронической токсичности и канцерогенности осуществлялась на грызунах, и поэтому данный стандарт предназначен прежде всего для исследований, осуществляемых на особях этого вида. Если бы такие исследования потребовались для особей другого вида, изложенные принципы и методы также могли бы быть использованы, с надлежащими изменениями, вместе с теми, что описаны в ОЭСР TG 409, 90-дневное исследование пероральной токсичности повторяющейся дозы у негрызунов [7], как изложено в документе N 116 Руководства ОЭСР по разработке и проведению исследований хронической токсичности и канцерогенности [8].

В исследованиях хронической токсичности/канцерогенности используются три основных способа введения: пероральный, дермальный и ингаляторный. Выбор способа введения зависит от физических и химических свойств тестируемого вещества, а также от основного пути введения в организм человека. Дополнительная информация по выбору способа введения приведена в Руководстве N 116 [8].

В настоящем стандарте основное внимание уделяется пероральному способу введения как наиболее распространенному в исследованиях хронической токсичности и канцерогенности. Хотя долгосрочные исследования, включающие накожный или ингаляционный пути введения, также могут быть востребованы для оценки риска здоровью человека и/или по определенным нормативным требованиям, оба способа введения предполагают значительную техническую сложность. Такие исследования нужно разрабатывать для каждого случая отдельно, хотя руководство, составленное здесь для оценки и анализа хронической токсичности и канцерогенности при пероральном введении, могли бы лечь в основу документа для ингаляционного и/или дермального исследований (в отношении рекомендаций по срокам терапии, клиническим и патологическим показателям и т.д.). Имеются руководства ОЭСР по введению тестируемых веществ ингаляционным [8], [9] и накожным способами [8].TG 412 [10] и TG 413 [11] вместе с методическим документом ОЭСР по исследованию острой аспирации [9] должны быть приняты во внимание при разработке более длительных исследований, затрагивающих ингаляционный способ введения. TG 410 [12] должен быть принят во внимание в случае тестирования, осуществляемого дермальным путем.

Комбинированные исследования хронической токсичности/канцерогенности дают информацию о возможной опасности для здоровья, которая может возникнуть в результате повторяющегося воздействия в течение всего жизненного цикла подопытных видов.

Исследование обеспечит получение данных о токсическом воздействии вещества, включая потенциальную канцерогенность, определит органы-мишени и возможность кумуляции. Оно может дать оценку наименьшего уровня наблюдаемого вредного воздействия для токсичных воздействий и, в случае негенотоксичных канцерогенов, для опухолевых реакций, которые могут быть использованы для установления критериев безопасности для введения человеку. Следует также подчеркнуть необходимость тщательного клинического наблюдения за животными для получения максимально возможного количества информации.

Цели исследований хронической токсичности/канцерогенности, охватываемые данным стандартом, включают:

- установление канцерогенных свойств химических веществ, проявляющихся в повышении процента новообразований, в увеличении доли злокачественных новообразований или сокращении времени появления новообразований, по сравнению с параллельными контрольными группами;

- определение времени появления новообразований;

- определение хронической токсичности химических веществ;

- определение органов-мишеней хронической токсичности и канцерогенности;

- описание зависимости "доза - реакция";

- определение наименьшего уровня наблюдаемого вредного воздействия (NOAEL) или исходной точки для установления минимальной дозы (BMD);

- экстраполяция канцерогенного влияния на человека при низких уровнях воздействия;

- прогнозирование воздействия хронической токсичности на уровне человеческого организма;

- предоставление данных для проверки гипотез относительно механизма действия [3], [8], [13], [14], [15], [16].

     2 Принцип исследования

Схема исследования состоит из двух параллельных фаз: хронической фазы и фазы канцерогенности (относительно продолжительности см. пункты 34 и 35 соответственно). Тестируемое вещество обычно вводится перорально, хотя возможно также тестирование ингаляторным или дермальным способом. Для хронической фазы тестируемое вещество вводят ежедневно градуированными дозами нескольким группам тестируемых животных, один уровень дозы на группу, как правило, в течение 12 месяцев, хотя может быть выбрана большая или меньшая продолжительность в зависимости от нормативных требований (см. пункт 34). Такая продолжительность была выбрана потому, что она достаточна для любых проявлений кумулятивной токсичности, не смешиваясь при этом с проявлениями возрастных изменений. План исследования может также включать одно или несколько промежуточных умерщвлений, например к 3 и 6 месяцам. Для этого можно добавить дополнительные группы животных (см. пункт 20). Во время канцерогенной фазы исследуемое вещество вводят ежедневно нескольким группам подопытных животных в течение большей части их жизненного цикла. Животные в обеих фазах тщательно изучаются относительно признаков токсичности и развития опухолевых поражений. Животным, которые умерли или были умерщвлены в ходе тестирования, проводится аутопсия. По окончании исследования выживших животных умерщвляют и также проводят аутопсию.

В оценке и анализе возможной канцерогенности и хронической токсичности химического вещества, до начала проведения исследования, испытательной лабораторией должна быть рассмотрена вся доступная информация по исследуемому веществу с тем, чтобы сфокусировать план исследования для более успешного тестирования его токсикологических свойств и минимизировать использование животных. Информация и рассмотрение способа действия предполагаемого канцерогена [3], [8], [13], [14], [15], [16], особенно важна, так как оптимальный план может отличаться в зависимости от того, известно ли, что вещество является генотоксическим канцерогеном или это только предполагается. Дальнейшие указания по оценке способа действия можно найти в Руководстве N 116 [8].

Данные, которые будут содействовать разработке исследования, включают: идентичность, химическая структура и физико-химические свойства исследуемого вещества; любая информация о механизме действия; результаты любых in vitro и in vivo исследований токсичности, включая тесты на генотоксичность; предполагаемое использование и вероятное воздействие на человеческий организм; доступные данные испытаний (Q)SAR на мутагенность/генотоксичность, канцерогенность и другие токсикологические свойства структурно родственных веществ; имеющиеся токсикокинетические данные (однократная доза, а также кинетика повторной дозы, при наличии) и данные, полученные из других исследований повторного воздействия. Измерение хронической токсичности может быть проведено после получения первоначальных данных о токсичности от 28-дневного и 90-дневного тестирования токсичности повторной дозы. Также полезную информацию дают краткосрочные исследования стимуляции и активизации рака. Поэтапный подход к исследованию на канцерогенность следует рассматривать как часть общей оценки возможного неблагоприятного воздействия на здоровье определенного химического вещества [17], [18], [19], [20].

Статистические методы, наиболее подходящие для анализа результатов, с учетом экспериментального плана и цели, должны быть установлены до начала исследования. Вопросы для рассмотрения включают: должна ли статистика включать в себя корректировку для выживаемости, анализ рисков кумулятивной опухоли относительно продолжительности выживания, анализ времени возникновения опухоли и анализ в случае преждевременного прекращения жизни одной или нескольких групп. Руководство по соответствующим статистическим исследованиям и ключевые ссылки на международно признанные статистические методы приведены в документе N 116 [8] Руководства, а также в документе N 35 по анализу и оценке исследования хронической токсичности и канцерогенности [21].

При проведении исследования канцерогенности руководящие принципы и соображения, изложенные в стандарте по вопросам распознавания, оценки и использования клинических симптомов, как гуманных критериев оценки для подопытных животных, используемых в оценке безопасности [22], в частности его пункт 62, всегда должен выполняться. В этом пункте говорится, что "В исследованиях с многократным введением дозы, когда животное демонстрирует прогрессирующие клинические признаки, что приводит к дальнейшему ухудшению состояния, необходимо принять решение умертвлять животное из гуманных соображений или нет. Решение должно учитывать соотношение ценности информации, которая будут получена при дальнейшем использовании этого животного в исследовании, к его общему состоянию. Если будет принято решение оставить животное в исследовании, частота наблюдений должна быть увеличена по мере необходимости. Также, можно, без ущерба для целей тестирования, временно прекратить введение дозы, если это облегчит боль или мучение, или уменьшить тест-дозу".

Подробные правила и обсуждение принципов выбора дозы для исследований хронической токсичности и канцерогенности можно найти в Руководстве N 116 [8], а также в публикациях двух Международных институтов биологических наук [23], [24]. Метод выбора основной дозы зависит от первоначальных целей или задач исследования (пункт 6). В выборе подходящего уровня дозы должен быть достигнут баланс между риском отсева с одной стороны и характеристикой ответных реакций на низкие дозы и их значимость - с другой. Это особенно актуально в случае такого комбинированного исследования хронической токсичности и канцерогенности.

Проведение комбинированного исследования хронической токсичности и канцерогенности требует большего анализа в сравнении с исследованиями хронической токсичности (ТС 452) и канцерогенности (TG 451), проводимыми раздельно. Комбинированное исследование дает большую эффективность с точки зрения времени и стоимости и небольшое сокращение подопытных животных, в сравнении с проведением двух отдельных исследований, без ущерба для качества данных, как в хронической фазе, так и в фазе канцерогенности. Тем не менее, необходимо внимательно отнестись к принципам выбора дозы (параграф 11 и 22-26) при проведении комбинированного исследования хронической токсичности и канцерогенности. Раздельные исследования могут являться необходимыми по определенным нормативным требованиям. Дальнейшие указания по разработке исследования комбинированной хронической токсичности и канцерогенности для достижения максимальной эффективности исследования с точки зрения возможности сокращения численности подопытных животных, а также через упорядочение различных экспериментальных методик можно найти в Руководстве N 116.

     3 Описание метода

3.1 Животные

3.1.1 Выбор видов

Данный стандарт охватывает главным образом оценку и анализ хронической токсичности и канцерогенности у грызунов (см. пункт 2). Использование негрызунов может рассматриваться, если имеющиеся данные позволяют предположить, что они являются более значимыми для прогнозирования воздействия на здоровье человека. Выбор вида должен быть обоснован. Предпочтительным видом грызунов являются крысы, хотя могут использоваться и другие виды, например, мыши. Хотя использование мышей в тестировании на канцерогенность может иметь ограниченное применение [25], [26], [27], по некоторым действующим нормативным документам все же требуется исследование канцерогенности на мышах. Крысы и мыши были выбраны в качестве экспериментальных моделей за их сравнительно короткую продолжительность жизни, широкое применение в фармакологических и токсикологических исследованиях, их восприимчивость к индукции новообразований и доступность этих хорошо исследованных видов. Вследствие этих качеств, имеется большое количество информации об их психологии и патологии. Разработка и проведение исследований хронической токсичности и канцерогенности на видах не-грызунов, когда это необходимо, должны быть основаны на принципах, содержащихся в этом стандарте, а также в ОЭСР TG 409: исследование токсичности повторной дозы, введенной перорально через 90 дней у негрызунов [7]. Дополнительная информация по выбору видов и рода содержится в Руководстве N 116 [8].

Следует использовать молодых здоровых половозрелых животных лабораторных видов. Комбинированные исследования хронической токсичности и канцерогенности следует проводить на животных того же рода и того же происхождения, что и животные, использовавшиеся в предварительных токсикологических исследованиях небольшой продолжительности, хотя, если известно, что животные этого вида и происхождения имеют проблемы в достижении общепринятых критериев выживаемости для долгосрочных исследований (см. Руководство N 116 [8]), следует рассмотреть использование рода животного, имеющего приемлемый уровень выживаемости для долгосрочного исследования. Женские особи должны быть нерожавшими и не беременны.

3.1.2 Условия содержания и кормления

Животные могут жить отдельно или содержаться в клетках небольшими группами одного пола. Отдельное проживание следует применять только если это научно обосновано [17], [18], [19]. Клетки надо размещать таким образом, чтобы свести к минимуму возможное влияние их местоположения. Температура в помещении с экспериментальными животными должна быть (22 ±3)°С. Хотя относительная влажность должна быть как минимум 30% и не должна превышать 70% (если только не проводится уборка помещения), оптимальная влажность составляет 50%-60%. Свет должен быть искусственным, с последовательностью 12 часов - свет, 12 часов - темнота. Для кормления могут использоваться традиционные лабораторные диеты с неограниченным количеством питьевой воды. Диета должна отвечать всем требованиям питания тестируемого вида. Содержание загрязняющих веществ, которые могут повлиять на результаты исследования, включая остатки пестицидов, стойкие органические загрязнители, фитоэстрогены, тяжелые металлы и микотоксины и т.д., должно быть по возможности минимизировано. Аналитические данные по питанию и уровню загрязняющих веществ в пище должны собираться периодически, как минимум, в начале исследования и когда меняется используемая партия, и их следует включать в заключительный отчет. Должны также предоставляться аналитические данные по питьевой воде, используемой в исследовании. На выбор пищи может влиять необходимость введения примеси и удовлетворение пищевых потребностей животных, когда исследуемое вещество вводится в диетический рацион.

3.1.3 Подготовка