ГОСТ 31926-2013 Средства лекарственные для ветеринарного применения. Методы определения безвредности (с Изменением N 1)

     13 Определение бактериальных эндотоксинов

Бактериальные эндотоксины определяют в инъекционных лекарственных средствах, предназначенных для парентерального и интратекального применения, и в субстанциях, используемых для их изготовления. Метод дает возможность проводить постадийный контроль содержания эндотоксинов в процессе производства инъекционных лекарственных средств.

Содержание бактериальных эндотоксинов выражается в единицах эндотоксина (ЕЭ) международного стандарта эндотоксина.

Определение содержания бактериальных эндотоксинов проводят с использованием реактива, представляющего собой лизат клеток крови (амебоцитов) мечехвоста Limulus polyphemus (ЛАЛ-реактив) или Tachypleus tridentatus (ТАЛ-реактив). В основе метода лежит способность амебоцитов мечехвоста специфически реагировать с эндотоксинами грамотрицательных бактерий (липополисахаридами, ЛПС).

В результате реакции с эндотоксином происходит помутнение прозрачной реакционной смеси и увеличение ее вязкости вплоть до формирования плотного геля, образование которого служит индикатором наличия в пробе бактериальных эндотоксинов.

Проводимый таким образом анализ называется гель-тромб тест. Этот анализ позволяет количественно определить содержание бактериальных эндотоксинов в испытуемом препарате (количественный анализ) или оценить, соответствует ли содержание эндотоксинов предельному значению, установленному для испытуемого препарата (качественный анализ).

Качественный анализ является основным методом проведения анализа по показателю "Бактериальные эндотоксины", этот же анализ является арбитражным.

Возможно проведение определения содержания бактериальных эндотоксинов иными методами или модификациями при условии, что результаты не противоречат результатам основного метода.

Метод определения бактериальных эндотоксинов с помощью ЛАЛ-реактива является альтернативным, наряду с ним могут быть использованы и другие методы (определение пирогенности на кроликах).

13.1 Подготовка к испытанию

13.1.1 Подготовка посуды

Стеклянная и пластиковая посуда, используемая в ЛАЛ-тесте, не должна содержать бактериальные эндотоксины в количествах, определяемых в тесте, и не должна оказывать влияния на ход реакции. Посуда может быть депирогенизирована при температуре 250 °С не менее 30 мин.

13.1.2 Стандарты эндотоксина

Содержание бактериальных эндотоксинов выражается в единицах эндотоксина (ЕС)* международного стандарта эндотоксина. При проведении анализа используют контрольный стандарт эндотоксина (КСЭ), активность которого установлена по международному стандарту эндотоксина.

________________

* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

Контрольный стандарт эндотоксина предназначен для проведения анализа с данной партией ЛАЛ-реактива (ТАЛ-реактива). Контрольный стандарт эндотоксина и ЛАЛ-реактив или ТАЛ-реактив должны быть зарегистрированы уполномоченным органом. Растворение и хранение КСЭ осуществляют согласно инструкции фирмы-производителя.

13.1.2.1 ЛАЛ-реактив

Используют ЛАЛ-реактив, предназначенный для проведения фармакопейного анализа с помощью гель-тромб теста. В случае проведения анализа методом, отличным от основного, необходимо использовать реактив, предназначенный для данного метода.

Чувствительность реактива () выражается в единицах эндотоксина [ЕЭ/см (ЕС/мл)] и соответствует минимальной концентрации международного стандарта эндотоксина, которая вызывает образование плотного геля при реакции с данным реактивом. ЛАЛ-реактив представляет собой лиофилизированный препарат. Растворение и хранение ЛАЛ-реактива осуществляют согласно инструкции фирмы-производителя.

13.1.2.2 Вода для ЛАЛ-теста

Вода для ЛАЛ-теста должна соответствовать требованиям, предъявляемым к воде для инъекций, и при этом не должна содержать бактериальные эндотоксины в количествах, определяемых в тесте.

13.1.3 Максимально допустимое разведение испытуемого лекарственного средства

Максимально допустимое разведение (МДР) - это наибольшее разведение испытуемого лекарственного средства, в котором возможно определение концентрации эндотоксина, соответствующей значению предельного содержания бактериальных эндотоксинов, установленному для данного лекарственного средства

,                                                    (2)

где - предельное содержание бактериальных эндотоксинов: допустимое содержание бактериальных эндотоксинов в испытуемом лекарственном средстве, указанное в нормативном документе на конкретное лекарственное средство;

- концентрация испытуемого раствора: концентрация лекарственного средства или действующего вещества, для которого указано предельное содержание бактериальных эндотоксинов;

- чувствительность ЛАЛ-реактива, ЕЭ/см.