ГОСТ 31769-2012 Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен (Переиздание)

     8 Проведение испытаний

8.1 Подготовка к испытаниям

8.1.1 Глицериновый желатин готовят следующим образом: 10 г желатина по ГОСТ 11293 заливают 60 см дистиллированной воды по ГОСТ 6709 и выдерживают 2-3 ч для набухания (смесь 1); в 70 см глицерина по ГОСТ 6259 растворяют 0,1 г фенола по ГОСТ 23519, вливают в смесь 1 и, перемешивая, нагревают на водяной бане до образования однородной массы. При этом следует избегать попадания в глицериновый желатин пузырьков воздуха.

8.2 Приготовление препарата меда

8.2.1 В стакане по ГОСТ 25336 взвешивают (10,0±0,1) г меда, подготовленного по разделу 4, растворяют в 20 см дистиллированной воды, нагретой до температуры не выше 40°С, и переносят в центрифужную пробирку по ГОСТ 25336. Раствор центрифугируют в течение 10 мин при ускорении 1000 g.

8.2.2 Надосадочную жидкость осторожно сливают, к осадку добавляют 20 см дистиллированной воды и перемешивают. Полученную суспензию центрифугируют 5 мин при 1000 g. Надосадочную жидкость декантируют, центрифужную пробирку помещают на фильтровальную бумагу под углом 45° для удаления остатков жидкости.

8.2.3 Осадок тщательно перемешивают микробиологической петлей или с помощью дозатора со сменным наконечником, переносят на предварительно прогретое до 40 °C предметное стекло по ГОСТ 9284 и равномерно распределяют по площади 22х22 мм микрошпателем или гранью покровного стекла по ГОСТ 6672. Стекло с осадком прогревают при температуре не выше 40 °C до полного высушивания осадка.

________________

Рекомендуется применять дозатор со сменным наконечником, чтобы избежать попадания в препарат пыльцы из других образцов меда.

8.2.4 Глицериновый желатин по 8.1.1 расплавляют на водяной бане при температуре не выше 40°C. На предварительно прогретое до температуры 40°C покровное стекло наносят каплю глицеринового желатина и распределяют крестообразно по диагоналям. Покровное стекло медленно (во избежание появления воздушных пузырьков) опускают на подсушенный осадок. Для равномерного распределения глицеринового желатина и оптимального набухания пыльцы препарат прогревают в течение 5 мин при температуре не выше 40°C. Глицериновый желатин нельзя наносить непосредственно на высохший осадок.

Просмотр препарата под микроскопом проводят после застывания глицеринового желатина.

8.2.5 Если в препарате обнаружена низкая плотность пыльцевых зерен, то его готовят вновь из большего количества меда, сохраняя при этом пропорции, указанные в 8.2.1. В случае высокого содержания пыльцы препарат готовят из части осадка, полученного по 8.2.2. Для этого пипеткой по ГОСТ 29227 или дозатором перемешивают осадок в центрифужной пробирке с 0,5-1,0 см воды. Необходимое количество суспензии равномерно распределяют по предметному стеклу и высушивают, как описано в 8.2.3.

8.3 Подсчет пыльцевых зерен

8.3.1 При предварительном просмотре под микроскопом по 6.4 оценивают плотность и разнообразие пыльцевых зерен в препарате, проводят идентификацию присутствующих морфологических типов пыльцевых зерен. Увеличение микроскопа должно быть достаточным для достоверной идентификации.

8.3.2 При подсчете пыльцевых зерен подбирают такое увеличение микроскопа, чтобы их число в каждом поле зрения было счетным. Скопления пыльцевых зерен, которые относятся к перге, не учитывают.

8.3.3 Поля зрения, в которых проводят подсчет (счетные поля), должны быть, по возможности, равномерно распределены по рядам. При смене счетного поля, во избежание субъективного выбора, препарат рекомендуется перемещать без наблюдения в окуляр микроскопа. Интервал между счетными полями зависит от плотности пыльцевых зерен в препарате. В случае анализа меда с низким содержанием пыльцы следует подсчитывать одну непрерывную линию.

8.3.4 По каждому ряду подсчитывают не менее 100 пыльцевых зерен. Первые пять рядов распределяют равномерно по площади препарата, как изображено на рисунке 1. Таким образом, сумма подсчитанных пыльцевых зерен должна составлять не менее 500.

8.3.5 В каждом счетном поле подсчитывают количество пыльцевых зерен искомого(ых) вида(ов) растений , а также общее количество пыльцевых зерен , принадлежащих:

- всем видам растений;

- видам растений, выделяющих нектар, без подсчета пыльцевых зерен видов, не выделяющих нектар (перечень не выделяющих нектар растений приведен в приложении А);

- видов растений, выделяющих нектар, без подсчета пыльцевых зерен отдельного(ых) вида(ов).

     
Рисунок 1 - Схема расположения счетных полей при подсчете пыльцевых зерен под микроскопом

Вариант подсчета числа пыльцевых зерен выбирает исполнитель в зависимости от целей исследования.

8.3.6 Если для интерпретации результатов недостаточно 500 учтенных пыльцевых зерен, следует подсчитывать не менее 1000 пыльцевых зерен. Для этого дополнительные пять рядов счетных полей размещают между первыми пятью рядами, как изображено на рисунке 1.