• Текст документа
  • Статус
  • Сканер копия
Действующий


ГОСТ 31772-2012

Группа С52

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОПОЛИС

Антимикробная активность

Propolis.

Antimicrobial activity

МКС 65.140

Дата введения 2013-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Обществом с ограниченной ответственностью "Центр исследований и сертификации "Федерал" и Государственным научным учреждением Научно-исследовательским институтом пчеловодства Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИП Россельхозакадемии).

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 1 октября 2012 г. N 51)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MD

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт


4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1661-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31772-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.

5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53124-2008

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомления и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения


Настоящий стандарт распространяется на прополис и устанавливает метод определения минимальной подавляющей концентрации водно-спиртового экстракта прополиса (в пересчете на сухой экстракт) в диапазоне измерений от 100 до 600 мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность для характеристики его антимикробной активности.

Требования к контролируемому показателю установлены в ГОСТ 28886.

2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ ISO 5725-1-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ISO 5725-1-2002, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

ГОСТ ISO 5725-6-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ISO 5725-6-2002, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ISO 7218-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 24104-2001* Весы лабораторные. Общие технические требования
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть1. Метрологические и технические требования. Испытания".


ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25629-83 Пчеловодство. Термины и определения

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 28886-90 Прополис. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения


В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 25629, ГОСТ ISO 5725-1, а также следующий термин с соответствующим определением:

3.1 минимальная подавляющая концентрация: МПК (minimal inhibitory concentration): Минимальная концентрация антимикробного агента в среде культивирования, вызывающая полное подавление видимого невооруженным глазом роста микроорганизма.

4 Отбор и подготовка пробы


Отбор и подготовка пробы - по ГОСТ 28886 (пункт 3.1.1).

5 Требования безопасности проведения работ


При проведении испытаний необходимо соблюдать требования безопасности при работе с микроорганизмами III-IV групп патогенности в соответствии с установленными санитарными правилами и нормами, гигиеническими нормативами, действующими на территории государства, принявшего стандарт.

6 Средства измерения, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы

6.1 Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,001 г по ГОСТ 24104.

6.2 Термометр жидкостный стеклянный с допускаемой погрешностью ±1 °С в диапазоне измерения от 0 °С до 70 °С по ГОСТ 28498.

6.3 Часы механические по ГОСТ 3145.

6.4 Дозатор ручной пипеточный одноканальный с диапазоном объемов дозирования от 0,02 до 0,2 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность.

6.5 Цилиндры 3-10-2, 3-100-2, 3-1000-2 по ГОСТ 1770.

6.6 Пипетки вместимостью 5 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность по ГОСТ 29227.

6.7 Термостат для культивирования микроорганизмов при температуре (36±1) °С.

6.8 Аппарат для встряхивания жидкости в колбах и пробирках с диапазоном частот колебаний штатива от 100 до 150 колебаний в минуту, амплитудой колебаний (25±5) мм.

6.9 Роторный испаритель.

6.10 Баня водяная с терморегулятором с диапазоном поддерживаемой температуры от 40 °С до 55 °С и точностью регулировки температуры ±2 °С.

6.11 Колбы Кн-1-250-29/32, К-1-10-14/23 по ГОСТ 25336.

6.12 Воронка лабораторная В-75-110 ХС по ГОСТ 25336.

6.13 Пробирки П1-21-200 по ГОСТ 25336.

6.14 Чашки Петри по ГОСТ 25336, номинальным диаметром 100 мм или чашки одноразовые стерильные из полимерных материалов номинальным диаметром от 90 до 100 мм.

6.15 Шпатели бактериологические стеклянные или стерильные из полимерных материалов.

6.16 Фильтры обеззоленные (синяя лента).

6.17 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

6.18 Спирт этиловый по ГОСТ 5962.

6.19 Агар питательный сухой.

6.20 Агар Мюллера-Хинтона сухой.

6.21 Физиологический раствор по ГОСТ 10444.1 (подраздел 4.29).

6.22 Культура Staphylococcus aureus, штамм 209р (FDA 209р, АТСС 6538Р).

6.23 Стандарт мутности 1,0 по MacFarland или стандартный образец мутности бактерийных взвесей БАК-10 с аттестованным значением оптической плотности (0,36±0,01) ед.оптической плотности.

6.24 Вспомогательное оборудование для проведения микробиологических исследований, измерительное оборудование и тесты для контроля качества проведения микробиологических исследований по ГОСТ ISO 7218.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

7 Подготовка к испытаниям

7.1 Приготовление 70%-ного водного раствора этилового спирта

В цилиндр вместимостью 1000 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность по ГОСТ 1770 вносят 730 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность этилового спирта по ГОСТ 5962 и доводят объем дистиллированной водой по ГОСТ 6709 до 1000 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность.

7.2 Приготовление водно-спиртового экстракта прополиса

В колбу вместимостью 250 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность по ГОСТ 25336 вносят навеску прополиса (5,0±0,5) г и 100 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность 70%-ного водного раствора этилового спирта, приготовленного по 7.1, закрывают корковой пробкой и экстрагируют на аппарате для встряхивания по 6.8 при комнатной температуре в течение (24±1) ч. Содержимое колбы фильтруют через бумажный складчатый фильтр по 6.16. Экстракт прополиса (ЭП) хранят в темном месте при температуре не выше 25 °С.

7.3 Подготовка к микробиологическим исследованиям

Подготовку стерильной посуды и материалов, контроль работы испытательного оборудования, приготовление питательных сред и обеззараживание посевов тест-культуры проводят в соответствии с ГОСТ ISO 7218 и инструкциями производителей.

7.4 Приготовление тест-культуры

Культуру Staphylococcus aureus по 6.22 выращивают в течение (24±2) ч на питательном агаре (см.6.19) при температуре (36±1) °С. В физиологическом растворе по ГОСТ 10444.1 готовят суспензию клеток S.aureus, соответствующую 10ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность клеток/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность по стандарту мутности (см.6.23). Из исходной суспензии тремя 10-кратными разведениями в физиологическом растворе получают взвесь тест-культуры плотностью 10ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность клеток/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность.

8 Проведение испытания

8.1 Круглодонную колбу вместимостью 10 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность по ГОСТ 25336 взвешивают с записью результата до третьего десятичного знака, пипеткой вместимостью 5 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность по ГОСТ 29227 вносят 4 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность ЭП, приготовленного по 7.2. Растворитель отгоняют на роторном испарителе при (45±2) °С до постоянного веса (разность между двумя последовательными взвешиваниями не превышает 0,001 г). Массу сухого экстракта рассчитывают как разность веса колбы с сухим экстрактом и пустой колбы.

8.2 В стерильные пробирки П2-21-200 по ГОСТ 25336 стерильным цилиндром вместимостью 10 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность по ГОСТ 1770 наливают по 10 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность расплавленного агара Мюллера-Хинтона (МХА), приготовленного по 7.3, и выдерживают на водяной бане по 6.10 при (52±2) °С для выравнивания температуры. В МХА дозатором по 6.4 вносят ЭП в объеме 0,02; 0,04; 0,06; ...; 0,20 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри по 6.14.

В чашки с застывшей средой, содержащей ЭП, вносят по 0,1 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность взвеси тест-культуры S.aureus, приготовленной по 7.3, и равномерно распределяют по поверхности среды стерильным шпателем по 6.15. Для контроля ростовых качеств среды и жизнеспособности тест-культуры производят посев на МХА без добавления ЭП; для проверки отсутствия подавления растворителем роста тест-культуры производят посев на МХА с добавлением 70%-ного водного раствора этилового спирта в объеме, равном максимальному добавленному объему ЭП. Чашки с засеянной средой культивируют при (36±1) °С и через (24±1) ч учитывают наличие роста.

8.3 В случае, если рост тест-культуры наблюдается при всех концентрациях ЭП и значение МПК определить не удается, испытание по 8.2 повторяют, увеличивая количество вносимого в среду экстракта, но не более чем до 0,3 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность.

9 Обработка и представление результатов

9.1 Значение МПК прополиса в пересчете на сухой экстракт ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, рассчитывают по формуле

ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, (1)

где ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность - минимальное количество экстракта прополиса, подавляющее рост тест-культуры на среде культивирования по 8.2, смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность;

10ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность - объем среды культивирования, смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность;

ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность - масса сухого экстракта прополиса, полученная по 8.1, г;

4ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность - объем ЭП, высушенного по 8.1, смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность;

10ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность - коэффициент для пересчета граммов в микрограммы.

Пример - Масса сухого экстракта, полученной по 8.1, составила 0,243 г. После культивирования по 8.2 рост тест-культуры отсутствовал в чашках с добавлением водно-спиртового экстракта в объеме 0,06 смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность и более. Результат вычислений по формуле (1) составляет:

ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность (мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность).

МПК прополиса в пересчете на сухой экстракт учитывают в виде "364,5 мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность".

9.2 За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, если абсолютное расхождение между ними не превышает предел повторяемости ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность по ГОСТ ISO 5725-6. Значение предела повторяемости ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность приведено в таблице 1.


Таблица 1

Минимальная подавляющая концентрация ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность

Предел повторяемости ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность

Критический диапазон при трех измерениях ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность

Предел воспроизводимости ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность

От 100 до 600 включ.

0,18ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность

0,21ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность

0,35ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность



При превышении предела повторяемости ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность целесообразно произвести дополнительное определение МПК прополиса и получить еще один результат. Если при этом расхождение (ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность) не превосходит результатов трех определений, значения критического диапазона ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, то в качестве окончательного результата принимают среднеарифметическое значение результатов трех определений. Значение критического диапазона ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность приведено в таблице 1.

При невыполнении этого условия проводят повторные испытания.

9.3 Абсолютное расхождение между результатами испытаний, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости, не должно превышать предела воспроизводимости ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность по ГОСТ ISO 5725-6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата испытания и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение. Значение предела воспроизводимости ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность приведено в таблице 1.

9.4 Результат измерений, округленный до целого числа, в диапазоне измерений от 100 до 600 мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде

ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, при ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность,

где ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность - среднеарифметическое значение результатов определений по 9.2, мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность;

ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность - границы абсолютной погрешности результатов определений по разделу 10, мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность.

В случае, если результат измерений превышает 600 мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность, его представляют в виде "Более 600 мкг/смГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность".

10 Характеристика погрешности испытания


Границы абсолютной погрешности результатов испытаний, получаемых согласно данному методу, при доверительной вероятности ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность0,95, ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность.

11 Оформление результатов испытаний


Результаты испытаний оформляют записью и протоколом.


_________________________________________________________________________________
УДК 638.16:006.354 МКС 65.140 С52

Ключевые слова: прополис, водно-спиртовый экстракт прополиса, антимикробная активность, минимальная подавляющая концентрация, агар Мюллера-Хинтона, тест-культура Staphylococcus aureus 209р
_________________________________________________________________________________



Электронный текст документа
подготовлен ЗАО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2014

ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность

Название документа: ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность

Номер документа: 31772-2012

Вид документа: ГОСТ

Принявший орган: Росстандарт

Статус: Действующий

Опубликован: М.: Стандартинформ, 2014 год

официальное издание

Дата принятия: 29 ноября 2012

Дата начала действия: 01 июля 2013
ГОСТ 31772-2012 Прополис. Антимикробная активность
Данный документ представлен в виде сканер копии, которую вы можете скачать в формате или
Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах