ГОСТ Р 54742-2011

Группа Н59

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ

Определение нарингина и неогесперидина в апельсиновом соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Juice products. Determination of naringin and neohesperidin in orange juice by high-performance liquid chromatography

ОКС 67.080.10

ОКСТУ 9109

Дата введения 2013-01-01

     

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004* "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 1.0-2012. - Примечание изготовителя базы данных.

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Академическим центром сертификации и стандартизации продуктов питания (ОАО "Академсертификат")

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки фруктов, овощей и грибов"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. N 917-ст

4 В настоящем стандарте учтены:

основные положения международного стандарта CODEX-STAN 247-2005* "Общий стандарт на фруктовые соки и нектары" (CODEX-STAN 247-2005 "Codex general standard for fruit juices and nectars") в части методов анализа и отбора проб соковой продукции;

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

основные нормативные положения и метрологические характеристики документа АОАС Официальный метод 999.05 "Нарингин и неогесперидин в апельсиновом соке. Метод жидкостной хроматографии", 1999 (AOAC Official Method 999.05 "Naringin and Neohesperidin in Orange Juice. Liquid chromatography method", 1999)

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на соковую продукцию в части апельсинового сока и устанавливает метод определения флавоноидов нарингина и неогесперидина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) в диапазоне содержания от 5 до 50 мкг/см.

Результаты межлабораторных испытаний приведены в таблицах А.1 и А.2 (приложение А) к настоящему стандарту.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 18270-72 Кислота уксусная особой чистоты. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При использовании настоящего стандарта целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Сущность метода

Метод основан на предварительном фильтровании анализируемой пробы для удаления нерастворимых частиц и последующем хроматографическом определении нарингина и неогесперидина на аналитической колонке, содержащей адсорбент - силикагель . Детектирование нарингина и неогесперидина после выхода из аналитической колонки осуществляют спектрофотометрическим способом при длине волны 280 нм.

     4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

4.1 Хроматограф для ВЭЖХ. Хроматографическая система для ВЭЖХ, состоящая из насоса, ручного или автоматического инжектора, спектрофотометрического детектора с возможностью регистрации фракций в ультрафиолетовой области спектра, интегратора или программно-аппаратного комплекса для обработки результатов хроматографического разделения.

Для проведения определения на хроматографе ВЭЖХ используют следующие режимы:

- скорость потока 1,0 см/мин;

- объем пробы 20 мкл (40 мкл в случае разбавления пробы перед определением);

- регистрация фракций спектрофотометрическим способом при длине волны 280 нм на детекторе с разрешением не хуже 0,05 ед. оптической плотности;

- термостатируемые условия хроматографического определения для обеспечения температурного интервала от 25 до 30 °С.

4.2 Колонка аналитическая. Для хроматографического разделения используют аналитическую колонку, содержащую адсорбент с иммобилизованным кварцевым наполнителем с высокой степенью очистки и низким уровнем металлических примесей.

Новая аналитическая колонка должна иметь следующие характеристики:

- эффективность колонки (), рассчитываемая по формуле (1), равна для нарингина 2000:

,                                                   (1)

где - время удерживания пика, с;

- ширина пика на половине высоты, с.

Разрешение колонки для двух пиков () нарингина и гесперидина составляет 1,5. Расчет значения разрешения колонки проводят по формуле

.                               (2)

Показатель симметричности пиков () для гесперидина принимает значения от 0,9 до 1,4. Расчет симметричности пиков проводят по формуле

,                                                          (3)

где - ширина пика слева от перпендикуляра на 10% высоты пика, с;     

- ширина пика справа от перпендикуляра на 10% высоты пика, с.

Фактор удерживания () для неогесперидина не превышает 10. Расчет фактора удерживания проводят по формуле

,                                                  (4)

где - время удерживания пика, с;

- нулевое время (время для прохождения растворителя через колонку от узла ввода пробы до кюветы детектора), с.

Для проведения хроматографического определения применяют следующие колонки (без использования уксусной кислоты в подвижной фазе):

- колонка аналитическая с размером частиц 5 мкм, длиной 150 мм и внутренним диаметром 4,6 мм при скорости потока 1 см/мин;

_______________

В качестве данной колонки может быть использована колонка модельного ряда Kromasil (Higgins Analytical, США, номер по каталогу изготовителя KS-1546-С185) или аналогичная. Указанное оборудование рекомендуется для применения. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что настоящий стандарт устанавливает требование об обязательном применении данного оборудования.

- колонка аналитическая* с размером частиц 5 мкм, длиной 150 мм и внутренним диаметром 3 мм при скорости потока 0,5 см/мин;

_______________

* В качестве данной колонки может быть использована колонка модельного ряда Prodigy (Phenomenex, США, номер по каталогу изготовителя 00F-4097-Y0) или аналогичная. Указанное оборудование рекомендуется для применения. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что настоящий стандарт устанавливает требование об обязательном применении данного оборудования.

- колонка аналитическая* ODS-2 с размером частиц 5 мкм, длиной 150 мм и внутренним диаметром 4 мм при скорости потока 0,8-1,0 см/мин.

_______________

* В качестве данной колонки может быть использована колонка модельного ряда Intersil ODS-2 (SGE, США, номер по каталогу изготовителя 2070210) или аналогичная. Указанное оборудование рекомендуется для применения. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что настоящий стандарт устанавливает требование об обязательном применении данного оборудования.

Для хроматографического определения могут быть применены и другие колонки с адсорбентом , но в этом случае необходимо добавлять уксусную кислоту в подвижную фазу для обеспечения требуемой симметрии пиков и эффективности хроматографического разделения.

4.3 Колонка предварительная. В качестве предварительной колонки может быть использована любая колонка, содержащая адсорбент с иммобилизованным высококачественным кварцевым наполнителем с низким уровнем металлических примесей.

4.4 Фильтры мембранные размером 25 мм и порами диаметром 0,45 мкм, снабженные предварительным фильтром из стеклянного волокна (при разбавлении анализируемой пробы 40%-ным водным раствором ацетонитрила в соотношении 1:1). Если анализируемые пробы фильтруют без предварительного разбавления, то для удаления нерастворимых частиц используют мембранные фильтры размером 25 мм и размером диаметра пор 0,2 мкм. Для фильтрования в этом случае применяют также мембранные фильтры из ацетата целлюлозы.

4.5 Центрифуга с возможностью центрифугирования жидких проб при 10000 g при температуре 25 °С.

4.6 Ацетонитрил, ч.д.а.

4.7 Деионизированная или бидистиллированная вода.

4.8 Кислота уксусная по ГОСТ 18270, о.с.ч.

4.9 Диметилформамид, ч.д.а.

4.10 Диметилсульфоксид, ч.д.а.

4.11 Подвижная фаза - смесь водного раствора уксусной кислоты и ацетонитрила в соотношении 81:19.

4.12 Гесперидин, ч.д.а.

4.13 Неогесперидин, ч.д.а.

4.14 Нарингин, ч.д.а.

4.15 Колбы мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 100, 1000 и 2000 см.