ГОСТ Р 54950-2012 (ИСО 14565:2000) Корма для животных. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     9 Проведение испытания*

_______________

* Слово "испытания" в наименовании раздела 9 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

9.1 Общие положения

Ввиду чувствительности витамина А к УФ-излучению и воздуху все операции выполняют в местах, защищенных от сильного естественного и люминесцентного освещения, и по возможности быстро и аккуратно. Рекомендуется использовать янтарное стекло.

Каждое испытание должно проводиться в течение одного рабочего дня.

Омыление и экстракцию стандартного образца ретинил-ацетата и анализируемых проб выполняют одновременно.

9.2 Омыление

На лабораторных весах (см. 6.10) взвешивают (50±0,1) г пробы, подготовленной по 8, и помещают в коническую колбу вместимостью 1000 см (см. 6.11).

К анализируемой пробе добавляют при помощи цилиндра (см. 6.20) 200 см этилового спирта (см. 5.3) и помешивают колбу круговыми движениями, чтобы проба диспергировала.

В коническую колбу с анализируемой пробой добавляют 2 см раствора аскорбата натрия (см. 5.10), 50 см раствора гидроокиси калия (см. 5.2) и снова помешивают колбу круговыми движениями. Подсоединяют к колбе обратимый холодильник (см. 6.12) и погружают колбу в кипящую водяную баню (см. 6.3).

Колбу с содержимым и обратимым холодильником выдерживают на кипящей бане в течение 60 мин, время от времени помешивая круговыми движениями.

Колбу извлекают из бани и охлаждают до комнатной температуры под струей холодной воды как можно быстрее.

9.3 Экстракция витамина А (ретинола)

9.3.1 Содержимое колбы переносят в цилиндр для экстракции (см. 6.5.1), ополаскивают колбу для омыления двумя порциями по 25 см этилового спирта или технического метилированного спирта (см. 5.3) и переносят их в цилиндр.

Повторяют ополаскивание колбы двумя порциями по 125 см петролейного эфира (см. 5.5) и одной порцией 250 см дистиллированной воды (см. 5.1), каждый раз перенося ополаскивающие порции в цилиндр. Закрывают цилиндр пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин, время от времени сбрасывая давление.

Охлаждают цилиндр под струей холодной воды.

После разделения двух жидких фаз пробку вынимают, смывают боковые стороны пробки небольшим количеством петролейного эфира и вставляют в цилиндр насадку (см. 6.5.2) с регулируемой сифонной трубкой (см. 6.5.3), располагая нижний открытый конец трубки таким образом, чтобы он располагался прямо над уровнем границы разделения двух фаз.

Путем приложения через отводную трубку небольшого давления с помощью инертного газа (см. 5.11) переносят верхний слой петролейного эфира в делительную воронку вместимостью 1000 см (см. 6.13).

9.3.2 В цилиндр для экстракции добавляют 125 см петролейного эфира, закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин. Дают слоям разделиться и переносят верхний слой в ту же делительную воронку с помощью регулируемой трубки как описано в 9.3.1.

9.3.3 Повторяют этап экстракции витамина А по 9.3.2.

9.3.4 Объединенные экстракты петролейного эфира промывают четырьмя порциями по 100 см дистиллированной воды, сначала немного наклоняя делительную воронку из стороны в сторону, потом слегка встряхивая, чтобы свести к минимуму образование эмульсии.

9.3.5 Промытый экстракт через воронку для фильтрования (см. 6.14), заправленную фильтровальной бумагой средней или быстрой фильтрации (см. 6.15) со слоем 60 г безводного сернокислого натрия (см. 5.9), переносят в круглодонную колбу (см. 6.16), подходящую для вакуумного выпаривания.

Делительную воронку споласкивают двумя порциями по 20 см петролейного эфира и добавляют их через фильтр в колбу для выпаривания.

Промывают фильтр еще двумя порциями по 25 см петролейного эфира и добавляют их в колбу для выпаривания.

9.3.6 Петролейный эфир выпаривают из экстракта досуха на роторном испарителе (см. 6.4) под вакуумом при температуре не выше 40 °С. Атмосферное давление восстанавливают с помощью инертного газа (см. 5.11).

Примечание - Нумерация пунктов введена с целью использования ссылок на повторяющиеся этапы испытаний.

9.4 Высокоэффективная жидкостная хроматография

9.4.1 Остаток (см. 9.3.6) растворяют в минимальном объеме 2-пропанола (см. 5.4) и переносят количественно в мерную колбу вместимостью 20 см (см. 6.21).

Колбу для выпаривания ополаскивают тремя небольшими порциями 2-пропанола, перенося смывы в ту же мерную колбу. Доводят объем содержимого колбы до метки 2-пропанолом и перемешивают.