6.1 Общие условия
Испытания проводят в нормальных лабораторных условиях: температура окружающей среды - (25±5)°С; относительная влажность - (65±15)%; частота переменного тока - (50±5) Гц; напряжение в сети - (220±10) В.
При приготовлении и хранении растворов следует выполнять требования ГОСТ 27025, ГОСТ 4517.
Для предотвращения разрушения витамина А анализ испытуемого материала и стандартов проводят в присутствии антиоксиданта (аскорбиновой кислоты, гидрохинона, пирогаллола), предохраняя пробы от попадания на них прямого солнечного света.
6.2 Условия фотометрических измерений
Условия фотометрических измерений приведены в таблице 1.
Таблица 1 - Условия фотометрических измерений
Витамин А | Растворитель | Длина волны, нм | Удельный коэффициент поглощения |
Ретинол | Этанол | 325 | 1832 |
Ретинола ацетат | Этанол | 328 | 1550 |
Ретинола пальмитат | 2-пропанол | 328 | 975 |
6.3 Условия хроматографического анализа
Температура хроматографической колонки: 25°С или температура окружающей среды.
Скорость потока подвижной фазы: 0,7 см/мин (ориентировочное значение).
Объем вводимой пробы: 50·10 см.
Подвижная фаза: смесь ацетонитрила, метилового спирта, метилена хлористого в объемном соотношении 50:45:5.
Проверку оптимальности условий хроматографического разделения осуществляют путем хроматографического анализа смешанного раствора ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола с массовой концентрацией каждого вещества не менее 0,4 мкг/см. Данный смешанный раствор готовят из основных растворов ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола по аналогии с методикой приготовления рабочих растворов по 8.1.2. Эффективность хроматографического разделения признается удовлетворительной, если коэффициент разделения соседних пиков ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола составляет не менее 1,3. В противном случае для достижения требуемой эффективности разделения экспериментальным путем подбирают скорость потока подвижной фазы или проводят испытания других колонок.