MP 1.2.0025-11

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1.2. ГИГИЕНА, ТОКСИКОЛОГИЯ, САНИТАРИЯ

Оценка раздражающего действия методом ультразвуковой допплерографии на сосудах хориоаллантоисной оболочки куриного эмбриона ex vivo

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москве" (Н.В.Завьялов, Е.Л.Скворцова); ОАО Завод экологической техники и эко-питания "ДИОД", г.Москва (В.П.Тихонов, Т.В.Шевченко, И.А.Родина, Е.Ю.Белянкина, К.Л.Плигина); ООО "СП Минимакс", г.Санкт-Петербург (М.Б.Гирина).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко и введены в действие 28 июня 2011 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Методические рекомендации предназначены для токсикологических исследований и испытаний парфюмерно-косметической (ПК) продукции, средств гигиены полости рта, а также сырья для их производства, в т.ч. полученных с применением нанотехнологий или содержащих наноматериалы.

1.2. Методические рекомендации могут быть использованы для оценки раздражающего действия слизистой оболочки глаза вновь разрабатываемой и серийно выпускаемой продукции. Данный метод может применяться в качестве самостоятельного экспресс-метода или в сочетании с другими токсикологическими методами.

1.3. Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы научно-исследовательскими организациями гигиенического профиля, медицинскими учебными заведениями и иными организациями, аккредитованными в установленном порядке.

2. Введение

В батарею токсикологических испытаний для оценки безопасности продукции входит исследование раздражающего действия на слизистую оболочку глаза. Для этой цели традиционно используется тест Драйза на лабораторных животных (Draize et al., 1944), являющийся одним из самых болезненных тестов. Возможной альтернативной заменой тесту Драйза является ХЕТ-КАМ-тест (НЕТ-САМ - hen's egg test at the chorio-allontoic membrane), в котором проводится визуальная оценка состояния сосудов хориоаллантоисной оболочки (ХАО) куриного эмбриона. Однако визуальная оценка не позволяет точно и объективно интерпретировать результаты исследования.

Дополнение стандартного ХЕТ-САМ теста методом высокочастотной допплерографии позволяет определять количественные характеристики изменения скорости кровотока в сосудах ХАО, которые отражают выраженность раздражающего действия.

Метод высокочастотной ультразвуковой допплерографии использует эффект изменения частоты сигнала отраженного движущегося объекта на величину, пропорциональную скорости движения отражателя, открытый в 1842 г. Допплером. При отсутствии движения исследуемой среды допплеровского сигнала не существует, т.к. ультразвуковая волна проходит сквозь ткани без отражения, что делает данный метод исследования движущихся структур наиболее объективным.

Данные методические рекомендации содержат порядок проведения оценки раздражающего действия с применением метода высокочастотной допплерографии на сосудах ХАО куриного эмбриона ex vivo. Преимуществом настоящего метода являются простота, высокая чувствительность, объективная цифровая оценка результатов, повышающая их достоверность, воспроизводимость, а также экономичность, быстрота получения результатов. Кроме того, система отвечает современным этическим требованиям, согласно которым следует ограничивать использование млекопитающих в эксперименте.

3. Принцип метода

Основой данного метода исследования является ХЕТ-КАМ тест, применяемый для оценки раздражающего действия веществ на сосудах ХАО куриного эмбриона. Во время проведения исследования раствор тестируемого вещества наносят на ХАО. При возникновении раздражающего действия происходит сужение кровеносных сосудов без остановки или с временной остановкой тока крови, тромбоз, кровоизлияния и т.п., что, в свою очередь, вызывает изменение скорости кровотока. Модификация ХЕТ-КАМ теста с использованием прибора "Минимакс-Допплер-К" позволяет провести количественную оценку скорости кровотока при возникновении раздражающего действия.

Ультразвуковой сигнал, отраженный от кровотока, поступает на приемный элемент датчика (частотой 25 МГц), далее этот сигнал усиливается, фильтруется и проходит в компьютерную часть прибора, где обрабатывается по специальной программе (Minimax Doppler v.1.7) и выдается на экран монитора в виде допплерограмм с цветным спектром. Также автоматически вычисляются количественные параметры скорости кровотока: линейная скорость кровотока (см/с), объемная скорость кровотока (мл/с), средневзвешенная скорость кровотока по кривой средней скорости (см/с). Показатели скорости кровотока ( и ) коррелируют с линейной скоростью кровотока . Таким образом, для изучения влияния исследуемых веществ достаточно оценки одного из параметров - линейной скорости кровотока ().

Изменение линейной скорости кровотока является показателем выраженности местно раздражающего действия исследуемого вещества на сосуды ХАО.

4. Оборудование, материалы и реактивы