МУК 4.2.2578-10  

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Санитарно-бактериологические исследования методом разделенного импеданса

     

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральной службой по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека (И.В.Брагина); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (А.И.Верещагин, М.В.Зароченцев, И.В.Новокшонова, М.А.Ярославцева); ФГУН ГНЦ МПБ Роспотребнадзора (М.В.Храмов, В.М.Храмов); ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москве" (Н.Я.Салова); фирмой "SY-LAB Gerate GmbH", Австрия (М.Шинкингер, Е.Я.Слободецкая, М.Б.Беглов).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 03.12.09 N 3).

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 19.02.10.

4. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН МУК 4.2.590-96 "Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора "БакТрак 4100" и методических указаний "Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для санитарно-бактериологического исследования объектов окружающей среды", 2005 г.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также мониторинг их микробной загрязненности; лабораторий других организаций, аккредитованных в установленном порядке на проведение исследований продовольственного сырья и пищевых продуктов; организаций, независимо от форм собственности осуществляющих производственный контроль продовольственного сырья и пищевых продуктов в процессе промышленного производства и оборота продукции.

1.2. Методические указания представляют ускоренный метод качественного и количественного определения санитарно-показательных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, регламентированных действующими документами (технические регламенты, СанПиН, ГОСТ, МУК, МУ и т.д.).

2. Нормативные ссылки

1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ.

2. Федеральный закон "О качестве и безопасности пищевых продуктов" от 02 января 2000 г. N 29-ФЗ.

3. СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов".

4. СанПиН 2.3.2.1280-03 "Дополнения и изменения 2 к СаН-ПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов".

5. ГОСТ 51446-99* (ИСО 7218-96) "Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований".

______________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р ИСО 7218-2008. - Примечание изготовителя базы данных.

6. ГОСТ 26669-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа".

7. СанПиН 1.2.681-97 "Производство и контроль парфюмерно-косметической продукции для обеспечения ее безопасности и качества".

3. Сущность импедансного метода

Методические указания содержат описание метода ускоренного микробиологического исследования продовольственного сырья, пищевых продуктов и других объектов внешней среды с использованием микробиологических экспресс-анализаторов, регистрирующих изменения электрического сопротивления (импеданса) питательной среды, происходящего под влиянием процессов роста и жизнедеятельности микроорганизмов в исследуемой пробе.

Классические методы микробиологических исследований, используемые в практике бактериологических лабораторий, требуют больших затрат труда и времени, достаточно длительны и позволяют получать результаты в течение нескольких дней.

Предлагаемый метод на основе метода разделенного импеданса позволяет получать быстрые (в течение нескольких часов) и надежные результаты для большого числа одновременно исследуемых образцов.

Импеданс - сопротивление потоку переменного тока через проводящий материал; является функцией активной проводимости, емкостного сопротивления и применяемой частоты.

Приборы "БакТрак" серии 4000 на основе метода разделенного импеданса регистрируют 2 определенных показателя импеданса для каждого измерения. Эти величины показаны как М-величина (импеданс среды) и Е-величина (импеданс электрода). Измерения М-параметра представляет собой относительное изменение (уменьшение) импеданса среды, выраженное в процентах к начальному измерению. М-параметр в основном отображает ту часть импеданса, которая связана с активной проводимостью. На него непосредственное влияние оказывает ионный состав среды при росте микроорганизмов, а также используемый для анализа образец. В силу этих причин при высокой электропроводимости питательной среды данный параметр теряет значимость. На величину Е-параметра состав питательной среды влияет уже не в столь сильной мере, что весьма важно в случаях, когда используются среды с высоким содержанием солей (т.е. в них добавлены соли в качестве селективных компонентов, используемых для обнаружения патогенных микроорганизмов).

Импедансная микробиология является непрямым культуральным методом обнаружения микроорганизмов с использованием определения электрического импеданса. Изменения импеданса обычно происходят в питательной среде по мере того, как ее химический состав изменяется в результате роста и метаболической активности микроорганизмов. Под действием микроорганизмов заряженные конечные продукты метаболизма выделяются в ростовую среду. В основном незаряженные или слабо заряженные субстраты превращаются в сильно заряженные конечные продукты. Так, например, белки метаболизируются до аминокислот, углеводы и жиры - до органических кислот. Образующиеся метаболиты имеют меньший размер и, таким образом, более подвижны. Эти электрохимические изменения в ростовой среде приводят к существенным изменениям импеданса. Экспоненциальные изменения импедансного сигнала могут наблюдаться, когда количество микроорганизмов достигает порога около 10-10 клеток/мл.

Время, необходимое для достижения значимого изменения импеданса, называется временем определения импеданса (IDT). Значение IDT обратно пропорционально начальной концентрации микроорганизмов в исследуемой пробе. Ход кривых импедансного сигнала соответствует и отражает кривую роста микроорганизмов в исследуемой пробе.

Среди разработанных и применяющихся в настоящее время исследовательских микробиологических экспресс-анализаторов, предназначенных для ускоренного обнаружения микроорганизмов на основе импедансных технологий, наибольшее распространение получили приборы серии "Бак Трак 4000" производства фирмы "SY-LAB Gerate GmbH" (Австрия).

Прибор "БакТрак" является автоматизированной экспресс-системой для ускоренной количественной и качественной оценки степени микробной контаминации продовольственного сырья, пищевых продуктов, косметической и фармацевтической продукции, питьевой воды и других объектов внешней среды.

Приборы "БакТрак 4300", "БакТрак 4100" и "БиоТрак 4250" внесены в Реестр средств измерений как кондуктометрические анализаторы для микробиологических исследований. Метод, основанный на измерении импеданса, приборы "БакТрак 4300", "БакТрак 4100" и "БиоТрак 4250", внесены в Национальные стандарты ряда европейских стран: Германии - DIN 10115*, 10120*, 10121*, Австрии - ONORM 10115*, 10120*, 10121*, Франции - AFNOR NF V08-105* (Микробиология продуктов питания и кормов: указания по импедансному методу для микробиологических исследований), AFNOR NF V08-106* (Определение количества в морепродуктах качественным методом, используя метод прямого импеданса).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Метод валидирован как альтернативный метод анализа в соответствии с ISO 16140:2003 Институтом стандартизации AFNOR, Франция.

4. Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

4.1. Экспресс-анализатор "БакТрак 4300"

Экспресс-анализатор "БакТрак 4300" включает:

- 2 инкубаторных блока для одновременного анализа 64 образцов, каждый инкубаторный блок имеет независимую систему термостатирования;

- управляющий блок (персональный компьютер);

- программное обеспечение; программа позволяет подключать до 12 модулей "БакТрак 4300", обычная конфигурация: 1-3 "БакТрака" подключаются к управляющему блоку;

- измерительные ячейки:

многоразовые измерительные ячейки (стеклянные) на 10 мл с 4 электродами (с зелеными, желтыми и красными крышками);

многоразовые измерительные ячейки (стеклянные) на 10 мл с 4 электродами для анаэробов;

одноразовые измерительные ячейки (пластиковые), стерильные на 20 мл;

измерительные ячейки для определения дрожжей и плесеней с ограниченным сроком использования на 20 мл (для непрямого метода);

одноразовые пластиковые стерильные внутренние пробирки для измерительных ячеек непрямого метода на 7 мл.

4.2. Экспресс-анализатор "БакТрак 4100"

Экспресс-анализатор "БакТрак 4100" включает:

- 1 инкубаторный блок, представляющий собой алюминиевую камеру на 40 образцов;

- управляющий блок (персональный компьютер);

- программное обеспечение. Можно одновременно использовать до 6 блоков, подключенных к одному персональному компьютеру;

- измерительные ячейки (те же самые, что и для "БакТрака 4300").

4.3. Экспресс-анализатор "БиоТрак 4250"

Экспресс-анализатор "БиоТрак 4250" включает:

- 1 инкубаторный блок с возможностью одновременного анализа до 21 образца;

- управляющий блок (портативный компьютер);

- программное обеспечение;

- измерительные ячейки (те же самые, что и для "БакТрака 4300" за исключением измерительных ячеек для анаэробов).

Дополнительно для всех приборов имеются:

температурные ячейки NTC 1000 Ом, 10 мл;

набор для охлаждения прибора;

набор для очистки прибора;

набор измерительных ячеек для проверки прибора;

ультразвуковая мойка для ячеек (рекомендуется);

источник бесперебойного питания;

набор сухих питательных сред (гл.9).

Для работы с анализаторами серии "БакТрак 4000" в лаборатории должны быть в наличии:

стерилизатор паровой;

шкаф сушильно-стерилизационный;

шкаф ламинарный (бокс биологической безопасности);

термостаты;

весы лабораторные;

рН-метр;

посуда лабораторная;

пипетки и дозаторы.

5. Установка параметров измерения при работе на приборах серии "БакТрак 4000"

5.1. Установка параметров измерения при работе на приборе "БакТрак 4100"

1. Установить температуру измерения на инкубаторном блоке прибора "БакТрак 4100".