10.1 Приготовленные гистологические препараты рассматривают под любым световым микроскопом проходящего света. Сначала используют обзорные план-объективы - 10-кратный или меньше, а затем объектив - 20(25)-кратный. Окуляры применяют с 10- или 16-кратным увеличением. Определение дисперсности проводят с использованием такого увеличения объектива, чтобы в поле зрения находилось от 10 до 50 измеряемых частиц. Измерение проводят с помощью окуляр-микрометра или системы анализа изображения.
10.2 При проведении измерений дисперсности частиц компонентов анализируемого продукта следует оценивать их в следующей последовательности: частицы скелетной мускулатуры, жировой ткани, соединительной ткани. Измерение частиц растительных компонентов проводится на тех же срезах, что и для анализа животных компонентов.
10.3 Проведение измерений размеров частиц компонентов (дисперсности)
10.3.1 Определение цены деления окуляр-микрометра
Прежде чем приступить к работе с окуляр-микрометром, необходимо определить цену его деления для каждого используемого в работе сочетания объективов и окуляров.
Окулярный микрометр представляет собой круглую стеклянную пластинку, устанавливаемую в окуляр, в центре которой нанесена линейка длиной 5 мм. Линейка разделена на 50 частей по 0,1 мм каждая. Перед измерением проводят определение цены деления шкалы окулярного микрометра. Для этого на предметный столик помещают объект-микрометр, и оценка проводится при каждом используемом сочетании окуляра и объектива. Объект-микрометр проходящего света представляет собой предметное стекло с нанесенной линейкой длиной 1 мм, разделенной на 100 частей и покрытой покровным стеклом. Одно деление шкалы объект-микрометра соответствует 0,01 мм или 10 мкм. Шкалы объект-микрометра и окулярного микрометра устанавливают параллельно, при этом совмещают их нулевые отметки. Затем определяют, сколько делений объект-микрометра точно совпадает с делениями окуляр-микрометра.
Цену деления окуляр-микрометра , мкм, рассчитывают по формуле
, (1)
где - отсчитанное число делений по шкале объект-микрометра;
- известное значение одного деления шкалы объект-микрометра, равное 10 мкм. Для измерения при очень малых увеличениях применяют объект-микрометры, у которых 1 см разделен на 100 частей по 0,1 мм каждая. В этом случае одно деление шкалы объект-микрометра равно 100 мкм;
- соответствующее число делений шкалы окуляр-микрометра.
10.3.2 Измерение с помощью окулярного микрометра
При проведении измерений с использованием окуляр-микрометра руководствуются 10.3.1. Измерение допускается проводить с использованием любого объектива, но так, чтобы измеряемых структур в поле зрения было от 10 до 50. Дальнейшие расчеты проводят по формуле
, (2)
где - длина измеренного объекта;
- количество делений шкалы окулярной сетки;
- цена деления окулярной сетки с объективом, используемым для измерения.
Упомянутый метод измерения позволяет измерять объекты с точностью до 0,5 мк.
С помощью окуляр-микрометра можно измерить: максимальный диаметр окружности или эллипса, условно описываемых вокруг анализируемой структуры, максимальный диаметр частиц, длину и площадь срезов или определенных участков.
10.3.3 Проведение измерений при помощи системы анализа изображения
При проведении измерений с помощью системы анализа изображения для частиц сложной формы измеряют максимальный диаметр Фере, для линейных частиц - их длину. При невозможности автоматического разделения частиц компонентов используют их интерактивное разделение. Получают следующие результаты: общее количество частиц, минимальные и максимальные размеры частиц, средние размеры частиц и их процентное соотношение, а также другие параметры в соответствии с программой системы анализа изображения. Статистические результаты получают автоматически в виде таблиц, графиков распределения размеров или диаграмм.
10.4 Обработка результатов
На основании полученных данных рассчитывают процент частиц, превышающих нормативный размер.
Содержание частиц сверхнормативного размера , %, рассчитывают по формуле
, (3)