ГОСТ Р ИСО 20776-1-2010

Группа Р20

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КЛИНИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ IN VITRO*. ИССЛЕДОВАНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИНФЕКЦИОННЫХ АГЕНТОВ И ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК ИЗДЕЛИЙ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИМИКРОБНЫМ СРЕДСТВАМ

Часть 1

Референтный метод лабораторного исследования активности антимикробных агентов против быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни

Clinical laboratory testing and diagnostic test systems. Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices. Part 1. Reference method for testing the activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases

_______________

* Слова "IN VITRO" в наименовании стандарта в бумажном оригинале выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.     

ОКС 11.100.10

Дата введения 2012-03-01

     

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Лабораторией проблем клинико-лабораторной диагностики ГОУ ВПО "Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова" на основе собственного аутентичного перевода на русский язык стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 380 "Медицинские изделия для диагностики in vitro"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации от 23 ноября 2010 г. N 499-ст

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 20776-1:2006* "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro. Исследование чувствительности инфекционных агентов и оценка функциональных характеристик изделий для исследования чувствительности к антимикробным средствам. Часть 1. Референтный метод лабораторного исследования активности антимикробных агентов против быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни" (ISO 20776-1:2006 "Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems - Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices - Part 1 :Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases")

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Введение

Лабораторные исследования чувствительности проводят на микроорганизмах, вызывающих болезни, особенно если организм предположительно относится к виду резистентному (устойчивому) по отношению к часто используемым антибактериальным агентам.

Данные тесты также важны для надзора за резистентностью, для эпидемиологических исследований восприимчивости и при сравнении новых и существующих антибактериальных средств.

Процедуры разведения используются для определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) антимикробных препаратов и служат референтным методом испытания чувствительности (восприимчивости) микроорганизмов к антимикробным средствам.

Методы МПК используются:

- для надзора за резистентностью;

- при сравнительных испытаниях новых агентов, чтобы установить восприимчивость организмов, дающих сомнительные результаты в рутинных исследованиях;

- для испытаний на организмах, где рутинные тесты могут быть ненадежными и когда количественный результат требуется для менеджмента лечения.

В тестах разведения микроорганизмы проверяют на их способность производить видимый рост на ряде агаровых пластин (разведение в агаре) или в бульоне (разведение в бульоне), содержащих последовательные разведения антибактериального агента.

Наиболее низкая концентрация антибактериального агента (в мг/л), которая при определенных условиях in vitro предотвращает появление видимого роста микроорганизма в пределах определенного промежутка времени, известна как минимальная подавляющая концентрация (МПК).

МПК служит руководством для клинициста относительно чувствительности организма к антибактериальному агенту и помогает в принятии решений о проведении лечения. Необходимы тщательный контроль и стандартизация внутри- и межлабораторной воспроизводимости, поскольку результаты могут значительно различаться в зависимости от используемого метода.

Общепринято, что бульонные тесты МПК воспроизводимы в пределах одного двойного разведения реальной конечной точки (то есть ± одна лунка или пробирка в серии двойных разведений).

Разведение бульона - техника, согласно которой контейнеры, содержащие идентичные объемы растворов бульона с антибактериальным агентом в возрастающих (обычно в геометрической прогрессии) концентрациях, инокулируют известным числом микроорганизмов.

Микроразведение бульона - выполнение теста разведения бульона в емкостях для микроразведения.

Метод, описанный в настоящем стандарте, предназначен для испытания чистых культур аэробных бактерий, которые легко выращиваются путем ночной инкубации на агаре и хорошо растут в бульоне Mueller-Hinton, который может иметь добавки. Метод микроразведения в бульоне, описанный в настоящем стандарте, аналогичен методам, используемым во многих странах [1]-[5]. Данный метод - по существу то же самое, что и метод микроразведения в бульоне, изданный Европейским Комитетом по испытаниям антибактериальной восприимчивости (EUCAST) [6]. Все эти методы основаны на принципах, описанных Ericsson и Sherris [7].

ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ! Использование настоящего стандарта может быть связано с применением опасных материалов, операций и оборудования. Настоящий стандарт не затрагивает решения проблем безопасности, связанных с его использованием. На пользователе настоящего стандарта лежит ответственность за установление соответствующих мер безопасности, условий охраны здоровья и определение применимости регулирующих ограничений перед использованием стандарта.

     1 Область применения

Настоящий стандарт описывает референтный метод микроразведений в бульоне для определения МПК. МПК отражает активность препарата в описанных условиях проведения теста и может быть использована для целей менеджмента лечения, принимая в расчет другие факторы, такие как фармакология препарата или механизмы резистентности бактерий. Это позволяет осуществить классификацию бактерий как "чувствительную" (S), "промежуточную" (I) или "резистентную" (R) формы. Кроме того, распределения МПК могут использоваться для определения дикого или недикого типов бактериальной популяции.

Хотя клиническая интерпретация значения МПК вне возможностей настоящего стандарта, модификации основного метода требуются для определенного антибактериального агента или комбинации бактерий, чтобы облегчить клиническую интерпретацию. Эти модификации приведены в таблице 3. Желательно сравнить другие методы испытания восприимчивости (например, рутинные методы или диагностические испытательные устройства) с данным референтным методом для валидации, чтобы гарантировать сопоставимые и надежные результаты.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 антибактериальный агент (antimicrobial agent): Вещество биологического, полусинтетического или синтетического происхождения, которое тормозит рост или убивает бактерии и таким образом потенциально применимо для лечения инфекций.

Примечание - Дезинфицирующие средства, антисептики и консерванты не включены в это определение.

2.2 антибактериальные агенты - свойства (antimicrobial agents - properties):

2.2.1 активность (potency): Антибактериально активная фракция испытуемого вещества, определенного в биопробе против образца для сравнения того же вещества.

Примечание - Активность выражена как массовая доля в миллиграммах на грамм (мг/г) или как содержание активности в Международных Единицах (IU) на грамм, или как объемная доля или массовая доля в процентах, или как концентрация количества вещества (массовая доля) в молях на литр компонентов в испытуемом веществе.

2.2.2 концентрация (concentration): Количество антибактериального агента в определенном объеме жидкости.

Примечание 1 - Концентрация выражена в мг/л.

Примечание 2 - Мг/л=мкг/мл, но не рекомендуют использовать единицу мкг/мл.

2.3 базовый (основной) раствор (stock solution): Первоначальный раствор, используемый для дальнейших разведений.

2.4 минимальная подавляющая концентрация; МПК (minimum inhibitory concentration, MIC): Наименьшая концентрация, которая, при определенных условиях in vitro, предотвращает видимый рост бактерий в пределах определенного промежутка времени.

Примечание - МПК выражена в мг/л.

2.5 пограничное значение (breakpoint, ВР): Определенные значения параметров, например МПК, на основе которых бактерии могут быть распределены на клинические категории, как "чувствительные", "промежуточные" и "резистентные".

Примечание - Для действующих интерпретирующих пограничных значений можно сослаться на последние публикации организаций, использующих данный референтный метод (например, CLSI и EUCAST).

2.5.1 чувствительный (susceptible, S): Бактериальный штамм, ингибированный in vitro концентрацией антибактериального агента, которая связана с высокой вероятностью терапевтического успеха

Примечание 1 - Бактериальный штамм классифицирован как чувствительный, путем применения соответствующих пограничных значений в определенной фенотипичной тест-системе.

Примечание 2 - Эти пограничные значения могут быть изменены из-за изменений условий (например, изменения дозировки обычно используемого препарата, появление новых механизмов резистентности)

2.5.2 промежуточная (умеренно чувствительная) форма (intermediate, I): Бактериальный штамм, ингибированный in vitro концентрацией антибактериального агента, которая связана с сомнительным терапевтическим эффектом

Примечание 1 - Бактериальный штамм классифицирован как промежуточная форма, с применением соответствующих пограничных значений в определенной фенотипичной тест-системе.

Примечание 2 - Данный класс чувствительности означает, что инфекция, вызванная данным изолятом, может быть соответственно купирована в тех участках тела, где препарат физиологически концентрируется, или когда может быть применена высокая дозировка препарата.

Примечание 3 - Данный класс также обозначает "буферную зону" для предупреждения небольших неконтролируемых технических факторов от несоответствия в интерпретациях.

Примечание 4 - Данные пограничные значения могут быть изменены из-за изменений в условиях (например, изменения дозировки обычно используемого препарата, появление новых механизмов резистентности).

2.5.3 резистентный (resistant, R): Бактериальный штамм, ингибированный in vitro концентрацией антибактериального агента, которая связана с высокой вероятностью терапевтической неудачи.

Примечание 1 - Бактериальный штамм классифицирован как резистентный, с применением соответствующих пограничных значений в определенной фенотипичной тест-системе.

Примечание 2 - Данные пограничные значения могут быть изменены из-за изменений при обстоятельствах (например, изменения дозировки обычно используемого препарата, появления новых механизмов резистентности).

2.6 дикий тип (wild type): Отсутствие приобретенных механизмов резистентности к антибактериальному агенту для данного штамма.

2.7 референтный штамм (reference strain): Каталогизируемые, охарактеризованные бактерии с устойчивыми, определенными антибактериальными фенотипами и/или генотипами чувствительности.

Примечание - Референтные штаммы сохраняют как базовые культуры, из которых получают рабочие культуры. Они могут быть получены из коллекций культур и использованы для контроля качества.

2.8 метод испытания чувствительности (susceptibility testing method):

2.8.1 разведение в бульоне (broth dilution): Техника, в которой контейнеры заполнены соответствующими объемами антибактериального раствора, с использованием возрастающих (обычно вдвое) концентраций антибактериального агента и соответствующих объемов бульона с определенным прививочным материалом.

Примечание - Цель этого метода - определение МПК.

2.8.2 микроразведение (microdilution): Выполнение разведения в бульоне в планшетах для микроразведения вместимостью 200 мкл на лунку.

2.9 бульон (broth): Жидкая среда, используемая для роста бактерий in vitro.

2.10 инокулюм (прививочный материал) (inoculum): Число бактерий в суспензии, рассчитанное относительно окончательного объема.

Примечание - Прививочный материал выражен как колонии, образующие единицы в миллилитре (КОЕ/мл).

2.11 эффект инокулюма (inoculum effect): Изменение в МПК, связанное с изменением в инокулюме (прививочном материале).

     3 Процедуры испытания

     3.1 Общие положения

Испытания выполняют в планшетах для микроразведения. Метод основан на подготовке рабочих растворов антибактериального агента объемом 50 мкл на лунку (с добавлением прививочного материала также в объеме 50 мкл) или в объеме 100 мкл на лунку (с добавлением максимально 5 мкл объемов прививочного материала).

     3.2 Среда

Следует использовать бульон Mueller-Hinton (см. приложение А для уточнения).