МУ 3.5.2431-08
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
3.5. ДЕЗИНФЕКТОЛОГИЯ
Изучение и оценка вирулицидной активности дезинфицирующих средств
Дата введения: с момента утверждения
1. РАЗРАБОТАНЫ ФГУН НИИ дезинфектологии Роспотребнадзора (М.Г.Шандала, Л.Г.Пантелеева); ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН (Д.К.Львов, Н.Н.Носик, Д.Н.Носик, П.Г.Дерябин); ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (М.И.Михайлов, Н.А.Замятина, К.К.Кюрегян, Р.М.Элбакян); Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Л.С.Бойко, О.В.Романченко).
2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 апреля 2008 г. N 1).
3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 13 декабря 2008 г.
4. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН "Методических рекомендаций по определению вирулицидной активности препаратов" N 1119-73.
1. Область применения
1.1. Настоящие методические указания содержат описание методов изучения и оценки вирулицидной активности дезинфицирующих средств (ДС) и субстанций (активных компонентов целевого действия ДС). Указания гармонизированы с Европейским стандартом 14476 "Химические дезинфектанты и антисептики. Вируцидный количественный суспензионный тест для химических дезинфектантов и антисептиков, используемых в медицине. Тест-методы и требования (фаза 2/ступень 1)", 2005; "Протоколом тестирования эффективности дезинфектантов, используемых для инактивации вируса гепатита В уток и поддержания соответствующего уровня требований", США, ЕРА 2000 г.; "Комиссии по антивирусной дезинфекции Немецкого Объединения по борьбе с вирусными заболеваниями (DVV)", 2004.
1.2. Методические указания предназначены для специалистов лабораторий, аккредитованных на исследования и испытания ДС в целях их государственной регистрации и сертификации в России.
2. Нормативные ссылки
2. "Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании", утвержденное постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.00 N 554.
3. СП 3.1.1275-03 "Профилактика инфекционных заболеваний при эндоскопических манипуляциях".
4. МУ 3.5.1937-04 "Очистка, дезинфекция и стерилизация эндоскопов и инструментов к ним".
5. МУ N 287-113 "Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения" от 30.12.98.
6. СанПиН 2.1.7.728-99 "Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений".
3. Общие положения
3.1. Вирусы обладают разной устойчивостью к действию физических и химических факторов, в т.ч. ДС и субстанций. Устойчивость вирусов к ДС определяется их структурой и химическим составом. Более устойчивы к действию ДС вирусы без липидсодержащей оболочки, например пикорнавирусы, парвовирусы. Вирусы с липидсодержащей оболочкой, например вирусы гриппа, герпеса, ВИЧ относительно легко инактивируются. Механизм действия ДС на вирусы различен и зависит от химического состава. Они могут избирательно повреждать нуклеиновую кислоту вируса, белки нуклеокапсида или липопротеины суперкапсидной оболочки. Возможно синхронное воздействие на эти структурные элементы, дезинтеграция вирусной частицы или блокировка рецепторов на ее поверхности за счет накопления амфотерных веществ дезинфектанта. Для оценки вирулицидной активности следует использовать несколько тест-вирусов с различной устойчивостью, что позволяет оценить активность ДС в отношении широкого спектра вирусов.
3.2. Результаты исследований вирулицидной активности ДС зависят также от характера используемого вируссодержащего материала, метода индикации вируса, метода определения вирулицидных свойств ДС, состава испытываемого ДС (действующие вещества - ДВ и другие компоненты).
3.3. При изучении вирулицидной активности ДС необходимо иметь его подробную характеристику с указанием рецептуры, физико-химических свойств (включая растворимость и стабильность), подтвержденных результатами входного химического контроля.
3.4. ДС, принимаемые для исследований, должны отвечать следующим требованиям: обладать хорошей растворимостью в воде, сохранять свою активность в присутствии органических веществ (кровь и другие биологические субстраты), быть нетоксичными или мало токсичными для людей (и животных), не иметь неприятного запаха, не портить обеззараживаемых предметов.
3.5. Непременным условием при исследованиях вирулицидной активности ДС является использование нейтрализатора.
4. Тест-вирусы, модельные системы, критерии оценки и основные условия, которые необходимо соблюдать при исследованиях вирулицидной активности ДС и их субстанций, применение нейтрализатора
4.1. Тест-вирусы
4.1.1. При исследованиях вирулицидной активности ДС необходимо использовать как РНК-, так и ДНК-содержащие тест-вирусы. При этом следует учитывать наличие лабораторной модели; безопасность для лиц, работающих с вирусом.
4.1.2. Обязательным для всех ДС является испытание на двух тест-вирусах: вирусе полиомиелита I типа (вакцинном штамме Sabin (LSc-2ab) (далее - "полиовирус") и аденовирусе V типа (штамм Аденоид 75) (далее - "аденовирус").
Средство, показавшее способность инактивировать полио- и аденовирус, включают в группу ДС с вирулицидной активностью. ДС с вирулицидной активностью могут быть использованы для дезинфекции при любой вирусной (включая особо опасные) инфекции, имеющей значение в инфекционной патологии человека.
4.1.3. Для ДС, применяемых при повышенной (до 60 °С) температуре растворов (например, для обеззараживания белья), в качестве тест-вируса используют бычий парвовирус (штамм Хаден).
4.1.4. В связи с эпидемиологической и социальной значимостью гепатита А для дезинфекции в инфекционных очагах проводят также исследования с вирусом гепатита А. Для изучения и оценки активности ДС в отношении вируса гепатита А используют вирус гепатита А человека (штамм HAS-15). ДС, инактивирующие вирус гепатита А, входят в группу средств с вирулицидной активностью.
4.1.5. Для изучения вирулицидной активности ДС в отношении вируса гепатита В применяют суррогатный вирус - вирус гепатита В уток (ВГВУ), в отношении вируса гепатита С - суррогатный вирус - вирус диареи крупного рогатого скота ВД-БС (штамм ВК-1В1-N 28) или вирус гепатита С человека (штамм Д1).
4.1.6. Спектр тест-вирусов может быть расширен, в таком случае дают дополнительную информацию о результатах исследований на конкретном вирусе.
4.2. Модельные системы для исследований ДС и субстанций
4.2.1. Исследования in vitro в культуре клеток. В экспериментах используют культуры клеток, чувствительные к тест-вирусу (прилож.1).
4.2.2. Исследования in vivo. В экспериментах используют чувствительных лабораторных животных (белые мыши), уток и др.
4.3. Критерии оценки вирулицидной активности ДС и субстанций
4.3.1. Вирулицидное ДС (субстанция) должно подавлять инфекционность обязательных для испытаний тест-вирусов - полиовируса и аденовируса на исследуемых объектах не менее, чем на 4 ТЦИД
(т.е. степень инактивации должна быть не менее 99,99%).
4.3.2. Критерием вирулицидной активности ДС (субстанций) для других тест-вирусов (включая вирусы - возбудители особо опасных инфекций) является отсутствие инфекционности, определяемое современными методами индикации.
4.3.3. Степень инактивации тест-вируса определяют в чувствительных модельных системах по подавлению инфекционной, цитопатической или бляшкообразующей активности вируса в культуре клеток, или по отсутствию маркеров инфицирования, или по специфической гибели лабораторных животных (белые мыши) и др. Для получения более точных результатов тест-вирус следует использовать с максимальным титром.
4.3.4. Показателем вирулицидной активности ДС (субстанций) является скорость инактивации, которая представляет собой соотношение концентрации тест-вируса, выраженное в десятичных логарифмах, до и после воздействия ДС за определенный промежуток времени (экспозиция). Степень снижения вирусной инфекционности вычисляется в десятичных логарифмах по разнице титров вируса до и после обработки ДС.
4.4. Основные условия, которые следует соблюдать при исследованиях вирулицидной активности ДС и субстанций
Использовать нейтрализатор, подобранный к конкретному ДС (или дезинфицирующей субстанции, далее в этом разделе - ДС).
При проведении сертификационных испытаний ДС хранить в соответствии с правилами сертификации.
Растворы ДС готовить на стерильной водопроводной дехлорированной воде.
Поддерживать температуру растворов исследуемых ДС в течение всего эксперимента в пределах (20±2) °С (если по условиям эксперимента не рекомендована другая температура), независимо от температуры окружающей среды.
Использовать рабочие растворы ДС, производимых в форме гранул, порошков, таблеток и др. только после полного их растворения.
Кратность постановки экспериментов должна быть не менее трех (при условии получения одинаковых результатов).
При отсутствии цитопатического эффекта пробы подвергают необходимой обработке с целью проведения второго, а при необходимости и третьего слепого пассажа для определения полноты ингибирования тест-вируса.
Эксперименты должны сопровождаться всеми необходимыми контролями, в т.ч. контролем полноты нейтрализации дезинфектанта, жизнеспособности тест-вируса, контаминации тест-объекта тест-вирусом, культуры клеток или лабораторных животных (мыши), утки и др.
Исследуемые ДС до, во время и после исследований (испытаний) должны храниться в соответствии с требованиями технических условий (ТУ). При отсутствии ТУ необходимо соблюдать общие требования: избегать попадания прямых солнечных лучей и влаги, воздействия высоких температур и замораживания.
При исследованиях ДС следует строго соблюдать рекомендуемые меры индивидуальной защиты (перчатки, очки, респираторы и др.).
4.5. Применение нейтрализатора ДС и субстанции
Для нейтрализации ДС (субстанции) используют вещество - нейтрализатор (или комплекс из нескольких веществ), останавливающее действие ДС. Нейтрализатор либо добавляют непосредственно в питательную среду, либо промывают им тест-объекты после воздействия ДС (субстанции, исследуемого вещества) для того, чтобы остановить его действие на тест-вирус через заданное время (экспозицию).
4.5.1. Для нейтрализации ДС в виде монопрепарата на основе окислителей (хлор-, йод-, кислородсодержащие средства) применяют 0,1-1,0% растворы тиосульфата натрия:
для катионных поверхностно-активных веществ - 0,1-1,0% растворы лаурилсульфата натрия (сульфонол) или растворы сульфонола с 10% обезжиренного молока;
для альдегидов - 1,0% раствор бисульфита натрия;
для кислот - щелочи в эквивалентном количестве;
для щелочей - кислоты в эквивалентном количестве;
для спиртов - воду;
для композиционных средств - "комплексный" нейтрализатор, например, содержащий Твин 80 (3%), сапонин (0,3-3,0%), гистидин (0,1%), цистеин (0,1%). Если в состав ДС входят окислители, в нейтрализатор дополнительно вводят тиосульфат натрия. Следует иметь в виду, что "комплексный" нейтрализатор обладает выраженным цитотоксическим действием на клеточные культуры.
4.5.2. Если не удается подобрать какой-либо из перечисленных нейтрализаторов, что проявляется в неспецифической дегенерации культуры клеток (или гибели мышей, уток), то используют 60-80% сыворотки (без консерванта) крупного рогатого скота (СКРС), инактивированную при 56 °С в течение 30 мин. СКРС нейтрализует большой перечень ДВ и наиболее близка к "универсальному" нейтрализатору.
4.5.3. При невозможности нейтрализовать токсическое действие ДС следует применять дополнительные методы удаления ДС - диализ смеси вирус-дезинфектант, например, с использованием сефадекса LH-20, G-75, осаждения вируса методом высокоскоростного центрифугирования, фильтрацией через мембранные фильтры.
5. Основные этапы и методы изучения вирулицидной активности ДС и субстанций
Исследование вирулицидной активности ДС осуществляется в два этапа.
1. Первый этап исследований - определение наличия вирулицидной активности. Проводится in vitro суспензионным методом или методом батистовых тест-объектов.
2. Второй этап исследований - изучение вирулицидной активности ДС при обработке ими различных тест-объектов, воздуха, контаминированных тест-вирусом.
В качестве тест-объектов могут использоваться:
различные изделия медицинского назначения;
предметы ухода за больными и игрушки;
белье, спецодежда и другие изделия из тканей;
посуда, в т.ч. лабораторная;
различные поверхности в помещениях (жесткой мебели, разных предметов, оборудования, в т.ч. санитарно-технического и др.);
кровь;
выделения (моча, фекалии, мокрота).
Попробуйте «Техэксперт: Лаборатория. Инспекция. Сертификация» бесплатно