МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ -ЭКЗОТОКСИНА В ПРЕПАРАТАХ БИТОКСИБАЦИЛЛИНА*

________________

* Разработаны Э.Б.Даниловой, Е.Б.Кругляк (ВНИИбакпрепарат); С.Н.Бубенщиковой, В.К.Каграмановой (МГУ).

УТВЕРЖДЕНО 30.03.81 N 2353-81

Краткая характеристика препарата. Битоксибациллин - бактериальный инсектицидный препарат, получаемый микробиологическим путем на основе культуры Bacillus thuringiensis Var. thuringiensis. Препарат предназначен для борьбы с колорадским жуком и хлопковой совкой. В его состав входят спорокристаллический комплекс, -экзотоксин, а также остатки среды, наполнитель (каолин) и хлорид натрия. -экзотоксин представляет собой 2-0-(4-0-5--дезоксиаденозин-5-ил--глюкопиранозил)-4-O-фосфо--алларовую кислоту. Молекулярная масса для свободной кислоты -экзотоксина 701.

Принцип метода. В основе метода лежит использование анионообменной хроматографии с применением градиента элюции.

Метрологическая характеристика метода. Чувствительность метода позволяет определять 1 мкг и более -экзотоксина в пробе. Время анализа 50 мин, время выхода -экзотоксина 34 мин. Величина стандартного отклонения не более ±4%.

Реактивы и материалы. Анионообменная смола с размером зерен 10±2 мкм или любой анионообменник, обладающий аналогичными характеристиками. Стандартный образец с известным процентным содержанием -экзотоксина. Хлороводородная кислота особой чистоты. Хлорид натрия особой чистоты. Вода дистиллированная деионизационная. Едкий натр особой чистоты. Универсальная индикаторная бумага, рН 1-10 ("Реагент"). Фильтры "красная лента".

Приготовление рабочих растворов. Раствор А - 600 мг хлорида натрия и 5 мл 1 н. хлороводородной кислоты помещают в мерную колбу на 2 л, растворяют в небольшом количестве деионизованной воды и доводят до метки той же водой. Раствор б - 11,7 г хлорида натрия и 10 мл 1 н. хлороводородной кислоты помещают в мерную колбу на 1 л, растворяют в небольшом количестве деионизованной воды и доводят до метки той же водой. Перед использованием растворы дегазируются с помощью водоструйного насоса в течение 10 мин.

Приготовление деионизованной воды. Деионизованную воду получают путем пропускания дистиллированной воды через ионообменную колонку, заполненную смесью катионита и анионита с последующим контролем кондуктометром, показания которого должны быть 1,5 МОм/см.