МР 2.3.2.2327-08 Методические рекомендации по организации производственного микробиологического контроля на предприятиях молочной промышленности (с атласом значимых микроорганизмов)

     6.4 Методы микроскопических исследований

В молочной промышленности микроскопические исследования проводят при изучении микроморфологических особенностей микрофлоры молока, лабораторных и производственных заквасок, сыров на различных этапах их производства и т.д.

Атлас санитарно-показательных, технически вредных и заквасочных микроорганизмов, значимых для молока и продуктов его переработки, представлен в приложении Д.
     
     Сущность метода

Метод основан на визуальном наблюдении микроорганизмов с помощью приборов (микроскопов), позволяющих многократно увеличивать исследуемый объект, подготовленный определенным образом.

При микроскопическом исследовании учитываются как жизнеспособные, так и нежизнеспособные клетки микроорганизмов, при этом чувствительность метода - не менее 10 клеток в 1 см исследуемого образца.

Эффективность и объективность микроскопических исследований зависит от:

- методики подготовки объекта исследования (способ приготовления микропрепарата);

- состояния и правильности подготовки микроскопа.

Подготовка исследуемых объектов (приготовление микропрепаратов)

При контроле молочной продукции наиболее распространенными способами приготовления микропрепаратов являются следующие способы:

- способ фиксирования и окрашивания;
     
     - способ "раздавленной капли".
     
     Приготовление фиксированных и окрашенных микропрепаратов
     
     Приготовление мазка

На чистое, хорошо обезжиренное, профламбированное в пламени горелки и остуженное стекло бактериологической петлей наносят каплю стерильной воды, в которую с помощью прокаленной, охлажденной бактериологической петли вносят исследуемый материал и распределяют его на площади 1-2 см таким образом, чтобы получить тонкий равномерный мазок.

Если исследуется плотный материал (сыр и т.д.), то материал предварительно тщательно растирается со стерильной водой.

При исследовании колоний микроорганизмов, выросших на плотной питательной среде, часть колонии отбирают с помощью бактериологической петли или иглы и тщательно растирают в капле воды на предметном стекле.

Приготовленные мазки высушивают при комнатной температуре на воздухе.

Фиксирование мазка

Для закрепления клеток микроорганизмов на стекле высушенные мазки фиксируют. Для этого предметное стекло с высушенным мазком, обращенным вверх, берут пинцетом и проводят несколько раз через верхнюю часть пламени горелки с промежутками 5-6 с. Зафиксированный мазок охлаждают на воздухе.

Окрашивание мазка

Окрашивание мазков проводят после их фиксации.

Простое окрашивание:

- зафиксированный мазок помещают на подставку для окраски мазком вверх;

- пипеткой наносят раствор метиленового голубого по 4.4.2 так, чтобы покрыть весь мазок;

- по истечении 30-60 с краситель осторожно сливают;

- препарат промывают легкой струей воды, направляя струю на ребро предметного стекла, а не на мазок. Краску можно смывать, опуская стекло в емкость с водой;

- окрашенный мазок высушивают на воздухе;

- окрашивание мазков можно проводить с помощью специальных красящих бумажек или фильтровальной бумаги, пропитанной метиленовым голубым.

При использовании для окрашивания фильтровальной бумаги, пропитанной красителем, на сухой зафиксированный мазок наносят каплю дистиллированной воды, сверху кладут полоску окрашенной бумаги, наносят еще 1-2 капли воды и выдерживают определенное время, затем бумагу осторожно убирают, препарат высушивают.

Окраска по методу Грама:

- зафиксированный мазок помещают на подставку для окраски мазком вверх;