4.6.1 Рабочие питательные среды для посевов готовят из сухих питательных сред путем их растворения в воде с последующей стерилизацией в соответствии с инструкцией по приготовлению, приведенной на этикетке или в сопроводительных документах.
Для приготовления рабочих питательных сред используют водопроводную или дистиллированную воду. Водопроводную воду рекомендуется готовить по 4.3.2.1. Использование дистиллированной воды оговаривается в соответствующих пунктах при приготовлении конкретной рабочей среды.
4.6.1.1 Определение активной кислотности (рН) питательных сред
Определение активной кислотности (рН) питательных сред проводят потенциометрическим методом с помощью анализатора потенциометрического для контроля рН по прилагаемым инструкциям.
Ориентировочное определение активной кислотности (рН) питательных сред может проводиться с помощью индикаторных бумажек или готового универсального индикатора.
4.6.1.2 Контроль качества рабочих питательных сред
Качество вновь приготовленных питательных сред проверяют путем параллельного посева одних и тех же проб на новую среду и ранее используемую. Результат считается удовлетворительным при получении данных одного порядка.
Контроль стерильности рабочих питательных сред осуществляют путем термостатирования пробы среды при 37 °С в течении 48 ч. Если после термостатирования на средах отсутствуют признаки роста, то среда считается стерильной.
4.6.1.3 Хранение рабочих питательных сред
Если особые условия хранения конкретной рабочей питательной среды не оговорены в инструкции по ее применению, то среды хранят в холодильнике не более 3 мес или при температуре 18-23 °С не более 1 мес при условии сохранения внешнего вида среды.
4.6.2 Основные питательные среды, необходимые для проведения производственного контроля
Для проведения микробиологического контроля необходимо располагать комплексом питательных сред, обеспечивающим контроль всех значимых групп микроорганизмов. Выбор питательной среды для контроля конкретной группы микроорганизмов определяется специалистами предприятия, проводящими микробиологический контроль и отвечающими за безопасность и качество выпускаемой продукции.
Основное требование, предъявляемое к питательным средам, - обеспечение ростовых характеристик и специфичности на уровне арбитражных сред, т.е. сред, использование которых регламентировано нормативными документами (национальными стандартами).
4.6.2.1 Среда КМАФАнМ - плотная основная среда для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
Приготовление
(50±5) г сухой среды вносят в (1000±50) см холодной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят 3-5 мин, не допуская пригорания, и фильтруют через ватно-марлевый фильтр (при наличии осадка). В полученной среде проверяют активную кислотность и при необходимости корректируют ее 20-30% раствором гидроокиси натрия или 20% раствором молочной кислоты до рН (7,3±0,1) ед. Среду вновь доводят до кипения, разливают в колбы или пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121±2) °С в течение (15±1) мин.
Готовую питательную среду проверяют на стерильность. Отсутствие изменений в питательной среде после выдержки 72 ч при (30±1) °С свидетельствует о стерильности питательной среды.
Использование
Рабочую среду непосредственно перед применением расплавляют, помещая посуду со средой в водяную баню. Расплавленную среду осторожно охлаждают до температуры 40-45 °С, не допуская вспенивания. В чашку Петри питательную среду вносят в количестве, необходимом для создания слоя среды не менее 2 мм (обычно требуется 10-15 см агаровой среды).
О наличии роста судят по появлению на питательной среде видимых колоний микроорганизмов.
Рекомендации к применению
Среда используется для оценки санитарно-гигиенического состояния молока и молочных продуктов, материалов и компонентов, воды, оборудования, воздуха.
Изменяя условия культивирования на среде КМАФАнМ, определяют следующие группы микроорганизмов:
общее количество мезофильных микроорганизмов (режимы культивирования: температура - 29-31 °С, продолжительность - 72 ч);
общее количество термофильных микроорганизмов (режимы культивирования: температура - 42-45 °С, продолжительность - 72 ч);
общее количество психротрофных микроорганизмов (режимы культивирования: температура - 7 °С, продолжительность - 7-10 сут).
Среда может быть использована для определения:
- липолитических микроорганизмов (режимы культивирования: температура - 20-23 °С, продолжительность - 5-6 сут).