МР 2.3.2.2327-08 Методические рекомендации по организации производственного микробиологического контроля на предприятиях молочной промышленности (с атласом значимых микроорганизмов)

     4.4 Приготовление растворов реактивов

4.4.1 Приготовление реактивов для окраски по Граму

4.4.1.1 Приготовление насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового

10 г кристаллического фиолетового растворяют в 100 см этилового спирта.

4.4.1.2 Приготовление водно-спиртового раствора кристаллического фиолетового

1 см насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового по 4.4.1.1 растворяют в 10 см дистиллированной воды.

4.4.1.3 Приготовление раствора Люголя

2 г йодида калия растворяют в 5-10 см дистиллированной воды, затем прибавляют 1 г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного его растворения. Затем приливают остальное количество дистиллированной воды. Для приготовления раствора используют 300 см дистиллированной воды.

4.4.1.4 Приготовление карболового раствора фуксина Циля

1 г основного кристаллического фуксина растирают в фарфоровой ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и несколькими каплями глицерина. Во время растирания небольшими порциями прибавляют 96% этиловый спирт в количестве 10 см. После того как краситель хорошо разотрется, приливают при постоянном помешивании 100 см дистиллированной воды. Раствор красителя фильтруют через влажный бумажный фильтр. Фуксин Циля очень стойкий и может храниться долгое время в посуде из темного стекла с притертой пробкой.

4.4.1.5 Приготовление водно-спиртового раствора фуксина (раствора Пфейфера)

К 1 части карболового фуксина Циля приливают 9 частей дистиллированной воды. Раствор очень нестойкий, поэтому его готовят непосредственно перед использованием.

4.4.2 Приготовление реактивов из метиленового голубого

4.4.2.1 Приготовление основного спиртового раствора метиленового голубого для окрашивания микропрепаратов

10 г метиленового голубого смешивают со 100 см 96% раствора этилового спирта. Раствор ставят в термостат при температуре (37±1) °С на 24 ч, затем фильтруют в термостате при той же температуре.

Срок хранения основного раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37±1) °С не более 3 мес.

4.4.2.2 Приготовление краски для препаратов

К 30 см основного спиртового раствора метиленового голубого прибавляют 100 см дистиллированной воды и 1 см раствора гидроокиси калия с массовой концентрацией 10 г/дм.

4.4.3 Приготовление раствора резазурина для постановки редуктазной пробы и определения ингибирующих веществ

Основной раствор резазурино-натриевой соли готовят следующим образом: 0,1 г резазурино-натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.

Срок хранения основного раствора не более 30 сут при температуре 8-10 °С.

Основной раствор резазурино-натриевой соли используется для приготовления рабочего раствора для постановки редуктазной пробы и при определении ингибирующих веществ.

Рабочий раствор резазурино-натриевой соли готовят разбавлением основного раствора прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой в соотношении 1:2,5 (например, к 10 см основного раствора прибавляют 25 см воды). Массовая доля резазурина в рабочем растворе - 0,014%.

Хранят рабочий раствор не более 3 сут при температуре 0-5 °С.

Основной и рабочий растворы хранят в светонепроницаемой посуде.