МУК 4.1.2229-07

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение домоевой кислоты в морепродуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     

Дата введения 2007-11-01

1. Методические указания разработаны ГУ НИИ питания РАМН (В.А.Тутельян, С.А.Хотимченко, Ю.А.Коханова, Т.В.Киселева, К.И.Эллер).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Роспотребнадзора (протокол N 2 от 21 июня 2007 г.).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 17 июля 2007 г.

4. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ 1 ноября 2007 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Назначение и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают метод определения домоевой кислоты в морепродуктах на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии.

1.2. Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы для производственного контроля другими испытательными лабораториями, аккредитованными в порядке, установленном Правительством Российской Федерации.

2. Общие положения

2.1. Представителем группы фикотоксинов является домоевая кислота (амнестический яд моллюсков). Основным продуцентом токсина являются диатомовые микроводоросли рода Pseudo-nitzschia. В зависимости от количества токсина, поступившего в организм, клиническая картина отравления может варьировать от гастроинтестинальных симптомов (тошнота, рвота, диарея, боли в животе) и неврологической симптоматики (сильные головные боли, головокружение и т.д.) до перманентной потери краткосрочной памяти и летального исхода. Воздействуя на глютаматные рецепторы нервной системы, токсин вызывает нейрональную дегенерацию, а морфологические изменения тканей характеризуются некрозом глубинных структур мозга (гиппокамп, миндалевидное ядро, таламус).

2.2. В настоящее время во многих странах норматив содержания токсина в двустворчатых моллюсках определен на уровне не более 20 мкг/г ткани моллюска. Содержание домоевой кислоты в крабах нормируется только для внутренних органов (не более 30 мг/кг). Известно, что распространение домоевой кислоты по пищевой цепи затрагивает и другие морские организмы, в том числе ракообразных, головоногих моллюсков, рыб и даже млекопитающих (киты, морские львы, тюлени). Таким образом, источником поступления токсина в организм человека является потребление морепродуктов.

2.3. В связи с тем, что при попадании в организм небольшого количества токсина отмечаются только неспецифические гастроинтестинальные симптомы, возможна гиподиагностика данного отравления. Это определяет необходимость разработки доступных и надежных методов обнаружения и количественного определения домоевой кислоты, что позволит проводить надзор за содержанием этого вещества в морепродуктах и оценить риск его влияния на здоровье населения.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: CHNO.

Молекулярная масса: 311,14.

Количественный метод определения домоевой кислоты в морепродуктах при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии отличается низким пределом обнаружения (0,5 мкг/г), хорошей воспроизводимостью и надежностью (табл.1 в разделе 11). Диапазон определяемых концентраций составляет 0,5-200 мкг/г. Относительная погрешность измерений составляет 25%.

3. Отбор и подготовка проб

Отбор морепродуктов осуществляется в соответствии с требованиями ГОСТ 7631* "Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний".

Отобранные образцы морепродуктов герметично упаковывают в полиэтиленовые мешки либо стеклянные банки с притертыми крышками. Образцы доставляют в лабораторию для анализа сразу же после отбора проб или, в случае необходимости, замораживают и хранят при температуре не менее -10 °С, используя для этой цели морозильники или соответствующие приспособления.

После извлечения тела моллюска из раковины его необходимо обсушить для удаления соленой воды. Измельчить образцы в приборе для грубого измельчения. Подготовка образцов из этого гомогената может быть произведена либо немедленно после измельчения, либо позднее после повторного перемешивания. Гомогенат может храниться не более месяца при температуре -10...-20 °С, в плотно закрытой емкости.

4. Принцип метода

Метод основан на экстракции домоевой кислоты из гомогенизированных тканей морепродуктов водным раствором метанола (1:1, v/v). Количество токсина определяется при помощи ВЭЖХ с УФ-детектором в обращенно-фазном варианте.

5. Аппаратура, материалы, реактивы

Жидкостный хроматограф с УФ-детектором (любой марки), длина волны 242 нм.

Колонка с обращенной фазой (С18) (Vydac 201TP, Supelco LC-PAH) или эквивалентная, длина 25 см, диаметр 4,6 мм, диаметр сорбента 5 мкм.

Прибор для грубого измельчения тканей (блендер).

Гомогенизатор лабораторный.

Центрифуга любого типа, обеспечивающая 4000 об./мин.

рН-метр.

Весы аналитические по ГОСТ 24104-2001.

Цилиндры мерные объемом 100, 200, 500 см по ГОСТ 1770.

Колбы мерные на 25 см по ГОСТ 1770.