ГОСТ Р 52831-2007
(ИСО 14674:2005)

Группа Н09

     
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

     

МОЛОКО И СУХОЕ МОЛОКО

Определение содержания афлатоксина M
Очистка с помощью иммуноаффинной хроматографии
и определение с помощью тонкослойной хроматографии

Milk and milk powder. Determination of aflatoxin M content.
Clean-up by immunoaffinity chromatography
and determination by thin-layer chromatography

ОКС 67.100.01

ОКСТУ 9109

Дата введения 2009-01-01

     

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе русской версии стандарта, указанного в пункте 4, который выполнен ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ"

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 декабря 2007 г. N 458-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 14674:2005 "Молоко и сухое молоко. Определение содержания афлатоксина M. Очистка с помощью иммуноаффинной хроматографии и определение с помощью тонкослойной хроматографии" (ISO 14674:2005 "Milk and milk powder - Determination of aflatoxin M content - Clean-up by immunoaffinity chromatography and determination by thin-layer chromatography"). При этом дополнительные положения и требования, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены курсивом.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам Российский Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок, указанные в дополнительном приложении В

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на молоко и сухое молоко и устанавливает метод определения содержания афлатоксина М с помощью тонкослойной хроматографии с предварительной очисткой с использованием иммуноаффинной хроматографии.

Минимально определяемое количество афлатоксина М составляет 2 нг, что соответствует около 0,10 мкг/дм для молока или разбавленного сухого молока.

      2 Нормативные ссылки*   

______________

* Наименование пункта  в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
     
     ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
     
     ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений
     
     ГОСТ Р 52501-2005 Вода для лабораторного анализа. Технические условия
     
     ГОСТ Р 52738-2007 Молоко и продукты переработки молока. Термины и определения
     
     ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
     
     ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия
     
     ГОСТ 5789-78 Реактивы. Толуол. Технические условия
     
     ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия
     
     ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
     
     ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия
     
     ГОСТ 22300-76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия
     
     ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
     
     ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
     
     ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
     
     ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При использовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применяют термины по ГОСТ Р 52738, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 содержание афлатоксина М: Массовая концентрация афлатоксина М, выраженная в мкг/дм, - для молока или массовая доля афлатоксина М, выраженная в мкг/кг, - для сухого молока, определенная методом, установленным в настоящем стандарте.

3.2 аналитический выход (recovery): Отношение массы, массовой доли или массовой концентрации определяемого компонента, найденное данным методом, к действительному значению соответствующей величины в исходном образце.

     4 Сущность метода *  

______________

* Наименование пункта  в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.      

Афлатоксин М экстрагируют, пропуская пробу через иммуноаффинную колонку, содержащую специфические антитела, связанные с твердым материалом субстрата. Когда проба проходит через колонку, антитела селективно связываются с любым присутствующим афлатоксином М (антигеном) и образуют комплекс антитело-антиген. Все другие компоненты основного состава пробы вымываются из колонки водой. Затем афлатоксин М элюируют из колонки смесью ацетонитрил/метанол. В соответствии с концентрацией элюата количество афлатоксина М определяют методом однонаправленной тонкослойной хроматографии. В случае возникновения помех проводят двунаправленную тонкослойную хроматографию, чтобы отделить афлатоксин М от примесей.

     5 Реактивы

При отсутствии специальных указаний используют реактивы только признанных аналитических марок.

Вода должна соответствовать требованиям квалификации не ниже 3-й степени чистоты согласно ГОСТ Р 52501. Вода не должна содержать органические примеси.

5.1 Чистые растворители

5.1.1 Хлороформ по ГОСТ 20015.

5.1.2 Ацетонитрил [1].

5.1.3 Диэтиловый эфир по ГОСТ 22300.

5.1.4 Метанол по ГОСТ 6995.

5.1.5 Толуол по ГОСТ 5789.

5.1.6 Ацетон по ГОСТ 2603.

5.1.7 Изопропанол [2].

5.2 Смесь ацетонитрил/метанол, в объемном соотношении 3:2

Смесь приготовляют, добавляя 30 см ацетонитрила (см. 5.1.2) к 20 см метанола (см. 5.1.4), и перемешивают.

5.3 Смесь толуол/ацетонитрил, в объемном соотношении 9:1

Смесь приготовляют, добавляя 9 см толуола (см. 5.1.5) к 1 см ацетонитрила (см. 5.1.2), и перемешивают. Этот раствор используют для повторного суспендирования стандартных растворов афлатоксина М (см. 5.5) и выпаренного элюата перед проведением анализа методом тонкослойной хроматографии.

5.4 Растворители для проведения тонкослойной хроматографии

5.4.1 Раствор для однонаправленной тонкослойной хроматографии

Приготовляют 100 см раствора для однонаправленной тонкослойной хроматографии путем добавления 4 см метанола (см. 5.1.4) и 1 см воды к 95 см диэтилового эфира (см. 5.1.3) и тщательно перемешивают (объемное отношение 95:4:1).

5.4.2 Раствор для двунаправленной тонкослойной хроматографии

Приготовляют 100 см раствора для двунаправленной тонкослойной хроматографии путем добавления 10 см ацетона (см. 5.1.6) и 3 см изопропанола (см. 5.1.7) к 87 см хлороформа (см. 5.1.1) и тщательно перемешивают (объемное отношение 87:10:3).

5.5 Стандартный раствор афлатоксина М

5.5.1 Основной стандартный раствор афлатоксина М

Приготовляют основной стандартный раствор афлатоксина М с номинальной концентрацией афлатоксина М 10 мкг/см (см. 5.1.1) путем повторного суспендирования 10 мкг лиофилизированной пленки афлатоксина М в 1 см хлороформа.

Согласно протоколу АОАС [3] концентрацию основного стандартного раствора афлатоксина М определяют путем измерения его оптической плотности при длине волны максимального поглощения в диапазоне длин волн 200-400 нм относительно хлороформа (см. 5.1.1), применяемого в качестве образца сравнения.

Контролируют чистоту афлатоксина М, регистрируя спектр в интервале 200-400 нм. Измеряют оптическую плотность () при длине волны максимума поглощения (), близкой к 365 нм.

Вычисляют массовую концентрацию , мкг/см, по формуле

,                                                           (1)