• Текст документа
  • Статус
Оглавление
Поиск в тексте
Действующий


МУК 4.1.2158-07

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы
и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения
методом иммуноферментного анализа



Дата введения: с момента утверждения


1. РАЗРАБОТАНЫ ГУ НИИ питания РАМН: Тутельян В.А. (руководитель), Хотимченко С.А., Шевелева С.А., Ефимочкина Н.Р., Барбер Н.В., Григорьев А.М.; ФГУЗ "Центр государственного санитарно-эпидемиологического надзора в г.Москве" (Иванова Л.И., Кругликова Т.А.)

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Российской Федерации

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ 18 января 2007 г. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы определения остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в пищевом сырье и пищевых продуктах животного происхождения (в мясе и мясопродуктах; в птице и птицепродуктах; в молоке и молочных продуктах) на основе твердофазного иммуноферментного анализа.

1.2. Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы для проведения производственного контроля другими испытательными лабораториями, аккредитованных в порядке, установленном Правительством Российской Федерации. Методические указания не могут быть применены для арбитражных исследований.

2. Общие положения

2.1. Среди контаминантов продовольственного сырья и пищевых продуктов важное место занимают остатки антимикробных ветеринарных препаратов, используемых для лечения и профилактики инфекционных заболеваний животных и птицы, в том числе антибиотики тетрациклиновой группы и сульфаниламидные препараты. При их поступлении в организм человека могут возникать аллергические реакции, дисбиотические изменения микрофлоры кишечника, а также происходит формирование антибиотикоустойчивых форм микроорганизмов.

Для определения остаточных количеств антибиотиков в пищевых продуктах в настоящее время в основном применяют микробиологические методы, которые являются сравнительно простыми и дешевыми, однако, отличаются недостаточной специфичностью результатов.

2.2. Для скрининга пищевых продуктов на загрязненность антибактериальными препаратами, в том числе сульфаниламидами, целесообразно использовать методы иммунохимического анализа, обеспечивающие высокую специфичность и точность, при этом предпочтительнее применять методы твердофазного иммуноферментного анализа (далее - ИФА), которые являются высокочувствительными.

2.3. При определении методом ИФА в соответствии с настоящими Методическими указаниями антибиотиков тетрациклиновой группы предел обнаружения их составляет от 0,0015 мг/кг до 0,15 мг/кг в зависимости от вида продукта; для сульфаниламидных препаратов - от 0,002 мг/кг до 0,02 мг/кг в зависимости от вида продукта.

3. Отбор и подготовка проб

3.1. Отбор пищевых образцов для исследования осуществляется в соответствии с требованиями ГОСТ 7269-79 "Мясо", ГОСТ 7202.0-74 "Мясо птицы", ГОСТ 3622-68 "Молоко и молочные продукты".

3.2. Отобранные образцы продуктов герметично упаковывают в полиэтиленовые мешки, стеклянные банки с притертыми крышками, маркируют и нумеруют. Образцы доставляют в лабораторию для анализа сразу же после отбора проб. В случае необходимости допускается хранить при температуре 4±2 °С в течение времени не более срока годности пищевых продуктов или замораживать до температуры минус 10-12 °С и хранить не более 2 недель.

3.3. К исследованию скоропортящихся образцов следует приступать в день их доставки в лабораторию.

4. Определение антибиотиков тетрациклиновой группы

4.1. Принцип метода ИФА


Базовым принципом для количественного определения антибиотиков тетрациклиновой группы в пищевых продуктах является твердофазный конкурентный иммуноферментный анализ на полистироловых планшетах. Метод основан на конкуренции свободного антибиотика из исследуемых образцов и антибиотика, предварительно адсорбированного на твердой фазе (лунке планшета) в составе белкового конъюгата, за центры связывания специфичных к тетрациклинам антител во вносимом растворе. После отделения не связавшихся реагентов количество антител, прореагировавших с иммобилизованным антигеном, определяют с помощью вторичных антивидовых антител, меченных пероксидазой хрена*. Количество связавшегося с антителами конъюгата вторичных антител определяют с помощью субстрат - хромогенной смеси. При этом количество определяемого антибиотика, содержащегося в исследуемом образце, обратно пропорционально регистрируемой оптической плотности продукта ферментативной реакции.
________________
* Текст соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.


4.2. Аппаратура, материалы, реактивы

Перечень и характеристики оборудования и материалов

Нормативные документы, примечания

1

2

Фотометр планшетный вертикального сканирования, с фильтрами, соответствующими длине волны 450 нм

"Униплан", "Мультискан" или иного типа с теми же характеристиками

Дозаторы пипеточные автоматические с переменным объемом 0,02-0,2 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа, 0,1-1 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа одноканальные

"Ленпипет", "Термолабсистемс" или иные тех же объемов

Дозаторы пипеточные автоматические восьмиканальные с переменным объемом 0,05-0,3 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа


Наконечники для автоматических пипеток объемом до 0,30 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа и до 1,00 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа однократного применения

По спецификации изготовителя

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН ±0,01 или рН-м

ГОСТ 19881-74 или другие марки с аналогичными характеристиками

Весы аналитические 120 г / 0,001 мг

ГОСТ 24104-88Е***

Весы лабораторные общего назначения, 2 класса точности, до 200 г / 0,1 г

ГОСТ 24104-88Е***

Гомогенизатор лабораторный

Типа "Ультратюрракс", "Диакс" или аналогичные

Аквадистиллятор

В соответствии с ГОСТ 6709-72

Холодильник бытовой электрический

ГОСТ 16317-87

Стаканы химические и колбы мерные вместимостью 25, 50, 200 и 500 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные, 2 класса точности 1, 2, 5, 10 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

ГОСТ 20292-74**** или аналогичные

Часы механические сигнальные

ГОСТ 3145-84

Центрифуга настольная с эффективностью не менее 4000 g

По ТУ 5.375-4261 или иного типа

Колонка для твердофазной экстракции RIDAМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа С18 или аналогичная с такими же характеристиками

По спецификации изготовителя

Цилиндры мерные вместимостью 25 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

По спецификации изготовителя

Шейкер лабораторный для пробирок

Типа "Вортекс"

Микроиспаритель лабораторный одноканальный

Моделей ПЭ-2300, "Мини-Вап" или других аналогичного назначения

Насос (компрессор) мембранный

РКадет, РКадмирал или иных моделей аналогичного назначения

Устройство для твердофазной экстракции

"Доркус", "Вакэлют" или иных моделей аналогичного назначения

Аппарат универсальный для встряхивания

ТУ 64-1-2451-78

Шкаф (стол) лабораторный с вытяжным устройством


Набор реагентов для количественного определения тетрациклина типа "Ридаскрин Тетрациклин"

По спецификации изготовителя

Дигидрофосфат натрия водный

хч**

Гидрофосфат натрия

хч

Гидрофосфат натрия двухводный

хч

Хлорид натрия

хч

Гидрооксид натрия

хч

Моногидрат лимонной кислоты

хч

Щавелевая кислота

хч

ЭДТА-натриевая соль

хч

Твин 20

По спецификации изготовителя

Метанол* или этанол 95,0%

хч

Этилацетат

хч

н-гексан

хч

Ацетонитрил

хч

Дистиллированная вода

метанол* - ядовитое вещество, требует мер безопасности при работе;


хч** - химически чистые вещества

________________

*** На территории Российской Федерации действует ГОСТ 24104-2001;
**** Действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91, здесь и далее. - Примечание изготовителя базы данных.

5. Характеристика наборов для иммуноферментного определения тетрациклина


Для иммуноферментного определения тетрациклина могут быть использованы промышленно изготовленные наборы, метрологические характеристики которых не ниже указанных в настоящем документе после процедуры стандартизации их относительно данного метода.

5.1. Состав набора "Ридаскрин Тетрациклин"

Микротитровальный планшет на 96 лунок (12 стрипов по 8 лунок), сенсибилизированных препаратом тетрациклина - 1 шт.

Комплект стандартных растворов тетрациклина со следующими концентрациями: 0 нг/смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа, 0,5 нг/смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа, 1,5 нг/смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа, 4,5 нг/смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа, 13,5 нг/смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа, 40,5 нг/смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа в буферном растворе по 1,3 мл - 6 флаконов

Раствор антител - 6,0 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

Конъюгат вторичных антител с пероксидазой - 10,0 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

Субстрат, содержащий пероксид карбамида (мочевины) - 7,0 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

Хромоген, содержащий тетраметилбензидин - 7,0 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

Стоп-реагент, содержащий 1 N серную кислоту - 14,0 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

Буфер 1, для разбавления стандартных растворов тетрациклина и растворов образцов - 50,0 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

Буфер 2, для разбавления стандартных образцов при анализе молока - 10,0 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа



Примечание. Набор рассчитан на проведение анализа в 2 повторностях: 42 исследуемых образца и 6 калибровочных проб (всего 96 определений на один планшет).

5.2. Аналитические характеристики набора

5.2.1. Специфичность метода


Метод анализа при использовании набора "Ридаскрин Тетрациклин" характеризуется показателем специфичности*, составляющим для:

Тетрациклина - 100%

Хлортетрациклина - 100%

Окситетрациклина - 10%

Миноциклина - 125%

Ролитетрациклина - 110%

Демеклоциклина - 35%

Доксициклина - 5%
_________________
* - гарантируется изготовителем

5.2.2. Чувствительность метода


Предел обнаружения тетрациклина и хлортетрациклина в молоке - 0,0015 мг/кг, мясе - 0,006 мг/кг, окситетрациклина в молоке - 0,015 мг/кг, в мясе - 0,06 мг/кг.

Показатель извлекаемости составляет более 70%, в т.ч. в молоке - 75±5%, в мясе и мясопродуктах - 85±15%.

При искусственном загрязнении проб молока 5 мкг/л тетрациклина или 100 мкг/л окситетрациклина степень извлечения составляет 90±10%.

5.3. Рекомендации по использованию наборов "Ридаскрин Тетрациклин"

5.3.1. При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие в один и тот же набор. Разбавление или замена реагентов, использование реагентов из набора с другим номером партии может привести к потере чувствительности или ошибке определения.

5.3.2. Хранить наборы следует при температуре в пределах от 2 до 8 °С. Категорически не допускается хранение при минусовой температуре и замораживание реагентов набора. Для хранения неиспользованных стрипов (лунок) их упаковывают в оригинальный фольгированный пакет вместе с имеющимся осушителем в плотно закрытом виде.

5.3.3. Следует избегать попадания прямых солнечных лучей на флакон с раствором хромогена из-за его светочувствительности.

5.3.4. В случае окрашивания раствора хромогена его применение для анализа не рекомендуется, поскольку окрашивание раствора хромогена является признаком порчи.

6. Требования техники безопасности при проведении испытаний

Стоп-реагент содержит в своем составе серную кислоту, поэтому следует избегать контакта стоп-реагента с кожей.

7. Проведение испытаний с применением набора "Ридаскрин Тетрациклин"

7.1. Подготовка проб для анализа


Отбор образцов для анализа ведется в соответствии с п.3 данного документа. Образцы, предназначенные для анализа, должны храниться в холодильнике, в темном месте.

7.1.1. Подготовка проб молока


Молоко объемом 5 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа охладить до температуры 6±2 °С, перенести в центрифужную пробирку, центрифугировать при температуре 4-10 °С в течение 15 мин при эффективности центрифугирования 4000 g*. Удалить верхний слой жира и перенести аликвоту обезжиренного молока в новую чистую пробирку. Смешать обезжиренное молоко с буфером N 1 в соотношении 1:10. Для анализа использовать 0,05 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа разведения обезжиренного молока с буфером на 1 лунку планшета. Коэффициент разбавления - 10.
________________
* Эффективность центрифугирования измеряется в g и зависит от скорости и радиуса вращения (см. технический паспорт имеющейся центрифуги). Например, при использовании центрифуги ОПН-8 с угловым ротором эффективности 4000 g соответствует скорость вращения ротора около 7000 об/мин.

7.1.2. Подготовка проб мяса

7.1.2.1. Приготовление реагентов для пробоподготовки


При исследовании образцов мяса для пробоподготовки необходимо приготовить следующие реагенты:

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа метанол (допускается использование спирта этилового 95,0%);

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буфер Макллвейна: 12,9 г лимонной кислоты моногидрата; 10,9 г NaМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализаHPOМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа; 37,2 г ЭДТА-натриевой соли растворить в дистиллированной воде и довести до объема 1000 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа; установить рН 3,8;

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа раствор 20 мМ щавелевой кислоты в метаноле (этаноле) (1,8 г/л).

7.1.2.2. Приготовление проб


Пробу мяса измельчить с использованием лабораторного гомогенизатора. Далее 5 г гомогенизированной пробы поместить в чистую центрифужную пробирку, смешать с 25 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буфера Макллвейна и встряхивать в шейкере в течение 30 мин. Полученную суспензию охладить до температуры 15 °С и центрифугировать в течение 10 мин при эффективности центрифугирования 4000 g. Отобрать пипеткой верхний слой в чистую пробирку и повторить с оставшейся пробой экстракцию с 25 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буфера Макллвейна. После этого объединить супернатанты (50 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа) и профильтровать раствор через гофрированный фильтр.

7.1.2.3. Очистка раствора методом твердофазной экстракции


Из полученного по п.7.1.2.2 фильтрата отобрать 5 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа и очистить раствор методом твердофазной экстракции на колонке RIDAМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа С18 следующим образом:

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа предварительно колонку промывают 3 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа метанола (этанола) со скоростью 1 капля в секунду: при отсутствии устройства для твердофазной экстракции можно использовать разовый пластиковый шприц на 5 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа;

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа промыть колонку 2 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа дистиллированной воды со скоростью 1 капля в секунду;

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа пропустить через колонку 5 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа подготовленного раствора исследуемой пробы со скоростью 15 капель в минуту;

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа промыть колонку 3 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа дистиллированной воды со скоростью 1 капля в секунду;

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа удалить из колонки остатки жидкости и сушить колонку в токе воздуха или азота 2 мин;

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа адсорбированные на колонке вещества осторожно, со скоростью 15 капель в минуту, элюировать 2 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа 20 мМ раствора щавелевой кислоты в метаноле (этаноле) в чистую пробирку;

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа элюат разбавить буфером N 1 в 10 раз (1:9), например, смешав 0,05 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа элюата и 0,45 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буфера N 1. Раствор готов к испытанию в ИФА. Для анализа используют 0,05 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа раствора.

7.2. Приготовление реагентов для анализа


Перед использованием набора довести температуру всех реагентов до комнатной температуры в пределах 20-25 °С, а после использования охладить все оставшиеся реагенты до температуры 4±2 °С.

В процессе выполнения анализа нельзя допускать высыхания лунок планшета. На всех стадиях инкубации следует избегать воздействия прямого солнечного света. При инкубации планшета рекомендуется закрыть его непрозрачным экраном.

Все разведения реагентов и расчеты представлены для проведения анализа на одном планшете. Построение калибровочной кривой необходимо проводить для каждой серии определений.

7.2.1. Приготовление стандартных растворов


Подготовку стандартных растворов проводят только в стеклянной посуде, не допускается использование пластиковой посуды.

Для подготовки к использованию стандартных растворов тетрациклина концентраты растворов, входящие в состав набора, разбавляют буфером N 1 или буфером N 2 в нижеприведенных пропорциях. После разбавления необходимо тщательно перемешать готовые растворы:

Стандарт 1 (С1). Для приготовления стандарта 1 с концентрацией 0 мкг/л тетрациклина 0,05 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа концентрата N 1 смешивают с 0,45 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буферного раствора

Стандарт 2 (С2). Для приготовления стандарта 2 с концентрацией 0,05 мкг/л тетрациклина 0,05 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа концентрата N 2 смешивают с 0,45 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буферного раствора

Стандарт 3 (С3). Для приготовления стандарта 3 с концентрацией 0,15 мкг/л тетрациклина 0,05 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа концентрата N 3 смешивают с 0,45 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буферного раствора

Стандарт 4 (С4). Для приготовления стандарта 4 с концентрацией 0,45 мкг/л тетрациклина 0,05 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа концентрата N 4 смешивают с 0,45 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буферного раствора

Стандарт 5 (С5). Для приготовления стандарта 5 с концентрацией 1,35 мкг/л тетрациклина 0,05 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа концентрата N 5 смешивают с 0,45 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буферного раствора

Стандарт 6 (С6). Для приготовления стандарта 6 с концентрацией 4,05 мкг/л тетрациклина 0,05 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа концентрата N 6 смешивают с 0,45 смМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа буферного раствора



Буферный раствор N 1 используется для разведения стандартных растворов при исследовании проб мяса и мясопродуктов, птицы и птицепродуктов.

Буферный раствор N 2 используется для разведения стандартных растворов при исследовании проб молока.

Перед использованием буферного раствора N 2, использующегося при исследовании проб молока, следует энергично перемешать раствор с помощью встряхивателя типа "вортекс".

Для каждой серии исследований следует готовить свежие стандартные растворы.

7.2.2. Подготовка моющего буферного раствора


Для приготовления моющего фосфатного буферного раствора с твином навески 0,55 г NaHМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализаPOМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа·НМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализаО, 2,85 г NaМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализаHPOМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа·2HМУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализаO и 9 г NaCl растворить в дистиллированной воде, добавить 1 мл твина 20 и довести до объема 1000 мл; рН моющего фосфатного буфера должен быть 7,3±0,1.

7.2.3. Подготовка раствора антител


Раствор антител к тетрациклину (флакон с черной крышкой), входящий в состав набора "Ридаскрин", поставляется в готовом к употреблению виде. Перед употреблением достаточно вскрыть флакон.

7.2.4. Подготовка раствора конъюгата


Раствор конъюгата с ферментом (флакон с красной крышкой) также готов для использования. Перед употреблением достаточно открыть флакон.

7.2.5. Подготовка микротитровального планшета


Перед выполнением анализа из планшета следует извлечь необходимое количество стрипов. Остальные стрипы следует тщательно упаковать в фольгированный пакет вместе с осушителем, закрыть застежку пакета и поместить на хранение при температуре (4±2) °С.

7.3. Процедура анализа


Вставить в рамку планшета стрипы (лунки) в количестве, необходимом для выполнения всех запланированных определений в двух повторностях. Записать координаты лунок, предназначенных для стандартных растворов и подготовленных исследуемых растворов. Пример формы записи показан на рис.1.

Рис.1. Пример формы записи координат лунок перед выполнением анализа

С1

С1

П3

П3

П11

П11

П19

П19

П27

П27

П35

П35

С2

С2

П4

П4

П12

П12

П20

П20

П28

П28

П36

П36

С3

С3

П5

П5

П13

П13

П21

П21

П29

П29

П37

П37

С4

С4

П6

П6

П14

П14

П22

П22

П30

Доступ к полной версии этого документа ограничен

Ознакомиться с документом вы можете, заказав бесплатную демонстрацию систем «Кодекс» и «Техэксперт».

Что вы получите:

После завершения процесса оплаты вы получите доступ к полному тексту документа, возможность сохранить его в формате .pdf, а также копию документа на свой e-mail. На мобильный телефон придет подтверждение оплаты.

При возникновении проблем свяжитесь с нами по адресу spp@kodeks.ru

МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

Название документа: МУК 4.1.2158-07 Определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы и сульфаниламидных препаратов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа

Номер документа: 4.1.2158-07

Вид документа: МУК (Методические указания по методам контроля)

Принявший орган: Главный государственный санитарный врач РФ

Статус: Действующий

Опубликован: официальное издание

Бюллетень нормативных и методических документов Госсанэпиднадзора. Выпуск 1 (27), март 2007 год

Дата принятия: 18 января 2007

Дата начала действия: 18 января 2007
Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах