МУК 4.2.735-99

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
 3.2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Паразитологические методы лабораторной диагностики
гельминтозов и протозоозов

     

Дата введения 1999-04-25

1. ПОДГОТОВЛЕНЫ сотрудниками Федерального центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора Минздрава России: к.б.н. Т.Н.Цыбиной, Т.Г.Сысковой и сотрудниками Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского Минздрава России: к.м.н. Г.Л.Плющевой, к.б.н. Л.М.Гордеевой, к.м.н. А.И.Чернышенко, д.м.н. В.П.Сергиевым, д.м.н. Н.А.Романенко, к.м.н. Т.В.Продеус.

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 25 февраля 1999 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения и нормативные ссылки

Лабораторные исследования на гельминтозы и протозоозы проводятся клинико-диагностическими лабораториями лечебно-профилактических учреждений, ведомственными лабораториями (НИИ, вузов, военных госпиталей, частных клиник и т.п.), а также другими лабораториями, имеющими лицензии или аккредитованными в системе Госстандарта и госсанэпиднадзора для проведения данных исследований в независимости от формы собственности.

На центры госсанэпиднадзора возлагается организация работы по обследованию населения на гельминтозы и протозоозы, методическое руководство, контроль за качеством работы, проводимой клинико-диагностическими лабораториями лечебно-профилактических учреждений и ведомственных лабораторий, обследование населения по эпидемиологическим показаниям и с консультативной целью.

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на:

- Санитарные правила и нормы СанПиН 3.2.569-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации"*. Госкомсанэпиднадзор России. - М., 1988;

______________

*  Действуют СанПиН 3.2.1333-03. - Примечание "КОДЕКС".

- Санитарные правила СП 3.1/3.2.558-96 "Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний"*. Госкомсанэпиднадзор России. - М., 1997;

______________

*  Действуют  СП 3.1/3.2.1279-03. - Примечание "КОДЕКС".

- Инструкция по проектированию санитарно-эпидемиологических станций. СН 535-81. Госгражданстрой. - М., 1982;

- Система аккредитации испытательных лабораторий (центров) государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации. Минздрав России и Госстандарт России, Федеральный центр госсанэпиднадзора России. - М., 1997;

- Санитарные правила СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами". Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России. - М., 1999.

Настоящие методические указания являются обязательными при выполнении лабораторных исследований биологического материала от людей с целью обнаружения паразитирующих в организме гельминтов и простейших.

Насчитывается свыше 250 видов паразитирующих у человека гельминтов, вызывающих заболевания - гельминтозы. На территории нашей страны обнаружено около 100 видов гельминтов, из них более 20 имеют широкое, практически повсеместное распространение. К паразитарным заболеваниям относятся также протозойные инвазии, возбудителями которых являются простейшие одноклеточные организмы. В настоящее время известно около 50 видов простейших, способных вызывать у человека заболевания.

Важность качественной лабораторной диагностики паразитарных заболеваний определяется во многих случаях трудностью их клинической и эпидемиологической диагностики. Многие инвазии у людей, в т.ч. у детей, нередко протекают субклинически, латентно.

В связи с этим грамотная лабораторная диагностика инвазий приобретает неоценимое значение. Качество лабораторной диагностики и уровень выявляемости зависят от тщательного выполнения всех требований любой методики, правильного выбора материала для исследования, знания циклов развития гельминтов, простейших, а также путей выделения из организма человека, морфологического строения яиц гельминтов и различных форм простейших. На результат анализа также влияет: неправильный забор материала или длительное его хранение, а также отсутствие подготовки больного лечащим врачом перед лабораторным обследованием.

Разнообразие возбудителей, форм паразитирования, и способов выделения диагностических стадий определяет достаточно широкий спектр методов диагностики.

Методы лабораторной диагностики паразитарных заболеваний применяются:

- с диагностической целью;

- для контроля эффективности лечения паразитарных заболеваний;

- для оценки качества проведения комплекса противопаразитарных мероприятий;

- с целью выявления источников заражения;

- для установления уровня пораженности населения.

Данный документ включает паразитологические методы лабораторной диагностики наиболее распространенных паразитарных заболеваний.

 2. Отбор проб и условия доставки материала в лабораторию
для паразитологического исследования

Материалом для лабораторных паразитологических исследований на гельминтозы и протозоозы служит различный биологический материал от человека: дуоденальное содержимое, кал, ректальная слизь, моча, мокрота, отделяемое бронхов, кровь, биопсийные ткани и др.

2.1. Отбор проб и доставка фекалий (кала)

- Фекалии после дефекации отбирают из разных участков в количестве не менее 50 г (объем примерно от чайной до столовой ложки).

- Помещают в чистую (прокипяченную), сухую, стеклянную или пластмассовую посуду с крышками.

- Стерильная стеклянная (пластиковая) посуда требуется при заборе кала для исследования на амебиаз.

- Кал должен быть доставлен в лабораторию и исследован в день дефекации, поэтому, как правило, доставляется утренний кал.

- Для обнаружения яиц стронгилоидеса кал доставляется и исследуется не позднее 1 ч после дефекации.

- Для обнаружения личинок стронгилоидеса, яиц анкилостомид и трихостронгилоид исследуется кал не позднее 4 ч после дефекации.

- Для обнаружения вегетативных (подвижных) форм дизентерийной амебы необходимо кал доставить и провести исследование не позднее 20 мин после дефекации или 40 мин, если это время кал сохранялся при температуре 4 °С.

- Для обнаружения вегетативных форм кишечных простейших (лямблий, диэнтамебы и др.) в жидком и полуоформленном "стуле" время от дефекации до исследования должно быть по возможности сокращено до минимума (не более 1-1,5 ч).

2.1.1. Отбор проб фекалий в консерванты

     Используется:

- при невозможности исследования кала сразу же после дефекации или в день поступления материала в лабораторию.

Физический способ хранения фекалий:

- при низкой температуре от 0 до 4 °С не более суток.

Химические консерванты

1. Жидкость Барбагалло: раствор формалина на физиологическом растворе (3 мл формалина 40% + 97 мл физраствора или 1 л дистиллированной воды + 30 мл формалина 40% + 8,5 г хлорида натрия).

2. Раствор формалина 4%-ный.

3. Смесь 4%-ного раствора формалина с равным количеством глицерина.

4. Раствор уксусной кислоты от 3 до 10%.

5. Растворы детергентов 1-1,5%-ные - моющие средства типа "Лотос", "Экстра" (кроме биоактивных); перед приготовлением раствора из порошка удаляют влагу, выдерживая в сухожаровом шкафу при 100 °С в течение 2 ч.

Заливается кал одним из приготовленных консервантов в объеме 1:1 или 1 часть фекалий и 2 части раствора консерванта, при этом тщательно перемешивается индивидуальной палочкой.

Хранить фекалии в растворах консервантов можно от нескольких месяцев до года, при более длительном хранении возможно разрушение яиц гельминтов.

6. Для консервации простейших кишечника фекалии можно поместить в консервант Турдыева: 80,0 мл 0,2%-ного раствора азотистокислого натрия (0,16 г NaNO + 80,0 мл воды дистиллированной) + 2,0 мл глицерина + 10 мл концентрированного формалина (аптечного) + 8,0 мл концентрированного раствора Люголя (см. п.4.2.4.1).

Смешивать в соотношении: 1 часть кала и 3 части консерванта.

7. Химические консерванты для консервации и хранения взрослых гельминтов или их фрагментов:

- формалин 10%-ный;

- спирт 70%-ный;

- жидкость Барбагалло;

- глицерин.

8. Для консервации мышц с личинками трихинелл используется концентрированный раствор хлористого натрия (на 100 мл воды 40-50 г NaCI).

2.1.2. Отбор соскобов с перианальных складок

- Соскоб с перианальных складок можно забирать у обследуемого в лаборатории, или заранее выдавать пробирки с ватными тампонами, смоченными в глицерине, на шпателях или флаконы с глазными палочками, покрытыми специальным клеевым слоем (п.4.2.3), предварительно проинструктировав обследуемого (если обследуется ребенок, то родителей ребенка) о способе забора материала и доставке его в лабораторию.

- Утром (вечером и утром обследуемому не подмываться) собрать соскоб с перианальных  складок вокруг ануса методом "смыва" или "отпечатка" приготовленным ватным тампоном, смоченным в глицерине, или липкой лентой, или глазными стеклянными палочками со специальным клеевым слоем, как описано в п.4.2.3.

- После забора соскоба шпатели вкладываются обратно в пробирку, липкая лента наклеивается на предметное стекло, а глазные палочки вкладываются в соответствующий флакон или специальный контейнер с штативами. Пробирки, флаконы, предметные стекла предварительно маркируются (при массовых обследованиях маркируются цифрами согласно списку обследуемых).

2.2. Отбор дуоденального содержимого (желчь)

- Материал доставляется в лабораторию в чистых химических или центрифужных пробирках сразу после зондирования пациента натощак.

- Доставляют все три фракции (порции "А", "В", "С") и исследуют сразу после поступления в лабораторию.

- Порцию "А" доставляют для исследования на патогенные простейшие двенадцатиперстной кишки (лямблии), личинки стронгилоидеса, трихостронгилид, анкилостомид.

- Порции "В" и "С" доставляют для исследования на яйца гельминтов, паразитирующих в  протоках печени и поджелудочной железы.

2.3. Отбор проб мокроты

- Доставляется в лабораторию мокрота, выделенная при откашливании (не слюна и не слизь с носоглотки), в стерильной посуде с крышками (можно в чашках Петри).

- Исследуется сразу после поступления.

 2.4. Отбор проб мочи

- Доставляется в лабораторию моча утреннего сбора в чистых стеклянных банках с крышками.

- Исследуется сразу после поступления в лабораторию.

- На шистосомоз - доставляется моча, собранная между 10 ч утра и 14 ч дня, или все порции суточной мочи; желательно собрать мочу после физической нагрузки (например, 20-30 приседаний).

2.5. Отбор проб эпидермиса кожи

- С участков кожи (где изменения кожи или зуд) делают несколько срезов.

- Поверхностные срезы кожи диаметром 2-3 мм делают бескровно, с соблюдением асептики, стерильным лезвием бритвы или глазным скальпелем, предварительно приподняв кожу кончиком стерильной иглы.

- Помещают кусочки кожи в стерильную стеклянную посуду (можно чашки Петри) с физраствором.

- Исследуют сразу после забора материала.

2.6. Биопсия мышечной ткани (поперечно полосатой мускулатуры)

- Хирургическим путем получают биопсированные кусочки двуглавой или икроножной мышц (ближе к сухожилию).