МУК 4.2.1784-03
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма
Trichoderma viride 44-11-62/3 - продуцента комплекса целлюлолитических
ферментов в воздухе рабочей зоны
Дата введения 2003-12-01
1. РАЗРАБОТАНЫ: Российским государственным медицинским университетом (к.б.н. Н.И.Шеиной).
2. УТВЕРЖДЕНЫ Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 октября 2003 г.
3. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 декабря 2003 г.
4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма - Trichoderma viride 44-11-62/3 продуцента комплекса целлюлолитических ферментов (целлюлаза, ксиланаза) в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м воздуха.
Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и Р 8.563-96* "Методики выполнения измерений".
______________
* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ "Методики выполнения измерений". - Примечание "КОДЕКС".
Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.
Методические указания одобрены и рекомендованы секцией "Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены окружающей среды".
На агаризованной среде сусло-агар (содержание солодового сусла 5-6° по Баллингу) на 5 день развития микроорганизм образует характерные колонии до 5-5,5 см в диаметре с гладкой подошвой, слегка приподнятые над поверхностью среды, не врастающие в агар, с волнистым краем, пушистым воздушным мицелием, который покрыт спорами лимонно-желтого цвета. На 3 день развития в среду выделяется ярко-желтый пигмент лимонного оттенка. Гифы мицелия бесцветные, септированные, многократно ветвистые.
Систематическое положение микроорганизма.
Класс | Fungi imperfecti |
Порядок | Hyphomycetales |
Род | Trichoderma |
Вид | viride |
Штамм | 44-11-62/3 |
Штамм Trichoderma viride 44-11-62/3 получен во ВНИИбиотехнология в лаборатории Биосинтеза ферментов методом индуцированной селекции с применением этиленимина и нитрозометилмочевины из исходной культуры Trichoderma viride 44 - продуцента целлюлазы и депонирован в ЦМПМ ВНИИгенетика.
Штамм-продуцент синтезирует высокоактивный комплекс целлюлолитических ферментов для производства ферментного препарата целловиридин Г3х. Максимальная активность целлюлазы составляет 35 ед./мл, ксиланазы - 42 ед./мл.
Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Культивирование гриба происходит 5 суток при температуре 36-38 °С, затем 5 суток при комнатной температуре. Для размножения и хранения используется сусло-агар 5-6 °Б. рН среды - 5,0-6,0.
Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 2000 кл./м, А.
Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м воздуха при доверительной вероятности 0,95.
Прямой метод измерения концентрации штамма-продуцента основан на аспирации из воздуха микробных клеток (спор, фрагментов мицелия) на поверхность плотной питательной среды сусло-агар и подсчета выросших колоний по культурально-морфологическим признакам на день развития.
Косвенный метод измерения концентрации штамма-продуцента основан на аспирации из воздуха микробных клеток на поверхность плотной питательной селективной среды и подсчета выросших колоний по зонам просветления, образующихся вокруг каждой колонии штамма как результат продукции целлюлазы на среде с окрашенной целлюлозой.