МУК 4.2.1778-03

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма
Bacillus subtilis 65 - продуцента нейтральной протеиназы
и амилазы в воздухе рабочей зоны

     

Дата введения 2003-12-01

1. РАЗРАБОТАНЫ: Российским государственным медицинским университетом (к.б.н. Н.И.Шеиной).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 октября 2003 г.

3. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 декабря 2003 г.

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма В. subtilis 65 - продуцента нейтральной протеиназы и амилазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500000 клеток в 1 м воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и Р 8.563-96* "Методики выполнения измерений".

_____________

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать ГОСТ Р 8.563-96. - Примечание "КОДЕКС".

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Методические указания одобрены и рекомендованы секцией "Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены окружающей среды".

2. Биологическая характеристика В. subtilis 65 и его гигиенический норматив

Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 37 °С, оптимальная рН 6,6-7,2, культивирование 18-24 часа. Для размножения используется мясопептонная агаризованная среда (МПА) с глюкозой (1%).

Систематическое положение микроорганизма.

На МПА штамм образует небольшие округлые колонии, максимальный диаметр которых составляет 0,5-0,7 см. Край колоний изрезанный, с характерным белым налетом в центральной верхней части. Колонии гладкие, плоские, матовые, сухие. Не врастают в агар и легко отделяются от него. Цвет от слабо кремового до желтоватого.

Морфологически штамм представлен подвижными мелкими палочками, образующими центрально расположенные эндоспоры, располагаются поодиночке или цепочками различной длины. Палочки снабжены жгутиками, расположенными перитрихиально.

В. subtilis 65 строгий аэроб, сапрофит, мезофил, грамположителен. Штамм интенсивно разлагает белковые среды благодаря действию протеолитических энзимов, при этом на желатине происходит разжижение, на среде лакмус-молоко - пощелочение, пептонизация. Чувствителен к целому ряду антибиотиков, умеренно чувствителен к ампицилину.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 40000 кл./м, пометка А, 4 класс опасности.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток микроорганизма в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500000 клеток в 1 м воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Прямой метод основан на аспирации из воздуха производственных помещений клеток микроорганизма на агаризованную среду МПА с глюкозой (1%) и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.

Косвенный метод основан на аспирации из воздуха клеток микроорганизма на поверхность плотной питательной среды (молочный агар Эйкмана) и подсчета прозрачных зон, образующихся вокруг выросших колоний и четко выделяющихся на общем молочно-мутном фоне среды через 18-24 часа.