Методические указания по изучению эмбриотоксического действия химических веществ при гигиеническом обосновании их ПДК в воде водных объектов

3.1. Проведение исследований для выявления патологии внутренних органов

21-дневные плоды фиксируют в жидкости Буэна, состоящей из перенасыщенного раствора пикриновой кислоты, 40% формалина и ледяной уксусной кислоты в соотношении 15:5:1 соответственно. Через 7 дней фиксированные эмбрионы переносят в 70° спирт, где они могут сохраняться в течение длительного периода времени. Качество эмбрионального материала при выполнении этих исследований во многом определяется объемом фиксатора, рекомендуется брать 25 мл жидкости Буэна на один плод. Перед проведением исследований для выявления внутренней патологии плоды вынимают из банки, в течение 10 минут отмачивают в воде для удаления раздражающих паров фиксатора и затем подвергают микроанатомическому сечению. Для целей исследования плоды разрезают бритвой по 9-ти сагитальным срезам, которые тщательно изучают с помощью бинокулярной лупы (Вильсон, 1965 в модификации А.П.Дыбана, 1967).

Уровни срезов и исследование внутренних органов плода.

1 - проводят параллельно нижней челюсти с целью отделения головы от туловища;

2 - проводят перпендикулярно нижней челюсти сразу за вибриссами. Изучают состояние нижней челюсти, переднего отдела твердого неба и носовой полости;

3 - проводят через середину глазных яблок. Изучают состояние глаз и обонятельных луковиц;

4 - проводят между 3-м и 5-м срезами. Изучают состояние головного мозга: коры больших полушарий, боковых и третьего желудочков;

5 - проводят сразу за ушами. Изучают состояние четвертого желудочка мозга 4-й и 5-й срезы позволяют диагностировать водянку головного мозга;

6 - проводят тотчас впереди передних конечностей. Изучают состояние пищевода, трахеи, спинного мозга и сосудов;

7 - проводят за передними конечностями. Изучают органы грудной полости: состояние сердца, легких, бронхов, пищевода, спинного мозга;

8 - проводят по середине между 7-м срезом и пупочным кольцом через печень. После осмотра печень осторожно извлекают и осматривают диафрагму;

9 - проводят немного ниже пупочного кольца. После осторожного удаления кишечника и печени можно изучать состояние почек, мочеточников, мочевого пузыря, прямой кишки и половых органов.

Для выявления аномалий скелета плода и процесса окостенения широкое применение находит метод Даусона. Плоды фиксируют в 96° спирте в течение 10-15 дней. Затем у каждого плода удаляют печень и кишечник, после чего заливают 1% раствором KOH на 1-2 дня до просветления тканей и появления видимого скелета, для лучшего просветления тканей плода заливают раствором KOH из расчета 25 мл на один плод. После этого плоды промывают 3-4 раза водопроводной водой и заливают на 3-5 суток ализариновым красителем, который готовят по прописи А.П.Дыбан (1970): KOH - 10 г, глицерин - 150 мл, дистиллированная вода - 800 мл (раствор "Б") и добавляют несколько капель 1%-го водного раствора красного ализарина (раствор "А") до образования сиреневого оттенка. После прокрашивания скелета в сиреневый цвет плоды промывают в растворе "Б" до полного просветления раствора и тканей плодов с ежедневной проводкой по схеме:

Благодаря подобной схеме содержание глицерина в растворе доводят до 100%. После этого к нему добавляют 2-3 капли формалина, что обеспечивает сохранность плодов в таком растворе в течение длительного времени. Для удобства хранения плодов рекомендуется 1-2 плода погружать в пенициллиновые пузырьки и добавлять на этот объем 1 каплю формалина или один кристаллик тимола.