МУК 4.2.1902-04

Методические указания

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ.
ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ

Определение генетически модифицированных источников (ГМИ)
растительного происхождения методом полимеразной цепной реакции

     
Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: ГУ НИИ питания РАМН (В.А.Тутельян - руководитель, Е.Ю.Сорокина, О.Н.Чернышева, О.В.Анисимова); Департаментом госсанэпиднадзора Минздрава России (А.И.Петухов); Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Е.Н.Беляев, И.В.Брагина, Т.В.Воронцова, Т.Н.Потапова, Т.Ф.Авдеенко, С.Ю.Терехова, М.В.Зароченцев); Центром госсанэпиднадзора в г.Москве (Н.Н.Филатов, И.И.Пискарева, Н.Я.Салова, Е.В.Сизых); Московской медицинской академией им.Сеченова Минздрава России (Б.П.Суханов); Центром "Биоинженерия" РАН (К.Г.Скрябин, Д.Б.Дорохов, Б.Б.Кузнецов, Ю.Е.Асадова); МГУ прикладной биотехнологии Минобразования России (И.А.Рогов, Н.Г.Кроха, А.Ф.Валихов).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко, 06.03.04.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Введение

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы идентификации ГМИ растительного происхождения в пищевой продукции.

1.2. Методические указания предназначены для применения в лабораториях учреждений санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации, осуществляющей контроль за качеством продовольственного сырья и пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, гигиеническую оценку и выдачу санитарно-эпидемиологических заключений, в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения контроля безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья.

1.3. Методические указания являются обязательными при контроле пищевых продуктов на наличие генетически модифицированных источников и применяются на этапах поставки на производство, гигиенической экспертизы, государственной регистрации, закупки, ввоза в страну и реализации.

1.4. Методические указания разработаны с целью обеспечения единого методического подхода для идентификации генетически модифицированных источников в пищевых продуктах, продовольственном сырье, пищевых и биологически активных добавках к пище.

2. Область применения

Методические указания содержат описание методов определения ГМИ растительного происхождения в пищевых продуктах, основанных на идентификации рекомбинантной ДНК с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Описаны скрининговые методы, направленные на выявление регуляторных последовательностей: промотора 35S из вируса мозаики цветной капусты и терминатора NOS из Agrobactetium tumefaciens. Идентификация этих регуляторных последовательностей позволяет проводить предварительную проверку пищевой продукции на наличие ГМИ, но не определяет примененную генетическую конструкцию или конкретную линию растения (трансформационное событие), а также не может применяться при проведении количественного анализа содержания ГМИ. Окончательная идентификация ГМИ, разрешенных для реализации населению и использования в пищевой промышленности в Российской Федерации, проводится с применением протоколов исследований для конкретных трансформационных событий, которые представляются разработчиком в Департамент госсанэпиднадзора Минздрава России при проведении санитарно-эпидемиологической экспертизы. В методических указаниях описаны методы идентификации генетических конструкций для наиболее часто встречаемых на мировом и внутреннем продовольственных рынках генетически модифицированных растений.

Методы, применяемые при отборе проб пищевых продуктов, выделении ДНК для проведения анализов, проведении электрофореза, документировании и анализе получаемых данных, а также вопросы организации рабочего места, являются обязательными к исполнению при проведении как скрининговых, так и идентификационных анализов.

С целью выявления наличия сои и кукурузы как традиционных, так и генно-модифицированных сортов в исследуемом пищевом продукте, а также проверки качества выделяемых из исследуемых образцов препаратов ДНК приведены методы идентификации последовательностей ДНК, специфичных для всех линий сои и кукурузы.

Все представленные методы являются качественными и состоят из следующих этапов: выделение ДНК из пищевого продукта, амплификация целевой ДНК с соответствующими праймерами, электрофорез продуктов амплификации в агарозном геле, документирование и анализ результатов.

3. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы

3.1. Аппаратура и инструменты

Допускается использование другой аппаратуры и инструментов с техническими характеристиками не хуже указанных выше, отечественного и зарубежного производства, разрешенных для применения в установленном порядке.

3.2. Лабораторная посуда и материалы

  
3.3. Реактивы

Допускается использование других реактивов с техническими характеристиками не хуже указанных выше, препараты импортного производства должны иметь международный сертификат качества ИСО 9000 или EN 29000.

4. Подготовка к анализу

4.1. Приготовление растворов

     
Приготовление 1М ТРИС-НСl (рН 7,5)

В мерной колбе на 100 мл растворить 12,11 г Трис (оксиметил) аминометана (молекулярный вес 121) в 80 мл дистиллированной воды, довести рН концентрированной соляной кислотой до 7,5, затем довести объем раствора до метки деионизованной водой, перемешать, хранить при температуре -20 °С не более года.

Приготовление 5M NaCI

Растворить 29,22 г натрия хлористого (молекулярный вес 58,5) в 100 мл дистиллированной воды, перемешать, хранить в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре до 1 года.

Приготовление 30%-ной NaOH

Растворить 3 г натрия гидроокиси (молекулярный вес 40) в 7 мл дистиллированной воды.

Приготовление 0,5 М ЭДТА (рН 8,0)

В мерной колбе на 100 мл растворить 18,62 г этилендиаминтетрауксусной кислоты (молекулярный вес 372,2) в 80 мл дистиллированной воды. Раствором 30%-ной натрия гидроокиси довести рН раствора до 8,0, дистиллированной водой - объем раствора до метки, перемешать. Хранить в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре до 1 года.

Приготовленные растворы автоклавировать при 1 атм., 121 °С 15-20 мин или фильтровать через мембраны Millipore 0,4 мкм.

Приготовление хлороформа, насыщенного водой  

Смешать 100 мл хлороформа с 20 мл деионизированной воды и оставить на 24 ч для насыщения. Срок хранения при температуре от 4 до 5 °С - не более 6 мес.

Приготовление 70%-ного раствора этилового ректификованного спирта  

Смешать 70 мл 96%-ного этилового ректификованного спирта с 26 мл деионизированной воды. Срок хранения при температуре от 4 до 5 °С - не более 2 мес.