Р 4.1.1672-03

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


Руководство
по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище

     

Дата введения 2003-06-30

1. РАЗРАБОТАНО: ГУ НИИ питания РАМН (руководитель В.А.Тутельян, ответственный исполнитель К.И.Эллер, Ю.П.Алешко-Ожевский, Т.В.Аристархова, В.Г.Байков, Н.А.Бекетова, В.В.Бессонов, С.В.Волкович, Л.Ш.Воробьева, О.А.Вржезинская, М.М.Г.Гаппаров, Н.А.Голубкина, Г.Ф.Жукова, М.Г.Киселева, Т.В.Киселева, В.М.Коденцова, С.Н.Кулакова, Л.Г.Левин, Ф.А.Медведев, Г.В.Никольская, В.В.Пименова, И.М.Скурихин, О.И.Соловьева, В.Б.Спиричев, Л.А.Харитончик, С.А.Хотимченко); Департаментом госсанэпиднадзора Минздрава России (А.И.Петухов); Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (И.В.Брагина); Фармакопейным комитетом Минздрава России (В.Л.Багирова, Е.Л.Ковалева); ВИЛАР РАСХН (С.А.Пинеев).

2. УТВЕРЖДЕНО И ВВЕДЕНО В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 30 июня 2003 г.

3. ВВОДИТСЯ ВПЕРВЫЕ.

Область применения

Настоящее Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище (далее - руководство) разработано в соответствии с Федеральными законами "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30.03.99 N 52-ФЗ (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст.1650), "О качестве и безопасности пищевых продуктов" от 02.01.00 N 29-ФЗ (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 2, ст.150), постановлением Правительства Российской Федерации от 21.12.00 N 987 "О государственном надзоре и контроле в области обеспечения качества и безопасности пищевых продуктов".

Руководство устанавливает методы контроля ингредиентного состава и показателей качества и безопасности биологически активных добавок к пище (далее - БАД).

Руководство предназначено для юридических лиц и индивидуальных предпринимателей, осуществляющих деятельность в сфере производства и оборота БАД, а также для организаций и учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации (далее - госсанэпидслужбы России), осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор и контроль за безопасностью и эффективностью БАД в соответствии с СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов" и другими нормативными документами.

Методы контроля, изложенные в руководстве, применяются на этапах экспертизы и регистрации БАД, при разработке и производстве БАД, их ввозе, хранении, транспортировке и реализации на территории Российской Федерации, при разработке нормативной и технической документации, регламентирующей вопросы обращения БАД.

Глава 1

     
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАКРОНУТРИЕНТОВ

I. Методы определения азотистых соединений

     
1. Метод определения общего белка

Метод заключается в определении азота по Къельдалю с последующим пересчетом на белок. Сущность метода состоит в разложении органического вещества пробы кипящей концентрированной серной кислотой с образованием солей аммония, переведении аммония в аммиак, отгонке его в раствор кислоты, количественном учете аммиака титрометрическим методом и расчете содержания азота в исследуемом материале.

Подготовка к испытанию

Среднюю пробу БАД готовят согласно прописи отбора проб по стандарту определения белка на соответствующий продукт, в случае отсутствия стандарта - по техническим условиям на БАД. Для пересчета содержания белка на сухое вещество (в случае необходимости определения данного показателя) определяют влажность исследуемого БАД или пищевого сырья.

Подготовка реактивов и растворов

Приготовление смешанных катализаторов

Катализатор 1. Смешивают 1 весовую часть сернокислой меди и 30 весовых частей сернокислого калия, тщательно растирают в ступке до получения мелкозернистого порошка.

Катализатор 2. Смешивают 10 весовых частей сернокислой меди, 100 весовых частей сернокислого калия и 2 весовые части селена. Тщательно растирают в ступке до получения мелкозернистого порошка.

При приготовлении катализаторов 1 и 2 допускается заменять сернокислый калий надсернокислым калием в том же количестве.

Катализатор 3. Перекись водорода, 30%-ный водный раствор.

Приготовление 4%-ного раствора борной кислоты

40 г борной кислоты растворяют в небольшом количестве теплой дистиллированной воды при нагревании и переносят в колбу вместимостью 1000 см. После охлаждения доводят объем дистиллированной водой до 1000 см.

Приготовление 0,05 моль/дм (0,1 н) раствора серной кислоты

Используют стандарт-титр серной кислоты. Раствор готовят в соответствии с правилами, приложенными к комплекту.

Допускается приготовление 0,05 моль/дм раствора серной кислоты из концентрированной серной кислоты в соответствии с ГОСТ 25791.1-83.

Приготовление смешанного индикатора

Растворяют 0,20 г метилового красного и 0,10 г бромкрезолового зеленого в 100 см 96%-ного этилового спирта.     

Проведение испытания

Приготовление минерализата

Из усредненной измельченной гомогенной пробы исследуемого БАД для анализа взвешивают на обеззоленном фильтре или в пробирке точную навеску, с погрешностью не более 0,1%. Содержание азота в анализируемой пробе должно быть не менее 10 мг. Навеску количественно переносят в колбу Къельдаля.

Минерализацию осуществляют одним из двух способов.

Способ 1

Добавляют в колбу Къельдаля 1,5-2 г смешанного катализатора 1 или 2. После прибавления катализатора осторожно приливают 10-15 см концентрированной серной кислоты.

Способ 2

Добавляют в колбу Къельдаля 7-10 см 30%-ной перекиси водорода в качестве окислителя. После прекращения бурной реакции приливают такое же количество концентрированной серной кислоты.

Колбу покрывают стеклянной воронкой и устанавливают на нагреватель так, чтобы ее ось была наклонена под углом 30-45° к вертикали. Вначале колбу нагревают умеренно, чтобы предотвратить бурное пенообразование.

При нагревании навеску время от времени помешивают вращательными движениями колбы. После исчезновения пены нагревание усиливают, пока жидкость не будет доведена до постоянного кипения. При этом следят за тем, чтобы на стенках колбы не оставалось черных несгоревших частиц, смывая их легким встряхиванием содержимого колбы или прибавлением небольшого количества серной кислоты.

После того как жидкость обесцветится (допускается слегка зеленоватый оттенок), нагрев продолжают в течение 30 мин.

После охлаждения к содержимому колбы постепенно приливают, взбалтывая, около 70 см дистиллированной воды, охлаждают и приступают к отгонке аммиака.

В бачок-парообразователь через воронку наливают дистиллированную воду (несколько больше половины общего объема бачка) и открывают кран на воронке и зажим на отводящей пар трубке в колбу Къельдаля.

Нагревают воду в бачке на газовой горелке или электрической плитке. Присоединяют пустую колбу Къельдаля к каплеуловителю холодильника и воронке для щелочи и после того, как вода в бачке закипит, закрывают кран воронки бачка-парообразователя. Включают холодильник, подставляют под него пустую коническую колбу и в течение 5-10 мин "пропаривают" прибор.

После пропаривания открывают краны воронки бачка-парообразователя и воронки для щелочи и закрывают зажим на отводящей пар трубке в колбу Къельдаля.

Под холодильник подставляют вместо пустой конической колбы коническую колбу с предварительно налитыми в нее из пипетки 20 см 4%-ной борной кислоты и 5 капель смешанного индикатора или 25 см 0,05 моль/дм раствора серной кислоты.

Колбу подставляют под холодильник так, чтобы его кончик был погружен в раствор кислоты на глубину не менее чем 1 см. Вместо пустой колбы Къельдаля присоединяют колбу с сожженной навеской анализируемой пробы.

Закрывают кран воронки для щелочи, наливают в воронку 33% раствора щелочи и, открывая понемногу кран воронки для щелочи при осторожном покачивании колбы Къельдаля, приливают избыток щелочи, при этом цвет раствора должен резко измениться - от прозрачного до синего или бурого. Открывают зажим на отводящей пар трубке в колбу Къельдаля и закрывают остальные краны, при этом пар будет проходить через жидкость в колбе Къельдаля и увлекать аммиак. В холодильнике пар конденсируется. Раствор аммиака попадает в колбу с 0,1 н. раствором серной кислоты. При нормальном кипении объем раствора в приемной колбе через 20-30 мин обычно составляет 150-180 см. Конец отгонки можно установить с помощью красной лакмусовой бумажки. Для этого приемную колбу отставляют от аппарата, предварительно обмыв конец холодильника дистиллированной водой, и подставляют лакмусовую бумажку под стекающие капли дистиллята. Если лакмус не синеет, отгон аммиака закончен. Если лакмус синеет, приемную колбу снова подставляют под холодильник и продолжают отгонку. После окончания отгонки приемную колбу опускают и конец холодильника обмывают дистиллированной водой в приемную колбы. После этого открывают краны на воронке бачка-парообразователя и воронке для щелочи и закрывают зажим отводящий пар трубки в колбу Къельдаля. Содержимое приемной колбы титруют 0,1 моль/дм раствором гидроокиси натрия до перехода окраски в зеленую.

Необходимо параллельно с определением азота в исследуемой пробе проводить определение азота в реактивах ("холостой опыт") для внесения соответствующей поправки в результат анализа. Определение азота в реактивах следует повторять каждый раз после замены партии серной кислоты, катализатора или титрованных растворов. Допускается отгонка аммиака (особенно в случае применения больших колб для сжигания) без использования пара непосредственно нагревом колбы на электрическом нагревателе. Проведение отгонки аммиака и все последующие операции проводятся так же, как и с применением пара.

Способ 3

Определение содержания азота проводят на автоматическом анализаторе типа "Къельдек", фирма Текатор, Швеция в соответствие с инструкцией к прибору.     

Обработка результатов

Массовую долю азота () в испытуемой пробе в процентах от ее массы при проведении отгонки аммиака в борную кислоту вычисляют по формуле

, где

- объем раствора серной кислоты, израсходованный на титрование испытуемого раствора, см;

- объем раствора серной кислоты, израсходованный на титрование в контрольном опыте, см;

- поправка к титру 0,05 моль/дм раствора серной кислоты, если он приготовлен не из стандарт-титра;

0,0014 - количество азота, эквивалентное 1 см раствора серной кислоты, г;

- масса навески, г.

Массовую долю азота () в испытуемой пробе в процентах от ее массы при отгонке аммиака в серную кислоту вычисляют по формуле:

, где

- объем 0,1 моль/дм раствора гидроокиси натрия, израсходованный на титрование 0,05 моль/дм серной кислоты в контрольном опыте, см;

- объем 0,1 моль/дм раствора гидроокиси натрия, израсходованный на титрование серной кислоты в испытуемом растворе, см;

- поправка к титру 0,1 моль/дм раствора гидроокиси натрия;

0,0014 - количество азота, эквивалентное 1 см 0,05 моль/дм раствора серной кислоты;

М - масса навески, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных испытаний. Результаты вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.

Расчет содержания общего азота в пробе при использовании автоматического анализатора (способ 3) проводят в соответствии с инструкцией к прибору.     

Метрологические характеристики

Допустимое расхождение между двумя параллельными определениями (r) не должно превышать значений, вычисляемых по формуле:

, но не более 0,1% абсолютного содержания общего азота, где

- среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, %.