• Текст документа
  • Статус
Действующий


МУК 4.2.577-96


МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
     
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов


Дата введения: с момента утверждения


1. РАЗРАБОТАНЫ: Институтом питания Российской академии медицинских наук (В.А.Тутельян, И.Б.Куваева, И.Я.Конь, С.А.Шевелева, Н.Р.Карликанова); Научно-исследовательским институтом детского питания Российской академии сельскохозяйственных наук (Н.Н.Липатов, Г.П.Шаманова, Н.А.Пронягина); Минсельхозпродом России (Г.Ю.Сажинов, И.Г.Вертинская, Р.Е.Овакимян).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Первым заместителем Председателя Госкомсанэпиднадзора России, заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 29 октября 1996 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН СанПиН "Микробиологические нормативы и методы анализа продуктов детского, лечебного и диетического питания и их компонентов", утвержденных бывшим Минздравом СССР от 21.12.88, N 42-123-4940-88, в части методов микробиологического контроля.

1. Общие положения

1.1. Настоящие Методические указания устанавливают методы лабораторных исследований (испытаний) качества продуктов детского, лечебного питания и их компонентов (в том числе импортируемых в Российскую Федерацию) по микробиологическим показателям безопасности для здоровья человека, проводимых в порядке производственного контроля, государственного и ведомственного санитарно-эпидемиологического надзора, а также при испытаниях указанной продукции в целях сертификации соответствия.

1.2. Методические указания разработаны в соответствии с Законом РСФСР "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения"*, Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании**, Положением о Государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации***.
_______________
* Действует Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемическом благополучии населения", здесь и далее по тексту;
** Действует Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденное постановлением Правительства РФ от 24.07.2000 N 554, здесь и далее по тексту;
*** Утратило силу в связи с введением в действие Положения о Государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства РФ от 24.07.2000 N 554, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

1.3. Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений (далее - организации), осуществляющих производственный контроль качества при разработке новых видов продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, постановке их на производство и в процессе промышленного выпуска, в лабораториях организаций Государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации и ведомственных санитарно-эпидемиологических служб федеральных органов исполнительной власти, а также в лабораториях иных организаций, аккредитованных на право проведения испытаний указанной продукции для целей ее сертификации.

1.4. В соответствии с настоящими Методическими указаниями должен осуществляться микробиологический контроль за безопасностью пищевых компонентов и продуктов детского, лечебного и диетического питания, импортируемых в Российскую Федерацию.

1.5. Настоящие Методические указания должны учитываться при пересмотре действующей и разработке вновь создаваемой нормативной документации на продукты детского и лечебного питания и компоненты, используемые при их изготовлении.

2. Нормативные ссылки

2.1. Закон РСФСР "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 19 апреля 1991 г.

2.2. Положением о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденное постановлением Правительства Российской Федерации от 5 июня 1994 г. N 625.

2.3. Положение о Государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации, утвержденное постановлением Правительства Российской Федерации от 5 июня 1994 г. N 625.

2.4. ГОСТ 26668-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Порядок отбора проб для микробиологических анализов".

2.5. ГОСТ 26809-86 "Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка к испытаниям".

2.6. ГОСТ 9225-84* "Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа".
_______________
* На территории Российской Федерации с 01.01.2011 действует ГОСТ Р 53430-2009. - Примечание изготовителя базы данных.

2.7. ГОСТ 13928-84 "Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу".

3. Методы отбора проб сырья, компонентов и готовой продукции

3.1. Отбор проб - по ГОСТу 26809 "Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка к испытанию", ГОСТу 13928 "Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу", ГОСТу 9225 "Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа", ГОСТу 26668 "Продукты пищевые и вкусовые. Порядок отбора проб для микробиологических анализов".

3.2. Посуду с пробой или пробу в потребительской таре снабжают этикеткой, на которой указывают:

- номер пробы;

- наименование продукта;

- номер и объем партии;

- дату и час отбора пробы;

- должность и подпись лица, отбиравшего пробу;

- обозначение действующей нормативной документации, по которой вырабатывался продукт.

3.3. Пробу, отправляемую в лабораторию вне данного предприятия, пломбируют или опечатывают и снабжают этикеткой, на которой указывают:

- номер пробы;

- наименование предприятия-изготовителя;

- наименование продукта;

- номер и объем партии;

- дату и час выработки продукта с момента окончания технологического процесса;

- дату и час отбора пробы;

- должность и подпись лица, отбиравшего пробу;

- объем необходимых анализов;

- обозначение действующей нормативной документации, по которой вырабатывался продукт.

3.4. Микробиологические анализы продукта проводят не более, чем через 4 часа с момента отбора проб.

3.5. Пробы должны храниться и транспортироваться до начала исследований при температуре продуктов не выше 6 °С, не допуская подмораживания.

3.6. Отбор проб для микробиологических исследований производится специалистом Центра госсанэпиднадзора в присутствии должностного лица данного предприятия.

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда и реактивы

4.1. Аппаратура и инструментарий

Анализатор потенциометрический, диапазон измерений рН от -1 до 14, погрешность измерений рН±0,05

ГОСТ 19881-74

Аппарат универсальный типа АВУ-6С для встряхивания жидкости в колбах и пробирках (шуттель-аппарат)

ТУ 64-1-2451-78

Ареометр-сахаромер с диапазоном измерений 0-10%, с ценой деления шкалы 0,1% и пределом допускаемой погрешности ±0,1%

ГОСТ 18481-81

Баня водяная с подогревом

ГОСТ 12026-76

Весы лабораторные общего назначения, 2-го и 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г (или получаемые по импорту)

ГОСТ 24104-80*

______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008. - Примечание изготовителя базы данных.

Иономер универсальный ЭВ-74 или потенциометр рН-340

ГОСТ 9245-79

Лотки эмалированные или кристаллизаторы


Лупа измерительная

ГОСТ 25706-83

Микрокалькулятор типа "Электроника БЭ-0914М", "БЭ-14", "БЭ-21" или др. типов

ГОСТ 27201-87

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3 (или полученный по импорту с иммерсионной системой)

ГОСТ 8284-78

Нож консервный


Ножницы медицинские

ГОСТ 21239-89

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

ТУ 16-535-84

Осветители к микроскопу типа ОИ-7, ОИ-9, ОИ-18, ОИ-19 или других марок


Пинцет медицинский

ГОСТ 21241-89

Прибор для счета колоний бактерий ПСБ

ТУ 64-1-2041-72

Скальпель хирургический, 15 см

ГОСТ 21240-89

Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

ГОСТ 19569-89*

______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002. - Примечание изготовителя базы данных.

Стерилизаторы медицинские паровые и воздушные

ГОСТ 27437-87

Термостат, позволяющий поддерживать температуру (15-65) °С с отклонением от заданной +1 °С (или получаемый по импорту)

ТУ 64-1-1382-72

Холодильник бытовой электрический (или получаемый по импорту)

ГОСТ 16317-87

Центрифуга медицинская с числом оборотов, не менее 3000 об/мин


Часы механические сигнальные

ГОСТ 3145-84

Часы песочные настольные на 1, 5 и 10 мин


Шкаф сушильный стерилизационный ШCC-80П или др. видов, позволяющий поддерживать температуру (160+5) °С

ТУ 64-1-9009-74

Шпатели металлические или фарфоровые 15-20 см


Штативы металлические, пластмассовые или
деревянные


Электроплитка

ГОСТ 14919-83

4.2. Лабораторная посуда и материалы

Бумага индикаторная универсальная

ТУ 6-091181-76

Бумага фильтровальная лабораторная

ГОСТ 12026-76

Бутылки стеклянные для химических реактивов


Вата медицинская гигроскопическая

ГОСТ 5556-81

Воронки стеклянные

ГОСТ 25336-82

Бюретки исполнения 1, 2, 3-го классов точности, вместимостью 5, 10, 50 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, с ценой деления 0,1 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

ГОСТ 29251-91

Дозатор пипеточный одноканальный ДП-1-1000 производства ВНИИ биопрепаратов (г.Москва)


Карандаш по стеклу


Кастрюли разные

ГОСТ 17151-81

Кастрюли эмалированные

ГОСТ 24778-81

Марля медицинская

ГОСТ 9412-77

Колбы типа Кн, номинальной вместимостью 40, 200, 400, 1000, 1600 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

ГОСТ 19908-90

Колбы исполнения 2, 2-го класса точности, номинальной вместимостью 250 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

ГОСТ 25336-82

Колбы исполнения 2, 2-го класса точности, номинальной вместимостью 50, 100, 200, 500, 1000 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

ГОСТ 1770-74

Колбы мерные исполнения 1, 2-го класса точности, номинальной вместимостью 50, 100 и 1000 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

ГОСТ 1770-74

Палочки стеклянные


Пергамент

ГОСТ 1341-84

Подпергамент

ГОСТ 1760-86

Петли бактериологические


Пипетки исполнения 5, 1, 2-го классов точности, вместимостью 1 см

ГОСТ 29227-91

Пипетки исполнения 7, 1, 2-го классов точности, вместимостью 10 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

ГОСТ 29227-91

Пробирки Уленгута (поплавки)


Пробирки типов П1, П2, диаметром 16 мм, высотой 150 мм и диаметром 21 мм, высотой 200 мм

ГОСТ 25336-82

Пробки корковые

ГОСТ 5541-76

Проволока нихромовая, диаметром 0,4-0,5 мм для изготовления бактериологических петель и игл


Проволока платиновая для изготовления бактериологических петель


Спиртовки лабораторные стеклянные

ГОСТ 23932-90

Стаканчики для взвешивания типа СВ

ГОСТ 25336-82

Стаканы типа ВН, вместимостью 100 и 200 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

ГОСТ 19908-90

Стекла предметные для микропрепаратов

ГОСТ 6672-75

Стекла покровные для микропрепаратов

ГОСТ 6672-75

Ступка фарфоровая с пестиком

ГОСТ 9147-80

Термометр (ртутный) с диапазоном измерения от 0 до 100 °С, с ценой деления шкалы 1 °С

ГОСТ 13646-68

Термометр жидкостный (нертутный) с диапазоном измерения от 0 до 100 °С, с ценой деления шкалы 1 °С

ГОСТ 28498-90

Ткань мягкая льняная (кусочки)


Трубки медицинские резиновые, диаметром 7-10 мм

ГОСТ 3399-76

Цилиндры исполнения 1, вместимостью 100, 500 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

ГОСТ 1770-74

Чашки биологические (Петри)

ГОСТ 23932-90

Шпагат

ГОСТ 16266-70

4.3. Реактивы, питательные среды

Агар микробиологический

ГОСТ 17206-84

Агар питательный сухой

ТУ 42-14-33-75

или

ТУ 10-02-789-177-94

Агар сывороточный БФ

ТУ 49 1059-84

или

ТУ 10-02-02-789-177-94

Агар типа Байрд-Паркера

ТУ 10-02-02-789-176-94

Агар солевой

ТУ 10-02-02-789-176-94

Бульон солевой

ТУ 10-02-02-789-176-94

МУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов-нафтол технический


Бензин авиационный

ГОСТ 1012-72

Бриллиантовый зеленый

ТУ 6-09-4279-76

Бромтимоловый синий

ТУ 6-09-20-86-77

Вода дистиллированная

ГОСТ 6709-72

Вода питьевая

ГОСТ 2874-82*

______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51232-98. - Примечание изготовителя базы данных.

Висмут сульфитный агар

ТУ 42 141-27-78

Гидролизат казеина панкреатический

ТУ 42-14-1-74

Дефибринированная кровь человека, барана или кролика


Дрожжи хлебопекарные прессованные

ГОСТ 171-81

D-глюкоза, ч.

ГОСТ 6038-79

D-лактоза, 1-водная

ТУ 6-09-22-98-79

D(+) мальтоза для микробиологических целей


DL-триптофан

ТУ 6-09-1492-80

Желчь сухая или желчь нативная сельскохозяйственных животных, стерильная

ОСТ 49 278-75

Железо III сернокислое, 9-водное

ГОСТ 9485-74

Йод

ГОСТ 4159-79

Калия гидроокись

ГОСТ 24363-80

Калий йодистый, ч.д.а.

ГОСТ 4232-74

Калий фосфорнокислый однозамещенный, ч.

ГОСТ 4198-75

Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный

ГОСТ 2493-75

Кальций углекислый

ГОСТ 4530-76

Кислота соляная, х.ч.

ГОСТ 3118-77

Кислота молочная пищевая

ГОСТ 490-79

Кристаллический фиолетовый

ТУ 6-09-4119-75

Левомицетин (медпрепарат)


Лимонная кислота, х.ч. или ч.

ГОСТ 3652-69

Литий хлористый, ч. или х.ч., или ч.д.а.

ГОСТ 4328-77

L-цистин солянокислый или цистин солянокислый, получаемый по импорту

ТУ 6-093252-80

Магний сернокислый, 7-водный

ГОСТ 4523-77

Магний хлористый 6-водный, ч.х.ч. или х.ч., или ч.д.а.

ГОСТ 4209-77

Масло иммерсионное для микроскопии

ГОСТ 13739-78

Медь сернокислая, 5-водная, х.ч.

ГОСТ 4165-78

Метиленовый голубой, индикатор, получаемый по импорту


Молоко коровье, обезжиренное, стерильное, приготовленное (в пробирках)

ГОСТ 9225-84*

_______________
* На территории Российской Федерации с 01.01.2011 г. действует ГОСТ Р 53430-2009. - Примечание изготовителя базы данных.

Молоко коровье, обезжиренное, сухое

ГОСТ 10970-87*

_______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52791-2007. - Примечание изготовителя базы данных.

Мочевина (карбамид)

ГОСТ 6691-77

Мясо-пептонный бульон


Набор для окраски по Граму


Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный, 4-водный, ч. или х.ч.

ГОСТ 4170-78

Натрия гидроокись, ч.д.а.

ГОСТ 4328-77

Натрий лимоннокислый, 5,5-водный, ч.д.а.

ГОСТ 22280-76

Натрий серноватистокислый (натрия трисульфат), 5-водный

ГОСТ 27068-86

Натрий хлористый, ч. или х.ч., или ч.д.а.

ГОСТ 4233-77

Неомицин (медпрепарат)


Панкреатин медицинский, активностью 50 ЕД в 1 г

ФХ 362

Пара-диметиламидобензальдегид, ч.

ТУ 6-09-3272-77

Пенициллин (медпрепарат)


Пергидроль 30%-ная (водорода перекись)

ГОСТ 177-88

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей

ГОСТ 13805-76

Полимиксин "М" сульфат по 500000 ЕД (медпрепарат)


Плазма крови кролика сухая


Сахароза

ГОСТ 5833-75

Спирт этиловый ректификованный технический

ГОСТ 18300-87

Спирт этиловый ректификованный

ГОСТ 5962-67*

_______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000. - Примечание изготовителя базы данных.

Соль Мора

ГОСТ 4208-72

Среда с индикатором ВР и маннитом сухая

Среда агаровая модифицированная для определения общего количества бактерий в молоке и молочных продуктах

ТУ 49 513-83

Среда для определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (общего количества бактерий) КМАФАнМ

ТУ 10-02-02-789-177-94

Среда Сабуро

ТУ 9229-014-004 19789-95

Среда Левина сухая

ФС-42-53 ВС-88

Среда Плоскирева

ФС-42-193 ВС-88

Среда Ресселя

ФС-42-190 ВС-88

Среда Эндо

ФС-42-186 ВС-88

или

ТУ 49 876-82

Среда Клиглера


Среда Кесслер сухая

ТУ 10.02.875-90

Среда Козера


Среда гидролизатно-молочная (ГМС-1) для количественного учета бифидобактерий

ТУ 10-02-02-789-176-94

Среда кукурузно-лактозная (ГМК-1) для количественного учета бифидобактерий

ТУ 10-02-02-789-176-94

Стрептомицин (медпрепарат)


Сусло солодовое неохмеленное


Сыворотка диагностическая сальмонеллезная 0-агглютинирующая адсорбированная

ТУ 6-09-3838-78

2,3,5-трифенилтетразолий хлористый, ч.д.а.


Феноловый красный

ГОСТ 5853-51

Фенолфталеин

ГОСТ 5850-72

Фуксин основной

ТУ 6-09-4119-75

Хлороформ технический

ГОСТ 20015-76

Экстракт кормовых дрожжей

ТУ 42-14-56-76

Экстракт солодовый

ГОСТ 418-84

Яйцо куриное диетическое


5. Подготовка к анализу

5.1. Подготовка проб к анализу

5.1.1. Молоко, сливки и другие жидкие продукты и компоненты


Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают.

5.1.2. Сгущенные продукты и компоненты


Отобранную пробу тщательно перемешивают стерильной ложкой, затем взвешивают стерильную сухую колбу и в нее помещают 10 г продукта.

5.1.3. Кисло-молочные продукты и напитки, закваски


Отобранные пробы перед исследованием перемешивают и нейтрализуют. Для этого на каждые 10 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов/г исследуемого продукта или его первого разведения для сухих кисло-молочных продуктов, напитка или закваски в стерильную посуду добавляют 1,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильного раствора двууглекислого натрия с массовой концентрацией 100 г/дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, содержимое перемешивают.

5.1.4. Стерилизованные продукты детского питания


Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают. Перед вскрытием бутылок (пакетов) с продуктом крышку (поверхность пакета) протирают ватой, смоченной спиртом.

Открывают крышку фламбированным или стерильным консервным ножом. Края пакета вскрывают стерильным ножом, скальпелем или ножницами. После снятия крышки края бутылки вновь фламбируют.

5.1.5. Сыр, творог, творожные изделия и пастообразные продукты


Навеску сыра, творога, творожных изделий и пастообразных продуктов взвешивают на стерильном часовом стекле, чашке Петри, в бюксе, переносят в стерильную или фламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, и тщательно растирают, нейтрализуют по п.5.1.3.

5.1.6. Топленое масло или молочный жир


Перед исследованием пробу расплавляют на водяной бане при температуре от 40 до 45 °С и перемешивают до получения однородной эмульсии.

5.1.7. Сухие продукты детского питания и компоненты


Отобранную среднюю пробу тщательно перемешивают, взвешивают навеску продукта на кусочке стерильного пергамента, на чашке Петри, в бюксе или на часовом стекле, затем взвешенную пробу переносят в стерильную колбу или другую посуду.

5.2. Приготовление разведений прдуктов для посева

5.2.1. Перед посевом готовят десятикратные разведения продукта в стерильных растворах разбавленного фосфатного буфера, изотонического раствора натрия хлорида, пептонной воды или лимоннокислого натрия (для сыра).

Для приготовления разведения готовят все необходимые стерильные материалы и посуду в соответствии со спецификой анализа исследуемого продукта: пробирки с 9,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов или колбы с 90,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов одного из растворов, используемых для приготовления разведений.

5.2.2. Из проб молока, сливок, кисло-молочных продуктов и напитков, кукурузного масла, молочного жира и других жидких продуктов и компонентов отбирают стерильной пипеткой 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и вносят в 90,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов одного из стерильных растворов, используемых для приготовления разведений, взбалтывают в течение (4±1) мин круговыми движениями до возможно более полного растворения. При этом пипетку промывают до 10 раз раствором этого продукта до верхнего уровня имеющихся на ней делений.

Получают разведение 1:10 (первое разведение).

Топленое масло или молочный жир вносят в растворы, подогретые до температуры от 40 до 45 °С.

5.2.3. Приготовленные навески по 10 г сухих молочных продуктов детского питания, сывороточных белковых концентратов, казецитов и других компонентов, сгущенных продуктов, сыра, творога, творожных изделий и других пастообразных продуктов переносят в колбу с 90,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов одного из стерильных растворов, используемых для приготовления разведений, подогретых от 40 до 45 °С и взбалтывают в течение (4±1) мин круговыми движениями до возможно более полного эмульгирования.

Получают разведение 1:10.

При другом способе разведения к приготовленным навескам по 10 г вышеуказанных продуктов добавляют 90,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов одного из стерильных растворов, подогретых от 40 до 45 °С и далее поступают как указано в п.5.2.3.

5.2.4. Для получения однородной взвеси продукта допускается перемешивание на аппарате для встряхивания жидкостей в течение (6±1) мин, избегая намокания пробок. Первое разведение продукта (1:10) можно гомогенизировать в стерильном стакане гомогенизатора или растереть в стерильной ступке.

5.2.5. Из первого разведения продукта стерильной пипеткой берут 1,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и переносят в пробирку, содержащую 9,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильного раствора, используемого для приготовления разведений, перемешивают осторожно, набирая и выдувая из пипетки 5-10 раз. Получают второе разведение продукта (1:100). Последующие разведения в зависимости от предполагаемого обсеменения продукта 1:1000, 1:10000 и т.д. готовят аналогично.

Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку. Вводят пипетку в пробирку не более, чем на 2-3 см ниже поверхности взвеси.

Время от момента приготовления разведений до посева не должно превышать 20-30 мин. Перед посевом все разведения осторожно встряхивают. При посеве на чашки Петри или в пробирки посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случае пользуются одной пипеткой.

5.2.6. Для приготовления разведений сухих молочных каш для детского питания используют надосадочную жидкость первого разведения продукта после отстаивания его в течение 2-3 мин.

5.3. Подготовка посуды и материалов

5.3.1. Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты с объемной долей 1-2%) в течение (15±5) мин и затем ополаскивают дистиллированной водой.

Посуду, бывшую в употреблении, моют 0,5%-ным щелочным раствором с помощью ершей и щеток и ополаскивают водопроводной водой. Сильно загрязненную посуду со следами жира, красок и иммерсионного масла опускают на 2 ч в хромовую смесь, подогретую от 40 до 45 °С, затем тщательно промывают проточной водопроводной водой.

Посуда с питательными средами, после подсчета на них дрожжей, плесневых грибов, бактерий группы кишечных палочек, Е. coli, S. aureus, энтерококков, сальмонелл и других видов условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, обеззараживается перед мойкой путем стерилизации в автоклаве при (121±1) °С в течение (30±1) мин или кипячением в течение 1 ч.

Вымытую посуду не вытирают, а сушат при комнатной температуре или горячим воздухом.

Предметные стекла после мойки и ополаскивания вытирают чистой салфеткой или помещают в склянку с притертой пробкой в смесь этилового спирта и наркозного эфира в соотношении 1:1.

5.3.2. Лабораторную посуду перед использованием обязательно стерилизуют. Стерилизацию осуществляют сухим жаром в сушильном шкафу при (160±5) °С в течение 2 ч или паром в автоклаве при 1 атм (121±1) °С в течение (30±1) мин с последующим подсушиванием в сушильном шкафу.

Перевод давления, показываемого манометром автоклава, в температуру проводится следующим образом:

- 0,5 атм - 112 °С;

- 0,7 атм - 116 °С;

- 0,8 атм - 118 °С;

- 1,0 атм - 121 °С;

- 2,0 атм - 134 °С.

Чашки Петри, пипетки и т.п. стерилизуют завернутыми в плотную оберточную бумагу или в пеналах. В верхнюю часть пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты.

Пробирки, флаконы, бутылки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки (кроме пробирок) надевают бумажный колпачок, который обвязывают вокруг горлышка ниткой или закрепляют резиновым колечком.

Каучуковые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют отдельно в автоклаве завернутыми в бумагу.

Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками. Срок хранения стерильной посуды - не более 30 суток при ненарушенной завертке или невскрытых пеналах.

6. Приготовление питательных сред и реактивов

6.1. Питательные среды и реактивы общего назначения

6.1.1. Концентрированный фосфатный буферный раствор


Взвешивают 34 г однозамещенного фосфорнокислого калия и растворяют в 500,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды в мерной колбе, вместимостью 1000 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. Устанавливают активную кислотность раствора (7,2±0,1) ед рН 1 н раствором гидроокиси натрия и доводят дистиллированной водой до 1000,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. Хранят в емкости, укупоренной резиновой пробкой, в условиях холодильника не более 30 суток.

6.1.2. Разбавленный фосфатный буферный раствор


Вносят пипеткой, вместимостью 2 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, 1,25 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов концентрированного фосфатного буферного раствора в мерную колбу вместимостью 1000 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, и доводят объем дистиллированной водой до метки, проверяют активную кислотность (7,1±0,1) ед рН.

Разливают разбавленный фосфатный буферный раствор по 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов в пробирки, по 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов в колбы, вместимостью 200 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, и по 900,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов в колбы, вместимостью 1600 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, закрывают ватными пробками. Стерилизуют в автоклаве при (121±1) °С в течение (20±1) мин.

6.1.3. 0,1%-ный водный раствор пептона (пептонная вода)


К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды добавляют 1 г пептона. После размешивания среду кипятят, фильтруют и разливают в пробирки и флаконы в необходимых количествах. Стерилизуют при (121±1) °С в течение (30±1) мин.

6.1.4. Изотонический 0,85%-ный раствор хлористого натрия


Для приготовления изотонического раствора, активной кислотностью (7,0±0,1) ед. рН используют дистиллированную воду, рН которой проверяют индикатором бромтимолблау. При его добавлении цвет воды должен быть бутылочно-зеленым. В иных случаях воду не используют.

В 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов воды растворяют 8,5 г хлористого натрия, разливают раствор в чистые пробирки диаметром 18-20 мм, по 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, а в колбы - по 93,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и стерилизуют в течение (15±1) мин при (121±1)°С.

6.1.5. Приготовление раствора лимоннокислого натрия для приготовления разведений сыра


В 1000,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды растворяют 20 г трехзамещенного лимоннокислого натрия, разливают в пробирки по 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и колбы по 93,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и стерилизуют при (121±1) °С в течение (20±1) мин.

6.1.6. Стерильная дистиллированная вода


Дистиллированную воду разливают в колбы или пробирки в необходимых количествах и стерилизуют в течение (20±1) мин при (121±1) °С.

6.1.7. Раствор двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисло-молочных продуктов и закваски

10 г двууглекислого натрия помещают в мерную колбу, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, растворяют дистиллированной водой, доводят объем раствора до метки. Раствор разливают в пробирки и стерилизуют при (121±1) °С в течение (30±1) мин.

6.1.8. Реактивы для окраски по Граму (модификация Г.П.Калины)


Реактив 1.

К 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов этилового спирта добавляют 0,5 г кристаллического фиолетового.

Реактив 2.

К 96,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 0,5%-ного спиртового раствора йодистого калия добавляют 2,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 5%-ного спиртового раствора основного фуксина и 2,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 5%-ного спиртового раствора йода.

Примечание. Растворение йодистого калия в спирте рекомендуется проводить в водяной бане при температуре от 45 до 50 °С при постоянном помешивании.

6.1.9. Приготовление реактивов из метиленового голубого


Приготовление основного спиртового раствора метиленового голубого.

10 г метиленового голубого смешивают со 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 96%-ного этилового спирта. Раствор ставят в термостат при температуре (37±1) °С на (24±1) ч, а затем фильтруют в термостате при той же температуре. Срок хранения основного раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37±1) °С не более 3-х месяцев при условии герметичной укупорки.

Приготовление рабочего раствора метиленового голубого.

Основной раствор помещают в водяную баню при температуре (45±1) °С на (8±2) мин, перемешивают до полного растворения кристаллов. Затем быстро охлаждают до температуры (20±1) °С и 5,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов этого раствора прибавляют к 195,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной кипяченой воды. Смесь хорошо перемешивают. Срок хранения рабочего раствора метиленового голубого - не более 7 суток при температуре от 8 до 10 °С.

Приготовление раствора метиленового голубого для окраски препаратов.

К 30,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов основного спиртового раствора метиленового голубого прибавляют 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды и 1,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов раствора гидроокиси калия с массовой концентрацией 10 г/дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

6.1.10. Приготовление карболового раствора кристаллического фиолетового для окраски препаратов

1 г красителя кристаллического фиолетового растирают в ступке с 2 г кристаллической карболовой кислоты до кашицы, прибавляют небольшими порциями 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 96%-ного этилового спирта. Доводят объем до 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной водой. Таким образом получают основной раствор для приготовления рабочего раствора.

К 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов основного карболового раствора кристаллического фиолетового добавляют 90,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды. Тщательно перемешивают.

Растворы хранят в темном флаконе под притертой пробкой.

6.1.11. Мясо-пептонный бульон


Говяжье мясо, освобожденное от жира и сухожилий, пропускают через мясорубку, взвешивают, складывают в кастрюлю, смешивают с двойным количеством водопроводной воды и оставляют на (18±6) ч при температуре (5±1) °С. Для ускорения процесса выделения питательных веществ из мяса содержимое кастрюли подогревают при температуре (50±5) °С в течение (1±0,1) ч и затем кипятят (35±5) мин. После кипячения бульон в горячем состоянии фильтруют через двойной бумажный фильтр. Фильтрат доводят питьевой водой до первоначального объема, добавляют к нему (1,0±0,1)%-ного пептона и (0,5±0,1)%-ного хлористого натрия. Устанавливают с помощью 1 н раствора гидроокиси натрия активную кислотность (7,3±0,1) ед рН. Приготовленный бульон разливают в колбы и стерилизуют при (121±1) °С в течение (20±1) мин.

6.1.12. Мясо-пептонный агар


К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов мясо-пептонного бульона или перевара Хоттингера, с концентрацией аминного азота не менее 100 мг/л добавляют 15 г мелко нарезанного агара в волокнах или порошке. После 10-15-минутного набухания агар-агара смесь кипятят при постоянном помешивании до полного его растворения. Полученную среду после установления активной кислотности (7,3±0,1) ед рН фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы и пробирки и стерилизуют при (121±1) °С в течение 20 мин.

6.2. Специальные питательные среды и реактивы

6.2.1. Среды для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

6.2.1.1. Среда для определения аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

Сухой питательный агар промышленного производства (на основе килечного гидролизата)

- 35 г

Экстракт кормовых дрожжей (ЭКД)

- 2,5 г

Глюкоза

- 1,0 г

Вода дистиллированная

- до 1000,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

рН

- 7,0


Стерилизация в автоклаве при (121±1) °С в течение (20±1) мин.

6.2.1.2. Сухие питательные среды промышленного производства по ТУ 49513-83 или по ТУ 10-02-02-789-177-94.

Подготовку сред для посевов проводят согласно прописи на этикетке.

6.2.2. Среды и реактивы для обнаружения бактерий группы кишечных палочек и эшерхий коли

6.2.2.1. Среда Кесслер (с лактозой)

К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов водопроводной воды добавляют 10 г пептона и 50,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильной желчи крупного рогатого скота. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании 20-30 мин. Затем фильтруют ее через ватно-марлевый фильтр, добавляют 2,5 г лактозы; доводят объем водой до 1 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. Устанавливают активную кислотность (7,5±0,1) ед рН, используя 1 н растворы NaOH или НСl и проверяя значение рН па потенциометре. Добавляют 4,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 1%-ного водного раствора кристаллического фиолетового, разливают в пробирки по 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов или колбочки по 40,0-50,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, закладывают поплавки. Стерилизуют в течение (15±1) мин при (121±1) °С.

6.2.2.2. Сухая среда Кесслер промышленного производства по ТУ 10.02.875-90

Подготовку среды для посева проводят согласно прописи на этикетке.

6.2.2.3. Среды сухие Левина, Эндо

Среды Левина (эозинметиленовоголубой агар), Эндо промышленного выпуска готовят согласно прописи, указанной на этикетке банок. Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить при температуре (4±2) °С до 10 суток.

6.2.2.4. Среда на индол

10,0 г сухого панкреатического гидролизата казеина (или 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов жидкого панкреатического гидролизата казеина с содержанием 500 мг аминного азота), 5 г хлористого натрия, 1 г DL-триптофана растворяют в 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды. Доводят активную кислотность (7,0±0,1) ед рН 1 н растворами NaOH или НСl и измеряя значение рН на потенциометре, разливают в пробирки по 5,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, стерилизуют в течение (15±1) мин при (121±1) °С.

6.2.2.5. Среда Кларка

Взвешивают 5 г пептона, 5 г глюкозы, 5 г двузамещенного фосфорнокислого калия. Растворяют ингредиенты в 950,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды, устанавливают активную кислотность (6,9±0,1) ед рН, используя 1 н растворы NaOH или НСl. Проверяют рН на потенциометре. Доводят общий объем до 1000,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной водой и при необходимости фильтруют. Разливают в пробирки по 5,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, стерилизуют в течение (20±1) мин при (115±1) °С.

6.2.2.6. 90%-ный раствор этилового спирта

В колбу, емкостью 1000 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, с 900,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 96%-ного этилового спирта добавляют 60,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды.

6.2.2.7. Раствор индикатора метилового красного

0,1 г индикатора метилового красного помещают в мерную колбу, вместимостью 500 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, растворяют в 300,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 90%-ного раствора этилового спирта, доливают до 500,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной водой. Хранят раствор в колбе с притертой пробкой при температуре (4±2) °С.

6.2.2.8. 0,5%-ный раствор бромтимолового синего в спирте.

Взвешивают 0,5 г бромтимолового синего, помещают в мерную колбу, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, и доводят этиловым спиртом до метки. Раствор хранят при температуре (4±2) °С в течение 30-35 суток в колбе с притертой пробкой.

6.2.2.9. 0,5%-ный и 0,1%-ный растворы бриллиантового зеленого

Для приготовления 0,5%-ного раствора асептически взвешивают 0,5 г индикатора бриллиантового зеленого, вносят в стерильную мерную колбу, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, и доводят стерильной дистиллированной водой до метки.

Для приготовления 0,1%-ного раствора в стерильный мерный цилиндр или колбу к 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов исходного 0,5%-ного раствора индикатора добавляют 40,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильной дистиллированной воды.

Растворы хранят в холодильнике в течение 7-10 суток.

6.2.2.10. 1,6%-ный раствор бромкрезолового пурпурного в спирте

Взвешивают 1,6 г индикатора бромкрезолового пурпурного и количественно переносят в мерную колбу, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. Доводят 96%-ным этиловым спиртом до метки. При необходимости фильтруют через бумажный фильтр. Хранят в колбе со шлифом в условиях холодильника.

6.2.2.11. 5%-ный раствор МУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов-нафтола

Взвешивают 5 г МУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов-нафтола, растворяют в 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 96%-ного этилового спирта. Раствор готовят непосредственно перед применением.

6.2.2.12. 40%-ный раствор гидроокиси калия

В стакане, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, взвешивают 40 г гидроокиси калия, переносят в мерную колбу, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, растворяют в 60,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды, затем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре 4-6 °С.

6.2.2.13. 1%-ный водный раствор генцианового (кристаллического) фиолетового

Взвешивают 1 г генцианового (кристаллического) фиолетового, помещают в мерную колбу, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре 4-6 °С в течение 7 суток.

6.2.2.14. Реактив на индол (Эрлиха)

Взвешивают 5 г пара-диметиламинобензальдегида в стеклянном стакане, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, помещают в коническую колбу, вместимостью 200 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, и растворяют в 50,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов этилового спирта. С помощью мерного цилиндра, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, медленно добавляют 50,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов концентрированной соляной кислоты. Раствор хранят в колбе с притертой пробкой при температуре 4-6 °С.

6.2.2.15. Среда Козера

Взвешивают 1,5 г натрия-аммония фосфорнокислого, 1 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 0,2 г магния сульфата, 3 г натрия лимоннокислого трехзамещенного. Растворяют в 950,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды, добавляют 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 0,5%-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Устанавливают активную кислотность (6,8±0,1) ед рН растворами NaOH или НСl, проверяя значение рН на потенциометре. Доводят объем дистиллированной водой до 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. Разливают по 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов в пробирки, стерилизуют в течение (15±1) мин при (121±1) °С.

6.2.2.16. Среда Симмонса

Среду готовят аналогично среде Козера (п.5.2.2.15), но после измерения рН в нее добавляют 2 г агар-агара на 1000 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, прогревают на водяной бане до расплавления агара, стерилизуют в течение (15±1) мин при (121±1) °С. Разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

6.2.2.17. Среда с 5% сахарозы

В 1000,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды растворяют 30 г сухого питательного агара (по ТУ 42-14-33-75 или по ТУ 10-02-789-177-94) и 50 г сахарозы. Стерилизуют в течение (30±1) мин при (112±1) °С.

6.2.3. Среды и реактивы для обнаружения бактерий рода Salmonella

6.2.3.1. Магниевая среда

Среду готовят из трех растворов*.
_______________
* При необходимости использования среды двойной концентрации масса (объем) всех ингредиентов, кроме воды, удваивается.

1 раствор:

пептон

- 4,2 г

натрий хлористый

- 7,15 г

дрожжевой диализат или дрожжевой экстракт (ЭКД)

- 20 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов или 2 г

калий фосфорнокислый однозамещенный

- 1,42 г

вода дистиллированная

- 890,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

2 раствор:


магний хлористый кристаллический (MgClМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов·6HМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентовО)

- 35,7 г

вода дистиллированная

- 90,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

3 раствор:


0,5%-ный водный раствор бриллиантового зеленого

- 0,9 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов


После растворения всех ингредиентов растворы соединяют, устанавливают активную кислотность (7,2±0,2) ед рН, разливают приготовленную таким образом среду в колбы и флаконы. Среду стерилизуют при температуре (112±1) °С в течение (30±1) мин.

6.2.3.2. Дрожжевой диализат

Взвешивают 1000 г свежих хлебных (прессованных) дрожжей, размешивают в 1000,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды в кастрюле до состояния гомогенной массы, которую переливают в целлофановый мешок, предварительно промытый дистиллированной водой. Мешок завязывают, обмывают под струей питьевой воды, а затем дистиллированной водой и погружают в эмалированную посуду, в которую предварительно наливают 1300,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды. Мешок должен быть полностью погружен в жидкость. Диализ ведут при температуре 60-80 °С в течение (6±0,5) ч. За это время количество жидкости в кастрюле должно уменьшиться примерно в 2 раза. Затем жидкость из кастрюли переливают в стерильную бутыль и добавляют хлороформ (0,5% к общему объему жидкости) и сохраняют при 5-7 °С до 7 месяцев.

6.2.3.3. Среда Мюллера

К 90,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильного мясо-пептонного бульона добавляют:

- 4,5 г химически чистого мела (СаСОМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов), предварительно простерилизованного во флаконе сухим жаром (при 160 °С в течение 2 ч);

- 10 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов раствора гипосульфита натрия (50 г чистого кристаллического гипосульфита натрия в мерной колбе доводят до 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной водой, стерилизуют текучим паром в течение (30±1) мин);

- 2 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов раствора Люголя (металлического йода - 25 г, йодистого калия - 20 г, дистиллированной воды - 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов).

После добавления указанных ингредиентов смесь взбалтывают и разливают в необходимых количествах. Допускается использовать среду в течение 7 дней после приготовления.

6.2.3.4. Среда Кауфмана

К 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов среды Мюллера добавляют 0,2 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 0,5%-ного водного раствора бриллиантового зеленого и 5,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильной желчи крупного рогатого скота. Приготовленную смесь стерилизуют текучим паром в течение (30±1) мин. До стерилизации - среда зеленого цвета, после стерилизации она приобретает зеленовато-коричневый тон.

6.2.3.5. Приготовление селенитовой среды

6.2.3.5.1. Селенитовая среда накопления Лейфсона*
_______________
* При использовании среды двойной концентрации масса (объем) всех ингредиентов, кроме воды, удваивается.

Натрий кислый селенистокислый

- 4 г

Пептон импортный

- 5 г

Натрий фосфорнокислый двузамещенный

- 7 г

Натрий фосфорнокислый однозамещенный

- 3 г

Лактоза

- 4 г

Дистиллированная вода

- 1000,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов


Среду готовят из 2-х основных растворов. Прежде всего экспериментально определяют точную пропорцию двузамещенного и однозамещенного фосфата натрия, которая с используемым образцом пептона и кислого селенистокислого натрия дает активную кислотность (7,0±0,1) ед рН, что регулируется соотношением фосфатов. Такая предварительная подтитровка производится всякий раз, когда меняется серия любого из входящих в среду основных ингредиентов (пептон, кислый селенистокислый натрий, фосфаты).

После установления указанных соотношений к приготовленному раствору фосфатов добавляют пептон и лактозу, разливают во флаконы и стерилизуют текучим паром 2 дня по (30±1) мин или при (112±1) °С однократно в течение (30±1) мин.

Отдельно на стерильной воде асептически готовят 10%-ный раствор кислого селенита натрия. Перед началом работы на каждый флакон с 50,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов основного раствора добавляют 2,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов раствора кислого селенита натрия. Приготовленную среду разливают в необходимых количествах в стерильные пробирки или колбы, плотно закрывают приготовленными пробками.

6.2.3.5.2. Селенитовая среда сухая

Селенитовую среду приготавливают согласно прописи на этикетке.

6.2.3.6. Среды Плоскирева и висмут-сульфитный агар

Среды Плоскирева и висмут-сульфитный агар (ВСА) промышленного производства выпускаются в сухом виде. Их следует готовить согласно прописи, указанной на этикетке банки. Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить в холодильнике до 10 суток.

6.2.3.7. Трехсахарный агар с мочевиной (среда Олькеницкого)

Трехсахарный агар с мочевиной готовят смешением следующих ингредиентов:

Дистиллированная вода

- 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

Сухой питательный агар

- 2,5 г

Лактоза

- 1,0 г

Сахароза

- 1,0 г

Глюкоза

- 0,1 г

Мочевина

- 1,0 г

Железо сернокислое (FeSОМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов·7HМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентовО)

- 0,02 г

Натрий серноватистокислый (NaМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентовSМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентовОМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов·5HМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентовО)

- 0,03 г

0,04%-ный водный раствор фенолового красного

- 0,04 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов


Тщательно перемешивают и устанавливают активную кислотность (7,3±0,1) ед рН. Разливают в пробирки по 5,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и стерилизуют текучим паром по 20 мин 3 дня подряд. После стерилизации среду скашивают таким образом, чтобы высота столбика была не менее 3 см. Готовая среда имеет бледно-розовый цвет.

6.2.3.8. 0,4%-ный водный раствор фенолового красного

Взвешивают 0,1 г индикатора фенолового красного, вносят в колбу, вместимостью 50 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, и вливают 25,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды. Тщательно перемешивают до полного растворения. Раствор хранят в холодильнике до 7 суток.

Для получения 0,04%-ного рабочего раствора индикатора 1,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 0,4%-ного раствора смешивают с 9,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды.

6.2.3.9. Среда Ресселя из сухих питательных сред

К 950,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды добавляют 40 г сухого питательного агара с лактозой и индикатором ВР и 5 г питательного агара. Смесь растворяют при нагревании до кипения. Затем в 50,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды растворяют 1 г химически чистой глюкозы и добавляют к приготовленной смеси.

Разливают в стерильные пробирки по 5,0-6,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по (30±1) мин или однократно при (111±1) °С в течение (30±1) мин. Среду скашивают так, чтобы остался небольшой столбик (не менее 3 см высотой).

6.2.3.10. Среда Клиглера из сухих питательных сред

Среду готовят и стерилизуют согласно прописи на этикетке. Готовую среду скашивают в пробирках так, чтобы остался небольшой столбик (не менее 3 см высотой).

6.2.3.11. Диагностическая поливалентная агглютинирующая адсорбированная сальмонеллезная сыворотка

Необходимые разведения сыворотки готовят перед использованием согласно прилагаемой к коробке инструкции.

6.2.4. Среды и реактивы для обнаружения стафилококков

6.2.4.1. Солевой бульон

К 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов мясо-пептонного бульона (МПБ) с активной кислотностью (7,3±0,1) ед рН в колбе, вместимостью 200 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, добавляют 6,5 г хлористого натрия и разливают в пробирки по 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. Стерилизуют в автоклаве при (121±1) °С в течение (20±1) мин.

6.2.4.2. Бульон солевой и агар солевой - сухая питательная основа для приготовления желточно-солевого или молочно-солевого агара - промышленного производства. Подготовку сред для посевов проводят согласно прописи на этикетке.

6.2.4.3. Агар типа Байрд-Паркер

Основа среды: 30 г сухого питательного агара на основе ферментативного гидролизата кормовых дрожжей, размешивают в 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды, добавляют 10 г пирувата натрия, 5 г хлористого лития, тщательно перемешивают. Смесь нагревают при помешивании и кипятят в течение 1 минуты до полного растворения ингредиентов. Устанавливают активную кислотность (7,1±0,1) ед рН. Разливают во флаконы объемами 100-200-300 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов в зависимости от потребности и стерилизуют при (121±1) °С в течение (15±1) мин. Основа среды может храниться в течение месяца в условиях холодильника. Перед употреблением в растопленную и охлажденную (45-50) °С основу, с соблюдением правил асептики прибавляют (из расчета на 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов среды) 0,5 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 2%-ного раствора теллурита калия и 5,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов эмульсии яичного желтка. Среду тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри в объеме не менее 20,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов на чашку. Чашки со средой могут быть использованы в течение 24-48 часов. Перед посевом чашки со средой подсушивают в термостате общепринятым способом.

6.2.4.4. Агар типа Байрд-Паркера - арбитражная среда промышленного производства в сухом виде.

6.2.4.5. Желточно-солевой агар (ЖСА)

Основа - солевой агар: к мясо-пептонному бульону (МПБ) с активной кислотностью (7,3±0,1) ед рН добавляют 2% агара и 6,5% хлористого натрия, расплавляют на водяной бане, при необходимости фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают мерным цилиндром по 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов в колбы, вместимостью 250 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, и стерилизуют при (121±1) °С в течение (3±1) мин. Вместо мясо-пептонного бульона можно использовать сухой питательный агар на основе килечного гидролизата, приготовленный по прописи на этикетке.

ЖСА: на 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильного расплавленного и остуженного до (45±1) °С солевого агара добавляют 20,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов эмульсии яичного желтка. После полного размешивания желточно-солевой агар разливают в стерильные чашки Петри по 20,0-25,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и хранят в холодильнике до 5-7 дней.

6.2.4.6. Эмульсия яичного желтка

На дно стерильной чашки Петри помещают куриное яйцо, которое тщательно протирают ватой, смоченной этиловым спиртом. Стерильным пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно из этих отверстий из яйца полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу, вместимостью 200 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. К желтку постепенно добавляют (частями по 20,0-30,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов) 50,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильного физиологического раствора, затем содержимое тщательно встряхивают до получения гомогенной массы.

6.2.4.7. Цитратная плазма кролика

Цитратная плазма кролика для реакции плазмокоагуляции выпускается в сухом виде. Готовят непосредственно перед употреблением согласно прописи в прилагаемом наставлении.

6.2.5. Среды и реактивы для обнаружения В. cereus

6.2.5.1. Среда Донована

К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов расплавленного питательного или мясо-пептонного агара добавляют 2,5 г трехзамещенного цитрата натрия, 2,5 г хлористого лития, стерилизуют при (110±1) °С в течение (30±1) мин, охлаждают до 45-50 °С, добавляют 200000 ЕД полимиксина "М" и эмульсию двух желтков. Тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри, которые можно хранить в холодильнике не более 7-10 суток.

6.2.5.2. Эмульсия яичных желтков для среды Донована

Асептически отделяют от яиц 2 желтка, как описано в п.6.2.4.6. К желткам добавляют 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильного физиологического раствора, тщательно встряхивают для получения гомогенной массы.

6.2.5.3. Солевой полимиксиновый агар с 2,3,5-трифенилтетразолием хлористым

К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов 2%-ного питательного или мясо-пептонного агара добавляют 60 г хлористого натрия, 200000 ЕД полимиксина "М", 0,1-0,2 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, эмульсию 2-х желтков.

Полимиксин, 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый и эмульсию желтков асептично добавляют в агар после расплавления и охлаждения до 40-45 °С, хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри. Хранят среду в холодильнике не более 7-10 суток.

6.2.5.4. Кровяной агар

К 100,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов расплавленного и остуженного до 40-45 °С с 2% мясо-пептонного агара добавляют 5,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дефибринированной крови* человека, барана или кролика, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри. Приготовленную среду хранят в холодильнике до 5 суток.
_______________
* В качестве антикоагулянта применяют 5%-ный раствор лимоннокислого натрия или 5%-ный раствор щавелевокислого натрия (или калия). Антикоагулянт берут из расчета 1 объем на 9 объемов крови (1:9).

6.2.5.5. Среда с маннитом

В дистиллированную воду прибавляют 1% пептона и 0,5% хлористого натрия. Растворяют при нагревании, прибавляют 0,1% спиртового (1,6%) раствора бромкрезолового пурпурного (можно бромкрезолового синего), нагревают до 80 °С и устанавливают активную кислотность (7,1±0,1) ед рН, проверяя значение на рН-метре. Затем среду кипятят (5±1) мин, фильтруют и доливают до первоначального объема дистиллированной водой. Добавляют 0,5-1% маннита, разливают по пробиркам с поплавками. Стерилизуют автоклавированием при (115±1) °С в течение (15±1) мин.

6.2.5.6. Среда с индикатором ВР и маннитом сухая промышленного производства

Подготовку среды для посева проводят согласно прописи на этикетке.

6.2.6. Среды и реактивы для обнаружения плесневых грибов и дрожжей

6.2.6.1. Раствор солодового сусла с массовой долей сухих веществ (7,5±0,5)%

Сусло фильтруют через фильтрованную бумагу, разливают в колбы и стерилизуют (30±1) мин в автоклаве при (108±2) °С. Затем сусло декантируют. В сусле определяют массовую долю сухих веществ ареометром-сахарометром. Сусло разбавляют водой до массовой доли сухих веществ (7,5±0,5)%, разливают в колбы и стерилизуют при (116±1) °С в течение (20±1) мин. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, которое готовят аналогично солодовому.

6.2.6.2. Сусловый агар

К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов солодового сусла с массовой долей сухих веществ (7,5±0,5)% прибавляют 30 г агара. Среду нагревают до полного расплавления агара и фильтруют через вату или фильтровальную бумагу. Охлаждают до (50±5) °С и устанавливают активную кислотность (3,6±0,1) ед рН с помощью молочной кислоты. Фильтрат разливают в колбы и стерилизуют при (116±1) °С в течение (20±1) мин.

6.2.6.3. Приготовление среды из сухого сывороточного агара "БФ"

К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды прибавляют 60 г порошка агара сывороточного "БФ", нагревают до полного растворения (при наличии осадка фильтруют). Устанавливают активную кислотность (4,0-4,5) ед рН добавлением молочной кислоты, разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (121±1) °С в течение (15±1) мин.

6.2.6.4. Среда для определения дрожжей и плесневых грибов в молоке и молочных продуктах промышленного производства* по ТУ 49 1059-84.
_______________
* Использование сред 6.2.6.4-6.2.6.6 допускается только в производственных лабораториях.

Среда готовится по прописи на этикетке.

6.2.6.5. Среда Сабуро

К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды добавляют 18 г агара и оставляют на 30 мин для его набухания, затем 40 г мальтозы или глюкозы и 10 г пептона, нагревают до полного растворения (при наличии осадка фильтруют). Устанавливают активную кислотность (6,5±0,1) ед рН с помощью молочной кислоты. Разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (116±1) °С в течение (20±1) мин.

6.2.6.6. Среда с солодовым экстрактом

К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды добавляют 20 г солодового экстракта, 5 г пептона, 0,4 г лимонной кислоты, 5 г сахарозы, 18 г агара. Среду плавят в автоклаве, поднимая температуру до (120±1) °С (без выдержки). Давлению дают упасть, расплавленную среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают и стерилизуют при (115±1) °С в течение (15±1) мин.

Среды хранят при температуре от 4 до 6 °С не более 14 суток.

Для повышения элективности питательных сред 6.2.6.3-6.2.6.6 добавляют антибиотики в объеме, указанном в табл.10.

Таблица 10

Объем питательной среды

Объем добавляемых к среде растворов антибиотиков, смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

пенициллин

стрептомицин

неомицин

левомицетин

980

10

10

-

-

930

-

-

70

-

975

-

-

-

25



Антибиотики готовят согласно п.6.2.6.7-6.2.6.10.

Водные растворы антибиотиков готовят непосредственно перед использованием и вносят в расплавленную и охлажденную до (46±1) °С питательную среду.

Среды с антибиотиками хранению не подлежат.

6.2.6.7. Приготовление раствора пенициллина

Во флакон с пенициллином, содержащим 500000 ЕД, добавляют 5-7 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильной дистиллированной воды (п.6.1.6), тщательно перемешивают до растворения. Содержимое флакона переносят в стерильную мерную колбу, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, и доводят до метки стерильной дистиллированной водой при температуре от 35 до 40 °С. Получают раствор пенициллина, содержащий 5000 ЕД/смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

При использовании флаконов с пенициллином другой активности, его растворяют в мерной колбе соответствующей вместимости до 5000 ЕД/смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

6.2.6.8. Приготовление раствора стрептомицина

400 мг стрептомицина вносят в стерильную мерную колбу, вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, добавляют 10,0-20,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильной дистиллированной воды (п.6.1.6) при температуре от 35 до 40 °С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация стрептомицина в растворе 4 г/дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

6.2.6.9. Приготовление раствора неомицина

500 мг неомицина вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, добавляют 10,0-20,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильной дистиллированной воды (п.6.1.6) при температуре от 35 до 40 °С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация неомицина в растворе 5 г/дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

6.2.6.10. Приготовление раствора левомицетина (хлорамфеникола)

400 мг левомицетина вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, добавляют 10,0-20,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильной дистиллированной воды (п.6.1.6) при температуре от 35 до 40 °С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация левомицетина в растворе 4 г/дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

6.2.7. Среды и реактивы для определения бифидобактерий

6.2.7.1. Гидролизованное молоко

Обычное или восстановленное обезжиренное молоко (обрат) доводят до кипения и кипятят (2±1) мин, охлаждают до (14±1) °С, устанавливают активную кислотность (7,8±0,1) ед рН 10-20%-ным раствором NaOH.

Добавляют панкреатин из расчета 1 г/дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, предварительно разведенный в небольшом количестве нагретой до 44 °С воды, размешивают, ставят в термостат и выдерживают при температуре (40±1) °С под ватной пробкой. В течение первых 2-х часов перемешивание и коррекции активной кислотности до (7,8±0,1) ед рН проводят каждые (30±1) мин, в следующие 2 часа - через каждый час. Через 4 часа от начала гидролиза к смеси добавляют 1-2% хлороформа, закрывают резиновой или корковой пробкой и снова ставят в термостат. В течение первых часов молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания прокалывают для удаления паров хлороформа). Через 4 часа доводят активную кислотность до (4,3±0,1) ЕД рН 30%-ным раствором уксусной кислоты, кипятят, помешивая, в течение (15±1) мин, фильтруют через бумажный фильтр. Готовый гидролизат должен содержать 200-300 мг/% аминного азота. Хранят гидролизат под хлороформом (1% к объему) при температуре от 4 до 6 °С.

6.2.7.2. Гидролизатно-молочная среда

Гидролизованное молоко, приготовленное по п.6.2.7.1 разводят питьевой водой в соотношениии 1:1.

В небольшом количестве разведенного гидролизата расплавляют агар в количестве 2,5 г на 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов приготовляемой среды (в случае приготовления селективной среды с неомицином 17 г на 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов). К остальному количеству гидролизата добавляют 20 г пептона и 3,5 г хлористого натрия, смесь нагревают до температуры (80±2) °С, после чего соединяют с расплавленным агаром. В смеси устанавливают активную кислотность (7,4±0,1) ед рН, кипятят в течение (15±1) мин, дают отстояться, сливают с осадка, не фильтруя, доливают горячей дистиллированной водой до заданного объема и добавляют в нее 10 г лактозы и 0,15 г солянокислого цистина. Среду разливают в пробирки высоким столбиком по 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и стерилизуют при температуре (112±1) °С в течение (30±1) мин с предварительным подогревом автоклава паром в течение (30±1) мин, активная кислотность готовой среды (7,1±0,1) ед рН.

6.2.7.3. Кукурузно-лактозная среда

В небольшом количестве дистиллированной воды расплавляют агар в количестве 2,5 г на 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов приготовляемой среды. К остальному количеству дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 40,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов водного раствора кукурузного экстракта, разбавленного 1:6, 6 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 0,12 г магния сернокислого, 2 г калия фосфорнокислого двузамещенного, смесь нагревают до температуры (80±2) °С, после чего соединяют с расплавленным агаром, добавляют 10 г лактозы и 0,15 г солянокислого цистина или 0,5 г аскорбиновой кислоты. Цистин предварительно растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, в которой устанавливают активную кислотность (8,4±0,1) ед рН с помощью 10%-ного раствора NaOH и нагревают на водяной бане до полного его растворения. Смесь доливают горячей дистиллированной водой до заданного объема и устанавливают активную кислотность среды (7±0,1) ед рН с помощью 40%-ного раствора NaOH или 25%-ного раствора аммиака. Среду разливают в пробирки высоким столбиком по 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и стерилизуют при (112±1) °С в течение (30±1) мин.

6.2.7.4. Селективная среда для определения количества бифидобактерий в продуктах, в микрофлоре которых присутствуют молочно-кислые бактерии

В составе гидролизатно-молочной (по п.6.2.7.2) или кукурузно-лактозной среды (по п.6.2.7.3) массовую долю агара увеличивают до 17 г на 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов питательной среды. Среды разливают в широкие пробирки по (20,0±0,5) смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и стерилизуют по п.6.2.7.2.

При проведении анализа в готовые среды перед расплавлением вносят 0,2 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов раствора неомицина (приготовленного по п.6.2.7.5) из расчета на 20 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов среды.

6.2.7.5. Приготовление раствора неомицина

50 г неомицина (сульфата или основания) растворяют в 500,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды. Массовая концентрация неомицина в растворе 100 г/дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

6.2.8. Среды для определения молочно-кислых бактерий

6.2.8.1. Стерилизованное обезжиренное молоко

Обезжиренное молоко (кислотностью от 16 до 18 °Т) разливают в пробирки по 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и затем стерилизуют при (115±1) °С в течение (10±1) мин.

6.2.8.2. Агар с гидролизованным молоком

К приготовленному гидролизованному молоку (п.6.2.7.1) добавляют 1,5% агара. Смесь расплавляют при (121±1) °С (15±1) мин, фильтруют через вату (в теплом автоклаве), разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (121±1) °С в течение (10±1) мин.

6.2.8.3. Агар с гидролизованным молоком, глюкозой и дрожжевым автолизатом

В приготовленное гидролизованное молоко (п.6.2.7.1) вносят агар из расчета 17 г на 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, расплавляют и фильтруют его, как указано в п.6.2.8.2, после чего на 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов раствора добавляют 10 г глюкозы и 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дрожжевого автолизата (приготовленного по п.6.2.8.4).

6.2.8.4. Приготовление дрожжевого автолизата

1 кг прессованных дрожжей разводят в 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов воды и помещают в термостат при температуре (56±1) °С на (72±2) ч. После этого полученную суспензию обрабатывают в автоклаве при температуре (115±1) °С в течение (15±1) мин. Автолизат фильтруют через ватно-марлевый фильтр, промывая осадок таким количеством воды, чтобы общее количество фильтрата составило (4,0±0,1) дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

6.2.8.5. Приготовление водного (голодного) агара

К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов питьевой воды добавляют 20 г агара, расплавляют и фильтруют его, разливают в пробирки и стерилизуют при температуре (121±2) °С в течение (15±1) мин.

6.2.9. Среды и реактивы для обнаружения энтерококков

6.2.9.1. Молочная среда с полимиксином по Г.П.Калине

К 1,0 дмМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов мясо-пептонного бульона добавляют 5,0 г натрия хлористого, 15,0 г агара. Стерилизуют при (121±1) °С в течение (20±1) мин. Полученный таким образом основной агар расплавляют и охлаждают до 45 °С. К 85,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов основного агара добавляют 1,25 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов и 0,01% водного раствора 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, 15,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов стерильного обезжиренного молока (п.6.2.8.1), 20000-40000 ЕД полимиксина "М". Все ингредиенты асептически смешивают и среду тонким слоем разливают в чашки Петри. Чашки со средой можно хранить в холодильнике в течение от 7 до 10 суток.

6.2.9.2. 1%-ный раствор перекиси водорода

К 320,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов дистиллированной воды в колбе, вместимостью 400 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, добавляют 10,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов концентрированного раствора пергидроля с исходной концентрацией 33%. Тщательно перемешивают, переливают в колбу с притертой пробкой. Хранят в холодильнике в колбе, обернутой темной бумагой.

6.2.9.3. Бульон с 40% желчи

К 60,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов мясо-пептонного бульона прибавляют 40,0 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов нативной профильтрованной желчи крупного рогатого скота, устанавливают активную кислотность (7,0±0,2) ед рН. Разливают во флаконы или пробирки, стерилизуют при (121±1) °С в течение (30±1) мин.

6.2.9.4. Бульон с активной кислотностью 9,6 ед рН

Мясо-пептонный бульон с активной кислотностью (7,0±0,2) ед рН нейтрализуют 1 н раствором гидроокиси натрия до активной кислотности 9,6 ед рН, проверяя значение рН универсальной индикаторной бумагой или по РН-метру. Разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при (121±1) °С в течение (30±1) мин.

6.2.10. Контроль питательных сред

6.2.10.1. Определение активной кислотности (pH)

Электрометрическое определение проводят на потенциометре или рН-метре по прилагаемым к ним инструкциям.

Определение активной кислотности с помощью индикаторной бумаги проводится по прилагаемой к ней инструкции.

6.2.10.2. Контроль на стерильность

Среды проверяют на стерильность путем выдержки при температуре (37±1) °С в течение 2-х суток. Если после этого на пробных питательных средах не обнаруживается колоний микроорганизмов, а в жидких средах нет помутнения среды или осадка, свидетельствующих о росте микроорганизмов, питательные среды считаются стерильными.

6.2.10.3. Сроки и условия хранения питательных сред

При отсутствии специально установленных условий и сроков хранения плотные питательные среды хранят не более месяца при температуре (20±1) °С и не более 2-х месяцев - при температуре 6 °С. Жидкие питательные среды хранят не более 14 дней при 6 °С.

7. Методы анализа


При контроле микробиологического качества и безопасности продуктов детского питания определяются следующие группы микроорганизмов: общее количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов; бактерии группы кишечных палочек, Е. coli, S. aurеus, В. cеrеus; бактерии рода Salmonella; дрожжи; плесневые грибы.

В кисло-молочных продуктах проводится контроль за количеством технологически значимой микрофлоры: молочно-кислых бактерий и бифидобактерий.

При проведении посевов на индикаторные, условно-патогенные и патогенные микроорганизмы должны быть использованы контрольные культуры соответствующих микроорганизмов, которые изучают в тестах идентификации параллельно с культурами, выделенными из исследуемых образцов продуктов.

7.1. Определение общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

7.1.1. Сущность метода


Метод основан на количественном подсчете колоний микроорганизмов, вырастающих на плотном питательном агаре при температуре (30±1) °С в течение 72 ч.

Аппаратура, материалы и реактивы согласно п.4.

7.1.2. Подготовка к анализу


Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют как указано в п.5.1 и 5.2. Посуду, материалы и реактивы стерилизуют как указано в п.5.3.

7.1.3. Проведение анализа


Для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 300 колоний. При посеве продуктов, не требующих разведения, учитывают все выросшие на чашках колонии (т.е. и менее 15).

Посев на чашки

Перед посевом чашки маркируют. На дне чашки карандашом по стеклу ставят номер исследуемого образца продукта, разведение и дату.

По 1 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов цельного продукта или каждого соответствующего его разведения вносят в 2 чашки Петри (параллельное определение). Пипетку с посевным материалом держат под углом 45°, касаясь концом пипетки дна чашки, не выдувая последнюю каплю из пипетки. Затем наливают в каждую чашку по 15-20 смМУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

Доступ к полной версии этого документа ограничен

Ознакомиться с документом вы можете, заказав бесплатную демонстрацию систем «Кодекс» и «Техэксперт».

Что вы получите:

После завершения процесса оплаты вы получите доступ к полному тексту документа, возможность сохранить его в формате .pdf, а также копию документа на свой e-mail. На мобильный телефон придет подтверждение оплаты.

При возникновении проблем свяжитесь с нами по адресу spp@kodeks.ru

МУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

Название документа: МУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов

Номер документа: 4.2.577-96

Вид документа: МУК (Методические указания по методам контроля)

Принявший орган: Заместитель Главного государственного санитарного врача РФ

Статус: Действующий

Опубликован: официальное издание

М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 1998 год

Дата принятия: 29 октября 1996

Дата начала действия: 29 октября 1996
Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах