• Текст документа
  • Статус
  • Сканер копия
Действующий


ГОСТ 28001-88


Группа С19



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ЗЕРНО ФУРАЖНОЕ, ПРОДУКТЫ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ, КОМБИКОРМА

Методы определения микотоксинов:
Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А

Fodder grain, products of its processing, mixed feeds.
Methods for determination of micotoxins:
T-2 toxin, zearalenon (F-2) and ochratoxin A


ОКСТУ 9209

Дата введения 1990-01-01

     
     
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 23.12.88 N 4567

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер раздела, пункта

ГОСТ 61-75

2.1; 3.1; 4.1

ГОСТ 1277-75

2.1

ГОСТ 1770-74

2.1; 3.1; 4.1

ГОСТ 2156-76

4.1

ГОСТ 2603-79

2.1

ГОСТ 3760-79

4.1

ГОСТ 3956-76

3.1

ГОСТ 4166-76

3.1

ГОСТ 4204-77

2.1

ГОСТ 4234-77

3.1

ГОСТ 4461-77

2.1

ГОСТ 5789-78

2.1; 3.1; 4.1

ГОСТ 5848-73

2.1; 3.1; 4.1

ГОСТ 5955-75

3.1; 4.1

ГОСТ 5962-67

2.1; 3.1

ГОСТ 6552-80

4.1

ГОСТ 6709-72

2.1; 3.1; 4.1

ГОСТ 7584-89

2.1; 3.1

ГОСТ 8677-76

2.1

ГОСТ 9147-80

2.1

ГОСТ 12430-66

1

ГОСТ 13496.0-80

1

ГОСТ 13586.3-83

1

ГОСТ 20015-88

2.1; 3.1; 4.1

ГОСТ 20239-74

1

ГОСТ 22300-76

2.1; 3.1; 4.1

ГОСТ 22314-84

2.1; 3.1; 4.1

ГОСТ 24104-88

2.1; 3.1; 4.1

ГОСТ 25336-82

2.1; 3.1; 4.1


5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол 4-94)

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ


Настоящий стандарт распространяется на фуражное зерно, продукты его переработки и все виды комбикормов и устанавливает методы определения токсинов Т-2, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Стандарт применяют в ветеринарных лабораториях Госагропрома СССР.

1. ОТБОР ПРОБ


Отбор проб - по ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13496.0, ГОСТ 20239, ГОСТ 12430.

2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ Т-2 ТОКСИНА В ФУРАЖНОМ ЗЕРНЕ


Сущность метода заключается в извлечении токсина ацетоном, очистке экстракта от липидов и растительных пигментов с последующей доочисткой на хроматографической колонке и двукратном хроматографировании его на пластинке "Силуфол" со стандартным раствором токсина. Чувствительность метода - 600 мкг/кг кормового средства.

2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Шуттель-аппарат.

Баня водяная, электрическая (2-4-гнездная).

Весы аналитические марки АДВ-200.

Весы лабораторные 2-го класса точности по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 200 г.
___________________
* С 1 июля 2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).

Мельница лабораторная электрическая.

Источник ультрафиолетовых лучей с длиной волны 365 нм марки ОИ-18, ВИО-1 или других аналогичных марок.

Микрошприц вместимостью 0,01 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Шкаф сушильный.

Набор сит.

Испаритель роторный.

Распылитель стеклянный (пульверизатор).

Холодильник.

Электрофен бытовой по ГОСТ 22314.

Мельница шаровая.

Эксикатор диаметром 29 см.

Штатив Бунзена.

Штатив для пробирок.

Пробирки стеклянные мерные с притертой пробкой вместимостью 5 и 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А по ГОСТ 1770.

Пробирки центрифужные вместимостью 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Воронки стеклянные диаметром 4, 6, 8 см по ГОСТ 25336.

Колбы конические с притертой пробкой вместимостью 500 и 250 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Колбы мерные исполнений 1 и 2 вместимостью 25, 50, 100 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А 2-го класса точности по ГОСТ 1770.

Воронки делительные типа ВД, исполнений 1-3, вместимостью 500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А по ГОСТ 25336.

Пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5 вместимостью 1, 2 и 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А 2-го класса точности по нормативно-технической документации.

Цилиндры мерные вместимостью 25, 50 и 100 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А по ГОСТ 1770.

Чашки фарфоровые диаметром 15 см по ГОСТ 9147.

Колонка хроматографическая диаметром 1,8 см, высотой 18-20 см.

Пластинки хроматографические "Силуфол" с флюоресцентным слоем марки ИУ-254, размером 15х15 см.

Камера хроматографическая.

Бумага лабораторная фильтровальная по ГОСТ 7584.

Алюминия окись для хроматографии, 2-й степени активности по Брокману, ч.

Ацетон по ГОСТ 2603, ч. д. а.

Гексан, х. ч.

Кальция окись по ГОСТ 8677, х. ч.

Кальций хлористый плавленый, ч.

Кислота азотная по ГОСТ 4461, х. ч.

Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, х. ч.

Кислота уксусная, ледяная по ГОСТ 61, х. ч.

Кислота серная по ГОСТ 4204, х. ч.

Серебро азотно-кислое по ГОСТ 1277, ч. д. а.

Силикагель марки КСК.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962*.
_________________
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000 (здесь и далее).

Толуол по ГОСТ 5789, ч. д. а.

Хлороформ для наркоза по ГОСТ 20015.

Этилацетат по ГОСТ 22300, ч.

Стандарт микотоксина Т-2.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечание. Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду или другие мерные средства измерений, имеющие аналогичные метрологические характеристики.


2.2. Подготовка к испытанию

2.2.1. Подготовка проб к испытанию

Из средней пробы фуражного зерна методом квартования выделяют часть пробы массой не менее 100 г, которую размалывают на электромельнице до такого состояния, чтобы она проходила без остатка через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Подготовленную для испытания пробу хранят в стеклянной колбе с крышкой в сухом темном месте.

2.2.2. Подготовка хроматографической колонки

Хроматографическую колонку заполняют в следующей последовательности: вначале помещают тампон гигроскопической ваты, затем 1 г силикагеля, 2 г окиси алюминия и 2 г окиси кальция. Силикагель и окись алюминия вносят небольшими порциями, слегка постукивая по колонке. Для удаления пузырьков воздуха промывают колонку небольшим количеством хлороформа (15-20 см) при отсасывании водоструйным насосом. Окись кальция вносят в колонку в виде хлороформной суспензии при отсасывании водоструйным насосом.

2.2.3. Приготовление растворов и реактивов

2.2.3.1. Приготовление 20%-ного спиртового раствора серной кислоты

11,5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А серной кислоты небольшими порциями, при осторожном перемешивании, переносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А с небольшим количеством этилового спирта (15-20 см). После охлаждения раствора постепенно, при постоянном перемешивании, добавляют в колбу этиловый спирт до метки. Охлаждают при комнатной температуре и окончательно доводят раствор в колбе спиртом до метки.

2.2.3.2. Приготовление системы растворителей

Растворитель 1. Гексан смешивают с этилацетатом в соотношении 1:1. Высота слоя налитой в хроматографическую камеру жидкости не должна превышать 0,5 см;

Растворитель 2. Толуол смешивают с этилацетатом и муравьиной кислотой в соотношении 6:3:1 или хлороформ смешивают с этилацетатом и уксусной ледяной кислотой в соотношении 17:3:1.

2.2.3.3. Приготовление водного раствора азотно-кислого серебра с массовой долей 2%

1 г азотно-кислого серебра помещают в мерную колбу вместимостью 50 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, добавляют дистиллированную воду до метки. Раствор хранят в холодильнике.

2.2.3.4. Приготовление силикагеля

Силикагель размалывают на шаровой мельнице и заливают на 18-20 ч соляной кислотой, разбавленной водой 1:1. Затем кислоту сливают и силикагель промывают водой до отсутствия в промывных водах следов иона хлора. Для этого к 1 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А промывных вод прибавляют 1 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А раствора азотно-кислого серебра с массовой долей 2% и 1 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А азотной кислоты. В присутствии иона хлора выпадает осадок белого цвета. Затем силикагель промывают ацетоном, просушивают под тягой до исчезновения запаха ацетона и высушивают в сушильном шкафу при температуре 130 °С в течение 4-6 ч. Очищенный и высушенный силикагель просеивают через сито. Для заполнения хроматографической колонки используют фракцию, проходящую через сито с размером отверстий 0,105 мм и задерживающуюся на сите - 0,075 мм. Силикагель хранят в плотно закрытых сосудах.

2.2.3.5. Подготовка окиси кальция, силикагеля и пластинки "Силуфол"

Окись кальция, силикагель и пластинки "Силуфол" перед использованием активируют нагреванием в сушильном шкафу при температуре 100 °С в течение 1 ч. Окись кальция предварительно растирают в фарфоровой ступке.

2.2.3.6. Приготовление стандартного раствора микотоксина Т-2

Взвешивают в стаканчике вместимостью 25 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А 0,0250 г (точная навеска) кристаллического микотоксина Т-2, переносят с помощью этилового спирта или ацетона в мерную колбу вместимостью 50 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А и доводят объем раствора спиртом или ацетоном до метки. В 1 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А раствора содержится 0,5 мг Т-2 токсина. Раствор устойчив в течение 3 мес при хранении на холоде.

2.3. Проведение испытания

2.3.1. Из подготовленной для испытания пробы зерна отбирают навеску массой 25 г и помещают в колбу вместимостью 500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А. В колбу вносят 150 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А ацетона и встряхивают на шуттель-аппарате 1,5 ч (либо оставляют на 18-20 ч при комнатной температуре). Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в колбу, а остаток корма еще раз заливают 100 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А ацетона, вновь встряхивают 30 мин и фильтруют через тот же фильтр в соответствующую колбу. Фильтр промывают 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А ацетона, присоединяя фильтрат к общему ацетоновому экстракту, который переносят в делительную воронку. К ацетоновому экстракту добавляют 25 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А гексана, перемешивают и добавляют 50 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А воды. После разделения слоев гексановую фракцию (верхний слой) удаляют, а нижний слой (водно-ацетоновая фракция) повторно экстрагируют 25 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А гексана при перемешивании растворов. Выделившийся после отстаивания смеси верхний гексановый слой снова удаляют

.

2.3.2. Водно-ацетоновую фракцию экстрагируют 25 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А хлороформа. Содержимое перемешивают 2 мин и оставляют для разделения слоев. После разделения слоев хлороформную фракцию (нижний слой) собирают в отдельную колбу, а затем пропускают через подготовленную хроматографическую колонку. Очищенный на колонке от примесей экстракт собирают в колбу для отгона или выпарительную чашку. Экстракцию водно-ацетоновой фракции хлороформом проводят еще два раза, экстрагируя каждый раз 20 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А хлороформа и пропуская каждую порцию экстракта через хроматографическую колонку. Экстракты, очищенные на колонке, собирают вместе в колбе для отгона или выпарительной чашке. Затем колонку три раза промывают хлороформом по 30 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А с последующим присоединением промывных порций к основному экстракту, находящемуся в колбе для отгона.

2.3.3. Колбу для отгона соединяют с перегонным аппаратом или роторным испарителем и содержимое ее концентрируют на кипящей водяной бане до 3 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А. При использовании выпарительной чашки раствор упаривают также на кипящей водяной бане до 2-3 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А. Концентрированный хлороформный экстракт переносят в центрифужную пробирку. Колбу трехкратно ополаскивают 1-1,5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А хлороформа, присоединяя эти порции к основному раствору в пробирке. Пробирку нагревают на водяной бане до полного удаления хлороформа. Нагревание ведут вначале при температуре 80-85 °С, а затем по мере уменьшения объема раствора температуру снижают до 60 °С.

2.3.4. Остаток в пробирке растворяют в 0,1 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А ацетона и наносят микрошприцем на стартовую линию хроматографической пластинки "Силуфол". Пробы наносят по 0,01 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А на расстоянии 1,5 см друг от друга и нижнего края пластинки. Одновременно с исследуемыми растворами на пластинку наносят 0,002 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А стандартного спиртового или ацетонового раствора токсина Т-2. Пластинку с нанесенными пробами помещают в насыщенную парами растворителей хроматографическую камеру таким образом, чтобы стартовая линия располагалась на 0,5 см выше уровня подвижного растворителя. Первое хроматографирование проводят в системе этилацетат - гексан (1:1). Когда фронт растворителя продвинется на высоту 14,5 см от нижнего края пластинки, хроматограмму извлекают из камеры, 5-7 мин подсушивают на воздухе, а затем 1-2 мин в сушильном шкафу при температуре 100 °С. После высушивания хроматограмму повторно помещают в камеру с системой растворителей хлороформ - этилацетат - уксусная кислота (17:3:1) или толуол - этилацетат - муравьиная кислота (6:3:1). Когда фронт смеси растворителей продвинется на высоту 14,5 см, хроматограмму извлекают из камеры, подсушивают на воздухе, обрабатывают 20%-ным спиртовым раствором серной кислоты из пульверизатора и помещают в сушильный шкаф с температурой 110 °С. Пластинку выдерживают в сушильном шкафу 3-5 мин до небольшого потемнения. После этого пластинку извлекают из шкафа, охлаждают и просматривают в ультрафиолетовых лучах длиной 365 нм.

2.4. Обработка результатов

Токсин Т-2 на хроматограмме в исследуемой пробе обнаруживают в виде пятна с голубой флюоресценцией, соответствующей по положению и флюоресценции пятну токсина Т-2 в стандартной пробе. При использовании в повторном хроматографировании системы толуол - этилацетат - муравьиная кислота (6:3:1) ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А токсина Т-2 составляет 0,23-0,24, при применении системы хлороформ - этилацетат - уксусная кислота (17:3:1) - 0,20-0,23.

Результат считается положительным на наличие токсина Т-2 при обнаружении голубой флюоресценции на пластинке "Силуфол" в исследуемой пробе, соответствующей по положению флюоресценции пятну стандартного раствора Т-2 токсина хотя бы в одной из двух параллельных проб.

3. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЗЕАРАЛЕНОНА (Ф-2) В ФУРАЖНОМ ЗЕРНЕ, ПРОДУКТАХ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ И КОМБИКОРМАХ


Сущность метода заключается в экстракции зеараленона (Ф-2) из кормов смесью ацетонитрила и раствора хлористого калия, его очистке и хроматографировании на пластинках "Силуфол" с последующим измерением интенсивности флюоресценции или интенсивности его окрашивания красным прочным ЖЖ в сравнении со стандартным раствором зеараленона. Чувствительность метода 50 мкг/кг кормового средства.

3.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Мельница лабораторная электрическая.

Весы лабораторные 2-го класса точности по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Весы аналитические марки АДВ-200.

Насос водоструйный.

Испаритель роторный.

Баня водяная электрическая (2-4-гнездная).

Источник ультрафиолетовых лучей длиной волны 253 нм марки ВИО-1, или других аналогичных марок или хроматоскоп.

Шуттель-аппарат.

Набор сит.

Микрошприц вместимостью 0,01 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Распылитель стеклянный (пульверизатор).

Шкаф сушильный.

Электрофен бытовой ГОСТ 22314.

Холодильник.

Штатив Бунзена.

Штатив для пробирок.

Бумага лабораторная фильтровальная по ГОСТ 7584.

Колбы конические с притертой пробкой вместимостью 500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Воронки делительные типа ВД, исполнений 1-3, вместимостью 250-500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А по ГОСТ 25336.

Силикагель АСК.

Пробирки стеклянные мерные с притертой пробкой вместимостью 5-10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А по ГОСТ 1770.

Пластинки хроматографические "Силуфол" с флюоресцентным слоем марки ИУ-254, размером 15х15 см и 20х20 см.

Цилиндры мерные вместимостью 10, 50, 100, 250 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А по ГОСТ 1770.

Камера хроматографическая.

Чашки выпарительные фарфоровые на 8 и 15 см.

Пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5 вместимостью 1, 2, 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А 2-го класса точности по нормативно-технической документации.

Колбы мерные исполнений 1, 2 вместимостью 25, 50, 100, 500, 1000 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А 2-го класса точности по ГОСТ 1770.

Воронки стеклянные диаметром 6 см по ГОСТ 25336.

Гексан, х. ч.

Ацетонитрил, ч.

Хлороформ для наркоза по ГОСТ 20015.

Бензол по ГОСТ 5955, х. ч.

Толуол по ГОСТ 5789, ч. д. а.

Этилацетат по ГОСТ 22300, ч.

Калий хлористый по ГОСТ 4234, х. ч.

Свинец уксуснокислый по ГОСТ 4166, ч. д. а.

Силикагель АСК по ГОСТ 3956.

Муравьиная кислота по ГОСТ 5848, ч. д. а.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962, с массовой долей 50%.

Диатомовая земля (целит 545).

Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, х. ч.

Красный прочный ЖЖ (п-нитрофенилдиазония тетрафторборат, стабилизированная соль).

Стандарт зеараленона (Ф-2).

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечание. Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду или другие мерные средства измерений, имеющие аналогичные метрологические характеристики.


3.2. Подготовка к испытанию

3.2.1. Подготовка проб к испытанию

Из средней пробы фуражного зерна или продуктов его переработки и комбикормов методом квартования выделяют часть пробы массой не менее 150 г, которую размалывают на электромельнице до такого состояния, чтобы она проходила без остатка через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Подготовленную для испытания пробу хранят в стеклянной колбе с крышкой в темном месте.

3.2.2. Приготовление растворов и реактивов

3.2.2.1. Приготовление раствора хлористого калия с массовой долей 4%

4 г хлористого калия вносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А и растворяют в воде, после чего воду доливают до метки.

3.2.2.2. Приготовление раствора уксуснокислого свинца

200 г уксуснокислого свинца помещают в мерную колбу вместимостью 1000 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, заливают 3 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А уксусной кислоты и разбавляют водой до метки.

3.2.2.3. Приготовление раствора красного прочного ЖЖ с массовой долей 0,05%

12,5 мг красного прочного ЖЖ вносят в мерную колбу вместимостью 25 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А и растворяют в 50%-ном этиловом спирте. После растворения этим же растворителем доводят объем раствора до метки. Раствор готовят перед применением.

3.2.2.4. Приготовление системы подвижных растворителей

Растворитель 1. Толуол смешивают с этилацетатом и муравьиной кислотой в соотношении 6:3:1.

Растворитель 2. Бензол смешивают с ацетонитрилом в соотношении 98:2.

3.2.2.5. Приготовление стандартного раствора зеараленона

В мерную колбу вместимостью 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А вносят 1 мг зеараленона, растворяют в бензоле и доводят объем до метки. Массовая концентрация раствора микотоксина должна составить 100 мкг/смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А. Для приготовления стандартного рабочего раствора берут 1 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А приготовленного раствора, переносят в мерную колбу вместимостью 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, доводят объем раствора бензолом до метки и получают массовую концентрацию зеараленона 10 мкг/смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А. Растворы устойчивы к использованию в течение 6 мес при хранении в темном холодном месте.

3.3. Проведение испытания

3.3.1. Из размолотой средней пробы корма берут навеску массой 50 г с погрешностью не более 0,01 г и помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Для проведения экстракции в колбу с навеской вносят 180 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А ацетонитрила, 20 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А раствора хлористого калия с массовой долей 4%. Колбу закрывают пробкой и взбалтывают на шуттельаппарате 30 мин, после чего содержимое фильтруют через фильтровальную бумагу.

3.3.2. Полученный фильтрат очищают. 100 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А фильтрата помещают в делительную воронку, где фильтрат четырехкратно обезжиривают гексаном по 50 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А каждый раз. Очищенную (нижнюю) фазу ацетонитрила переносят либо в колбу роторного испарителя, либо в выпарительную чашку и выпаривают досуха при температуре 80 °С. К полученному сухому остатку добавляют 20 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А ацетонитрила, 60 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А воды и 20 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А раствора уксуснокислого свинца. Перемешивают и ставят в водяную баню на 10-15 мин при температуре 80 °С до образования осадка или помутнения. Затем добавляют 5 г силикагеля АСК (или целита), перемешивают и фильтруют через фильтровальную бумагу. 50 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А фильтрата помещают в делительную воронку и проводят тройную переэкстракцию хлороформом по 50 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А каждый раз. Хлороформную фракцию (нижнюю) собирают в выпарительную чашку и упаривают досуха на водяной бане при температуре 80 °С. Сухой остаток растворяют 5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А хлороформа, количественно переносят в пробирку с притертой пробкой и упаривают досуха на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А смеси бензол - ацетонитрил (98:2) и пробирку закрывают плотно пробк

ой.

3.3.3. Для определения содержания зеараленона проводят одномерную или двухмерную тонкослойную хроматографию на пластинках "Силуфол".

3.3.3.1. Одномерную тонкослойную хроматографию проводят на пластинку размером 15х15 см. Отступая на 1,5 см от края пластинки, наносят 0,005; 0,01 и 0,015 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А стандартного раствора зеараленона и 0,025 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А растворенного в смеси бензол - ацетонитрил экстракта исследуемой пробы. Разгонку проводят в системе толуол - этилацетат - муравьиная кислота (6:3:1), пластинку просушивают на воздухе и просматривают под источником ультрафиолетовых лучей. По характерному сине-голубому свечению стандартного раствора зеараленона на этом же уровне в хроматограмме определяют наличие таких же пятен и свечения в экстракте исследуемой пробы корма. В случае интенсивного свечения пятен зеараленона в экстракте исследуемой пробы корма, превышающей подобное же свечение в точке нанесения наибольшего количества стандартного раствора зеараленона, в исследуемую пробу дополнительно вносят смесь бензол - ацетонитрил (98:2), доводя объем до 1 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, 1,5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А и т. д. или наносят на пластинку меньшее количество экстракта исследуемой пробы. Для окончательного решения о принадлежности пятен к микотоксину зеараленону хроматограмму орошают из пульверизатора раствором красного прочного ЖЖ и помещают ее в сушильный шкаф при 100-105 °С на 5 мин. Пятна с наличием зеараленона окрашиваются в желтый цвет.

3.3.3.2. Двухмерную тонкослойную хроматографию проводят в случае невозможности достаточной очистки экстрактов или сомнения в результатах исследований при проведении одномерной хроматографии. Для этого используют пластинку "Силуфол" размером 20х20 см. Растворы наносят по схеме, указанной на чертеже:

в точке А - 0,025 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А очищенного исследуемого экстракта

в точке В - 0,010 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А стандартного раствора

в точке С - 0,005 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А " "

в точке D - 0,010 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А " "

в точке Е - 0,015 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А " "

ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А


I - система бензол - ацетон;

II - система толуол - этилацетат - муравьиная кислота



Хроматограмму проявляют в системе бензол - ацетон (98:2) в направлении I до уровня, на 1,5-2 см не достигающего точки С. Затем ее просушивают и просматривают в ультрафиолетовом свете с длиной волны 253 нм и возможные пятна зеараленона отмечают карандашом. Затем хроматограмму проявляют в направлении II в системе толуол - этилацетат - муравьиная кислота (6:3:1) до уровня, не достигающего 1,5-2 см точки В. Пластинку просушивают, просматривают под ультрафиолетовыми лучами и на уровне стандартного раствора относительно точек С, D, Е и точки В определяют наличие зеараленона в исследуемой пробе.

3.4. Обработка результатов

Содержание зеараленона в пробе (ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А) в миллиграммах на 1 килограмм корма в соответствии с интенсивностью свечения стандартного и испытуемого раствора вычисляют по формуле

ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А,


где ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А - массовая концентрация зеараленона в стандартном растворе, мкг/смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А;

ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А - конечный объем экстракта, учитывая возможное разбавление, смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А;

ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А - соответственно объемы экстракта и стандартного раствора зеараленона с одинаковой интенсивностью свечения, смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А;

12,5 - масса пробы корма, соответствующая объему экстракта подвергнутого очистке, г.

За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений. Результат вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.

4. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ОХРАТОКСИНА А В ФУРАЖНОМ ЗЕРНЕ, ПРОДУКТАХ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ И КОМБИКОРМАХ

Сущность метода заключается в извлечении микотоксина из кормов смесью хлороформа и раствора ортофосфорной кислоты, двойной переэкстракции микотоксина и проведении тонкослойной хроматографии. Чувствительность метода - 10 мкг/кг кормового средства.

4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Баня водяная, электрическая (2-4-гнездная).

Весы аналитические марки АДВ-200.

Весы лабораторные 2-го класса точности по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Мельница лабораторная электрическая.

Источник ультрафиолетовых лучей длиной волны 365 нм марки ВИО-1, ОЛД-41, ОИ-18 или других аналогичных марок.

Микрошприц вместимостью 0,01 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Набор сит.

Распылитель стеклянный (пульверизатор).

Шкаф сушильный.

Холодильник.

Шуттель-аппарат.

Электрофен бытовой по ГОСТ 22314.

рН-метр.

Воронка делительная типа ВД, исполнений 1-3, вместимостью 500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А по ГОСТ 25336.

Штатив Бунзена.

Штатив для пробирок.

Камера хроматографическая.

Пробирки стеклянные мерные с притертой пробкой вместимостью 5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А по ГОСТ 1770.

Колбы конические с притертой пробкой вместимостью 250 и 500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Колбы мерные исполнений 1, 2, вместимостью 1000 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, 2-го класса точности по ГОСТ 1770.

Воронки стеклянные диаметром 3, 8 см по ГОСТ 25336.

Цилиндр мерный вместимостью 250 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные, исполнений 1, 2, 4, 5, вместимостью 1 и 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, 2-го класса точности по нормативно-технической документации.

Чашки фарфоровые выпарительные диаметром 8 см.

Бумага фильтровальная.

Пластинки хроматографические "Силуфол" с флюоресцентным слоем марки ИУ-254, размером 15х15 см.

Кислота фосфорная орто по ГОСТ 6552, ч., раствор 0,1 моль/дмГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Хлороформ для наркоза по ГОСТ 20015.

Натрий двууглекислый по ГОСТ 2156, ч., раствор 0,1 моль/дмГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.

Бензол по ГОСТ 5955, х. ч.

Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч. д. а.

Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, х. ч.

Толуол по ГОСТ 5789, ч. д. а.

Этилацетат по ГОСТ 22300, ч.

Аммиак водный по ГОСТ 3760.

Стандарт охратоксина А.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечание. Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду или другие мерные средства измерений, имеющие аналогичные или лучшие метрологические характеристики.


4.2. Подготовка к испытанию

4.2.1. Подготовка проб к испытанию

Из средней пробы фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов методом квартования выделяют часть пробы массой не менее 150 г, которую размалывают на электромельнице до такого состояния, чтобы она проходила без остатка через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Подготовленную для испытания пробу хранят в стеклянной колбе с крышкой в сухом темном месте.

4.2.2. Приготовление растворов и реактивов

4.2.2.1. Приготовление системы подвижных растворителей

Толуол смешивают с этилацетатом и муравьиной кислотой в соотношении 6:3:1.

4.2.2.2. Приготовление 0,1 моль/дмГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А раствора ортофосфорной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1000 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, содержащую 500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А дистиллированной воды, вносят 9,8 г (6 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А) ортофосфорной кислоты, перемешивают и доводят объем раствора до метки водой.

4.2.2.3. Приготовление подкисленного раствора хлороформа

К 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А хлороформа прибавляют 1 каплю ледяной уксусной кислоты.

4.2.2.4. Приготовление 0,1 моль/дмГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А раствора двууглекислого натрия

90,5 г двууглекислого натрия вносят в мерную колбу вместимостью 1000 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, растворяют в воде и доводят объем до метки.

4.2.2.5. Приготовление стандартного раствора охратоксина А

5 мг кристаллического охратоксина А растворяют в 5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А подкисленного хлороформа, переносят количественно в мерную колбу на 10 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А и доводят объем раствора до метки подкисленным хлороформом. Из полученного раствора берут 0,5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, переносят в мерную колбу на 25 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А и доводят объем раствора до метки подкисленным хлороформом. Рабочий стандартный раствор содержит в 1,0 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А 10 мкг охратоксина А. Раствор хранят в холодильнике.

4.3. Проведение испытания

4.3.1. Проводят экстрагирование охратоксина А из комбикорма. Для этого навеску измельченного корма массой 50 г переносят в колбу вместимостью 500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А. Заливают 25 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А 0,1 моль/дмГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А раствора ортофосфорной кислоты и 250 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А хлороформа, встряхивают на шуттель-аппарате в течение 30 мин или экстрагируют путем настаивания в течение 16-18 ч.

4.3.2. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр, переносят в делительную воронку вместимостью 500 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А, прибавляют к нему 200 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А 0,1 моль/дмГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А раствора натрия двууглекислого и перемешивают. После разделения смеси хлороформный слой удаляют, а водный остаток подкисляют муравьиной кислотой до рН 2-3 и прибавляют к нему 50 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А чистого хлороформа. Содержимое делительной воронки вновь перемешивают. После разделения слоев хлороформный слой сливают в фарфоровую чашку, а водный остаток повторно обрабатывают 50 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А хлороформа, который после отделения объединяют с первой порцией и упаривают досуха при температуре не выше 60 °С.

4.3.3. Наличие охратоксина А в корме определяют качественно и полуколичественно.

4.3.3.1. Качественное определение охратоксина А

Сухой остаток экстракта растворяют в 1 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А подкисленного хлороформа. На хроматографическую пластинку наносят микрошприцем 0,002 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А стандартного раствора микотоксина и 0,01 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А экстракта исследуемой пробы. Пластинку подсушивают электрофеном. Точки нанесения обоих растворов должны быть на расстоянии не менее 1 см друг от друга и 1,5 см от бокового края пластинки.

Пластинку помещают в вертикальном положении в хроматографическую камеру, заполненную системой растворителей толуол - этилацетат - муравьиная кислота (6:3:1). После того, как фронт растворителей поднимется на высоту 10-12 см старта, пластинку вынимают из камеры, подсушивают в токе теплого воздуха до удаления запаха растворителей и просматривают под источником ультрафиолетовых лучей с длиной волны 365 нм. Сравнивая зелено-голубое свечение стандартного раствора охратоксина А с характером свечения исследуемой пробы, делают предварительный вывод о наличии или отсутствии в исследуемой пробе корма микотоксина. С целью подтверждения наличия охратоксина А в исследуемой пробе хроматограмму помещают на 5 мин в камеру с парами аммиака, под воздействием которых охратоксин А изменяет флюоресценцию от зелено-голубой до темно-голубой. В случае качественного выявления в исследуемой пробе охратоксина А, проводят полуколичественное определение микотоксина.

4.3.3.2. Полуколичественное определение содержания охратоксина А

0,5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А раствора экстракта, используемого для качественного определения, смешивают с 4,5 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А хлороформа, перемешивают и наносят на хроматографическую пластинку 0,001, 0,003, 0,005, 0,01 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А исследуемого экстракта и 0,002 смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А стандартного раствора охратоксина А. Просмотром хроматограмм под источником ультрафиолетовых лучей определяют по интенсивности зелено-голубого свечения предельно-минимальное количество охратоксина А в исследуемой пробе. Если на хроматограмме в минимальном объеме исследуемого раствора имеется пятно охратоксина А, превосходящее по интенсивности свечения стандартный раствор охратоксина А, исследуемый раствор разбавляют в 10 и более раз до получения на хроматограмме выявленного свечения охратоксина А.

Содержание охратоксина А в исследуемой пробе (ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А) в микрограммах на 1 кг корма вычисляют по формуле

ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А,


где ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А - минимальный объем исследуемого раствора, в котором установлено предельно-выявляемое свечение охратоксина А, смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А;

ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А - общий объем исследуемого раствора, смГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А;

ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А - масса навески исследуемой пробы, г;

0,001 - минимальное количество охратоксина А, выявляемое на пластинке "Силуфол" под источником УФЛ, мкг;

2 - коэффициент, учитывающий потери вещества в ходе анализа.

За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений. Результат вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.



Текст документа сверен по:
официальное издание
Комбикорма. Часть 5. Корма.
Комбикорма. Комбикормовое сырье.
Премиксы. Методы анализа: Сб. ГОСТов. -
М.: ИПК Издательство стандартов, 2002

ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А

Название документа: ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А

Номер документа: 28001-88

Вид документа: ГОСТ

Принявший орган: Госстандарт СССР

Статус: Действующий

Опубликован: официальное издание

Комбикорма. Часть 5. Корма. Комбикорма. Комбикормовое сырье. Премиксы. Методы анализа: Сб. ГОСТов. - М.: ИПК Издательство стандартов, 2002 год

Дата принятия: 23 декабря 1988

Дата начала действия: 01 января 1990
Дата редакции: 01 мая 2002
ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А
Данный документ представлен в виде сканер копии, которую вы можете скачать в формате или
Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах