ГОСТ 12044-93 Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения зараженности болезнями (с Поправкой)

     10 Биологический метод

Метод применяют для выявления внешней и внутренней зараженности семян болезнями. Он основан на стимуляции развития и роста микроорганизмов в зараженных семенах.

Зараженность семян определяют при проращивании их во влажной камере, на питательных средах, песке или в рулонах фильтровальной бумаги.

10.1 Анализ семян во влажной камере

При проращивании семян во влажной камере заболевания, вызываемые бактериями, выявляют по размягчению и ослизнению тканей семени. Заболевания, вызываемые грибами на проросших и непроросших семенах, проявляются в виде пятен различной формы и окраски, налета грибницы, пикнид, уродливости, деформации или отмирания частей проростков.

Для контроля правильности идентификации патогенов применяют микроскопирование.

10.1.1 Отбор проб

10.1.1.1 Из средней пробы, предназначенной для анализа семян на зараженность болезнями, выделяют навеску. Из семян основной культуры отбирают четыре рабочие пробы по 50 или 100 семян в зависимости от вида анализируемых культур.

10.1.2 Подготовка к анализу

10.1.2.1 Для проращивания семян во влажной камере применяют стерильные сухие чашки Петри, Коха или стеклянные стаканы, накрытые стеклом. На дно чашек (стаканов) помещают марлю в три слоя или фильтровальную бумагу в два слоя, или фильтровальную бумагу, положенную на гигроскопическую вату, толщиной слоя не более 0,25 см.

Марлю, комбинированный субстрат или фильтровальную бумагу в чашках Петри или Коха увлажняют с помощью пипетки, слегка приоткрывая при этом с одного края крышку чашки. Увлажнение считают нормальным, если при наклоне чашки с марлевых кружочков или фильтровальной бумаги стекает несколько капель воды.

Семена раскладывают на ложе с помощью пинцета на расстоянии 1-2 см друг от друга в зависимости от их крупности.

Закрытые чашки Петри, Коха или стаканы с заложенными в них семенами помещают в термостат для проращивания.

10.1.2.2 Термостаты предварительно тщательно моют горячей водой с моющими средствами и дезинфицируют 1%-ным раствором марганцовокислого калия через каждые 10 дней. Перед каждым фитоанализом их дезинфицируют спиртом или бактерицидной лампой в течение 30 мин. Один раз в месяц термостаты дезинфицируют с помощью бактерицидных ламп в течение 8 ч.

10.1.2.3 Чашки Петри, марля, фильтровальная бумага, вата, пипетки, применяемые для анализа, должны быть стерильными. Стекло, на котором выделяют навески и отсчитывают семена, совки, чашки весов, растильни и другие предметы дезинфицируют спиртом. Чашки Петри и Коха с марлевыми кружочками, ватой или фильтровальной бумагой, а также пипетки заворачивают в оберточную бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 130°С в течение 1 ч (при немедленном использовании их стерилизуют без завертывания в бумагу) или в автоклаве под давлением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 40-50 мин. Металлические предметы (пинцеты, препаровальные иглы и другое оборудование) стерилизуют над пламенем спиртовой или газовой горелки в процессе работы. Воду стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин под давлением 0,09807 МПа (1 атм). Допускается применять свежекипяченую воду. Воду кипятят в химических колбах, закрытых ватными пробками, в течение 30 мин, считая с момента закипания.

10.1.3 Проведение анализа

10.1.3.1 Просмотр семян пшеницы, ржи, ячменя, кукурузы, льна, сои, эфиромасличных культур, подсолнечника, гороха, овощной фасоли, моркови проводят в сроки, установленные настоящим стандартом; просмотр семян остальных культур проводят в сроки, установленные для определения всхожести по ГОСТ 12038, ГОСТ 30556. Виды болезней семян, выявляемые при проращивании во влажной камере, указаны в таблице 1.

Таблица 1 - Виды болезней семян, выявляемые при проращивании во влажной камере

10.1.3.2 Для стимуляции образования конидиеносцев и конидий с целью идентификации патогенов некоторых грибов, например Drechslera graminea (полосатая пятнистость), Dr. teres (сетчатая пятнистость), Fusarium nivale (снежная плесень) и др., необходимо 12 ч чередование света и темноты при проращивании семян в чашках Петри, Коха или стеклянных стаканах с фильтровальной бумагой (освещенность 750-1250 люкс).

10.2 Анализ семян на питательных средах

10.2.1 Отбор проб

10.2.1.1 Из средней пробы, предназначенной для определения зараженности, выделяют навеску семян основной культуры, из которой отбирают четыре рабочие пробы по 50 семян в каждой и помещают их в стерильную посуду с питательной средой.

10.2.2 Подготовка к анализу

10.2.2.1 Приготовление картофельного агара:

200 г вымытого, очищенного, нарезанного ломтиками картофеля заливают 1000 см воды и кипятят в течение 40 мин, затем жидкость фильтруют. В отфильтрованную жидкость доливают воду до 1000 см, добавляют 20 г агара и подогревают до его полного растворения. После растворения агара раствор фильтруют в горячем состоянии через несколько слоев марли с ватной прокладкой и стерилизуют под давлением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин или текучим паром два раза по 1 ч через сутки. После стерилизации в питательную среду добавляют стерильный 50%-ный раствор лимонной кислоты из расчета 0,1-0,05 см (одна капля) на 10 см или концентрированную молочную кислоту (4 см кислоты на 1000 см среды) и жидкость разливают по чашкам.

10.2.2.2 Приготовление картофельно-глюкозного агара: