ГОСТ 28566-90 (СТ СЭВ 6646-89) Продукты пищевые. Метод выявления и определения количества энтерококков

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить ожидаемое количество энтерококков в 1,0 г (см) продукта или определить допустимое количество энтерококков, указанное в нормативно-технической документации на конкретный вид пищевого продукта.

При выявлении энтерококков из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений так, чтобы можно было определить минимальное количество продукта, содержащее энтерококки, или высевают навеску продукта, которая указана в нормативно-технической документации на этот продукт.

4.2. Для определения количества энтерококков 0,1 или 0,2 см продукта или его разведения высевают по ГОСТ 26670 на поверхность предварительно подсушенной агаризованной питательной среды, приготовленной по п.3.2.5 или 3.2.6, или 3.2.9.

4.3. Если необходимо выявить энтерококки в навеске продукта определенной массы или объема, то навеску продукта или его разведение высевают непосредственно в жидкую питательную среду по п.3.2.1 или 3.2.8.

4.4. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение 24-48 ч, через 24 ч проводят предварительный учет результатов, через 48 ч - окончательный.

4.5. После инкубирования посевов, проведенных по п.4.3, учитывают пробирки с признаками роста микроорганизмов: помутнением среды и изменением ее окраски в желтый цвет. Из пробирок с признаками роста, предположительно энтерококков, делают пересевы на поверхность агаризованной среды п.3.2.5 или 3.2.6, или 3.2.9 таким образом, чтобы получить рост изолированных колоний, посевы на этих средах инкубируют при (37±1) °С в течение 24-48 ч.

4.6. После инкубирования посевов, проведенных по п.4.2, учитывают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 характерных для энтерококков колоний:

на питательной среде по п.3.2.5 колонии энтерококков красно-розовые или карминовые с коричневым оттенком диаметром до 2 мм;

на питательной среде по п.3.2.6 колонии энтерококков оливково-зеленые до темно-коричнево-черных с равномерной окраской поля;

на питательной среде по п.3.2.9:

1) с 2- 3-, 5-ТТХ-колонии вишнево-красные с зоной протеолиза или бесцветные с розовым центром;

2) с теллуритом калия - колонии окрашены в черный цвет.

4.7. Посевы по п.4.5 через 24-48 ч инкубирования просматривают и отмечают рост колоний, характерных для энтерококков по п.4.6.

4.8. Для дальнейшего подтверждения принадлежности характерных колоний к энтерококкам отбирают не менее пяти колоний из посевов по пп.4.6 и 4.7 и пересевают их на чашки Петри с агаризованной средой по п.3.2.7 таким образом, чтобы получить рост изолированных колоний. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение 24-48 ч.

4.9. Подтверждение принадлежности характерных колоний к энтерококкам

4.9.1. Из колоний, выросших по п.4.8, готовят препараты, окрашивают по Граму по ГОСТ 10444.3.

Энтерококкии - грамположительные кокки, расположенные парами, короткими или длинными цепочками.

4.9.2. У колоний определяют наличие каталазы по ГОСТ 10444.3. Энтерококки каталазу не образуют.

4.10. При более углубленном анализе и в целях эпидемиологического обследования проводят дальнейшее подтверждение характерных колоний.

4.10.1. Для определения возможности роста при температуре (45±1) °С культуры высевают в глюкозо-триптонный бульон с дрожжевым экстрактом с рН (7,2±0,1) по п.3.2.2. Посевы инкубируют при (45±1) °С 48-72 ч. Энтерококки вызывают помутнение среды.

4.10.2. Для определения возможности роста в среде с массовой концентрацией NaCI 65 г/дм культуры высевают в солевой бульон по п.3.2.3 и инкубируют при (37±1) °С в течение 24-48 ч. Энтерококки вызывают помутнение среды и выпадение осадка. S. avium в среде с массовой концентрацией NaCI 65 г/дм не растет или растет очень медленно.

4.10.3. Для определения возможности роста в питательной среде с рН 9,6 культуры высевают в глюкозо-триптонный бульон с дрожжевым экстрактом и рН 9,6 по п.3.2.2 и инкубируют в течение 24-48 ч при (37±1) °С. Энтерококки вызывают помутнение среды.

4.10.4. Для постановки теста на терморезистентность культуры высевают в глюкозо-триптонный бульон с дрожжевым экстрактом с рН (7,2±0,1), пробирки выдерживают при (60±1) °С в течение 30 мин и инкубируют в течение 24-48 ч при (37±1) °С. Энтерококки вызывают помутнение среды.

4.10.5. Для определения возможности роста в среде с 40%-тами желчи культуры высевают в 40%-ный желчный бульон по п.3.2.4 и инкубируют в течение 24-48 ч при (37±1) °С. Энтерококки вызывают помутнение среды.