ГОСТ 28560-90 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить предполагаемое минимальное количество продукта, содержащее бактерии родов Proteus и (или) Morganella, и (или) Providencia или видов Proteus vulgaris или Proteus mirabilis.

4.2. Из продукта и (или) соответствующих разведений высевают по 1,0 см в жидкую селективную среду по п.3.2.3. Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч.

4.3. Положительными считают пробирки, в которых наблюдается помутнение среды. При росте бактерий, расщепляющих мочевину, наблюдается изменение цвета среды в синий. Отсутствие изменения цвета среды не является показателем отсутствия роста выявляемых бактерий.

4.4. Для подтверждения присутствия бактерий родов Proteus и (или) Morganella, и (или) Providencia или видов Proteus vulgaris или Proteus mirabilis из всех пробирок, в которых наблюдается помутнение среды, делают пересевы на одну из дифференциально-диагностических плотных сред, приготовленных по п.3.2.4 или по п.3.2.8, таким образом, чтобы получить рост изолированных колоний.

Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч.

4.5. На дифференциально-диагностических плотных средах бактерии образуют колонии круглой формы диаметром 1-3 мм. Бактерии рода Proteus обладают свойством роения (ползучим ростом).

4.6. Из всех чашек с характерным ростом выбирают не менее 5 колоний для выделения чистых культур и дальнейшего изучения.

Для получения чистых культур используют скошенный в пробирке мясо-пептонный агар по п.3.2.1 или мясо-пептонный бульон по п.3.2.2. Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 24 ч.

4.7. Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных микроорганизмов к бактериям родов Proteus и (или) Morganella, и (или) Providencia.

4.7.1. Для определения наличия дезаминазы фенилаланина из 24-часовой культуры по п.4.6 делают высев штрихами на поверхность скошенного в пробирке агара, приготовленного по п.3.2.6, и культивируют при (36±1) °С в течение 48 ч, после этого на поверхность агара пипеткой наносят 3-5 капель раствора хлорного железа, приготовленного по п.3.1.4. При этом появление интенсивной зеленой окраски среды свидетельствует о положительной реакции. При отрицательной реакции цвет среды не меняется.

Бактерии родов Proteus, Morganella, Providencia дают положительную реакцию.

4.7.2. Для определения способности образовывать сероводород культуры по п.4.6 высевают методом укола в столбик и штрихами по поверхности агаризованной среды, приготовленной по п.3.2.5.

Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч. При образовании сероводорода столбик среды чернеет. Бактерии рода Proteus образуют сероводород, при этом в столбике среды появляется газ, что указывает на ферментацию глюкозы с образованием кислоты и газа.

Допускается инкубирование посевов при отсутствии сероводорода через 48 ч продолжать до 4 сут, так как Р.myxofaciens может образовывать сероводород на 3-и - 4-е сутки. Бактерии рода Morganella и Providencia сероводорода не образуют.

4.7.3. Для определения способности утилизировать цитрат культуры, не образующие сероводород по п.4.7.2, пересевают на поверхность скошенного агара, приготовленного по п.3.2.7. Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч. Окрашивание среды в синий цвет - положительная реакция, отсутствие изменения - отрицательная реакция.

Бактерии рода Providencia утилизируют цитрат, бактерии рода Morganella не утилизируют цитрат.

4.8. Для дифференциации видов P.vulgaris и Р.mirabilis у культур, образующих сероводород по п.4.7.2, проводят определение наличия декарбоксилазы орнитина и способности образовывать индол.

4.8.1. Для определения способности образовывать индол выделенные культуры высевают в триптон-триптофановую среду, приготовленную по п.3.2.9. Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч. После инкубирования добавляют 1 см реактива Ковача или Эрлиха, приготовленных по п.3.1.10. Темно-красное кольцо свидетельствует о положительной реакции.

P.vulgaris образует индол, Р.mirabilis и Р.myxofaciens индола не образуют.

4.8.2. Для определения наличия декарбоксилазы орнитина выделенные культуры высевают в среду, приготовленную по п.3.2.10. Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч. Положительной реакцией считают помутнение среды и изменение ее цвета в фиолетовый.

Р.mirabilis дает положительную реакцию, P.vulgaris P.myxofaciens -   отрицательную.