3.1. Приготовление растворов
3.1.1. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромтимолового синего 16 г/дм
: 1,6 г бромтимолового синего переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96%. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.
3.1.2. Раствор массовой концентрацией мочевины 500 г/дм: 50 г мочевины переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде, раствор доливают до метки.
3.1.3. Щелочной раствор фенолового красного массовой концентрацией 16 г/дм: 1,6 г фенолового красного растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см в растворе гидроксида натрия массовой концентрацией 100 г/дм. Раствор доливают раствором гидроксида натрия до метки.
3.1.4. Раствор хлорного железа массовой концентрацией 100 г/дм: 16,6 г (FeCl
6H
O) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.
3.1.5. Раствор гидроксида натрия массовой концентрацией 100 г/дм: 10 г гидроксида натрия переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.
3.1.6. Раствор кристаллического фиолетового массовой концентрацией 1 г/дм: 0,1 г кристаллического фиолетового переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.
3.1.7. Раствор для среды агара-дезоксихолат-цитрат лактозного: 17,0 г натрия лимоннокислого, 1,0 г натрия тиосульфата, 2,0 г железа (III) цитрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки и выдерживают на водяной бане при (60±1) °С в течение 1 ч. Раствор хранят при комнатной температуре не более 3 мес.
3.1.8. Раствор дезоксихолата натрия массовой концентрацией 100 г/дм: 10 г дезоксихолата натрия переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки и выдерживают на водяной бане при (60±1) °С в течение 1 ч. Раствор хранят при комнатной температуре не более 6 мес.
3.1.9. Растворы полимиксин В сульфата или полимиксин М сульфата готовят непосредственно перед использованием, для этого во флакон со стерильным антибиотиком вносят 5 или 10 см стерильной дистиллированной воды.
3.1.10. Реактивы для определения индола:
Реактив Ковача: 5,0 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 75 см метил бутанола и добавляют 25 см концентрированной соляной кислоты (
=1,18-1,19 г/см).
Реактив Эрлиха: 4,0 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 380 см этилового спирта с массовой долей 96% и добавляют 80 см концентрированной соляной кислоты (=1,18-1,19 г/см).
Реактивы хранят в сосудах из темного стекла при температуре (4±2) °C не более 1 мес.
3.1.11. Вазелиновое масло готовят по ГОСТ 10444.1.
3.1.12. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромкрезолового пурпурного 10 г/дм: 1 г бромкрезолового пурпурного переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96%. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.
3.2. Приготовление питательных сред
3.2.1. Агар мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.2. Бульон мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.3. Среда жидкая селективная. Основа среды: к 1 дм мясо-пептонного бульона по п.3.2.2 добавляют 1,0 г маннита, 50,0 смнатуральной бычьей желчи или эквивалентное количество сухой желчи, 0,8 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 2,0 см раствора кристаллического фиолетового, приготовленного по п.3.1.6, 2,0 см спиртового раствора бромтимолового синего, приготовленного по п.3.1.1. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6,9±0,1) при 25 °С. Стерилизуют текучим паром при 100 °С в течение 15 мин.
Для приготовления среды к основе добавляют асептически 10,0 см раствора мочевины, приготовленного по п.3.1.2, и 100000 ЕД полимиксина В сульфата или 120000 ЕД полимиксина М сульфата. Среду разливают в стерильные пробирки по 5 см. Хранят при (4±2) °С не более 7 сут. Готовая среда прозрачная, желто-бурого цвета.
3.2.4. Агар дезоксихолат-цитрат лактозный по Leifson модификация Hynes.
Основа среды: в 1 дм кипящей мясной воды, приготовленной по ГОСТ 10444.1, растворяют 5,0 г пептона, 10,0 г лактозы, 22,5 г агара, охлаждают до (45-50) °С, устанавливают рН таким образом, чтобы при 25 °С он составлял (7,4±0,1). Прибавляют 0,03 г нейтрального красного, разливают в мерные колбы, стерилизуют при (115±1) °С в течение 20 мин. Хранят при (4±2) °С не более 7 сут.
Допускается использовать вместо 1 дм мясной воды и 5,0 г пептона 1 дм мясо-пептонного бульона, приготовленного по п.3.2.2.
Для приготовления питательной среды к расплавленной и охлажденной до 45-50 °С основе прибавляют из расчета на 100 см основы 5 см раствора солей, приготовленных по п.3.1.7, и 5 см раствора дезоксихолата натрия, приготовленного по п.3.1.8. Среду перемешивают и разливают по стерильным чашкам Петри по ГОСТ 26670. Среду используют в день ее приготовления.
