ГОСТ 17.1.4.02-90

Группа Т32

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


ВОДА

Методика спектрофотометрического определения хлорофилла

Water. Spectrophotometric determination of chlorophyll

ОКСТУ 2209

Дата введения 1991-01-01

     
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Институтом океанологии АН СССР, соисполнитель - Гидрохимический институт Госкомгидромета СССР

РАЗРАБОТЧИКИ

М.Е.Виноградов, член-корр. АН СССР; Б.В.Коновалов, канд. биол. наук (руководители темы); В.А.Кимстач, д-р хим. наук; А.А.Назарова, канд. хим. наук; Т.О.Гончарова, канд. хим. наук

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по охране природы от 03.07.90 N 28

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ     

5. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 1999 г.

ВВЕДЕНИЕ

Хлорофилл - основной пигмент зеленых растений, в том числе одноклеточных водорослей (фитопланктона). Из нескольких десятков пигментов, содержащихся в фотосинтетическом аппарате водорослей, хлорофиллу отведена важнейшая роль в процессе фотосинтеза. Информация о концентрации хлорофилла и ее изменчивости в водном объекте служит критерием при оценке запасов биомассы фитопланктона и его продукции, а также индикатором загрязнения вод. Соотношение между концентрацией хлорофилла и продуктами его превращений, а также другими пигментами (хлорофилл , хлорофилл , каротиноиды) характеризует физиологическое состояние водорослей.

1. НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ РАСПРОСТРАНЕНИЯ

1.1. Методика регламентирует определение содержания хлорофилла фитопланктона в пробах вод морских и поверхностных суши. Допускается использовать данную методику для определения хлорофилла микрофитобентоса и микрофлоры льда. Результаты определений по данному стандарту могут быть использованы для калибровки непрямых методов оценки содержания хлорофилла , в том числе при космическом зондировании состояния водных объектов, а также при регистрации роста водорослей в биохимических экспериментах.

1.2. Методика предназначена для органов государственного контроля за состоянием водных объектов, ведомственных научно-исследовательских экологических и промысловых работ.

1.3. Диапазон определяемых концентраций хлорофилла , для которого устанавливаются пределы допускаемой погрешности определений, выполняемых по данной методике, составляет от 0,05 мг·м до любых максимальных значений, встречающихся в природных водах.

1.4. Основными компонентами, мешающими анализу, являются хлорофилл , хлорофилл , феофитин , феофорбид и хлорофиллид . Содержание хлорофилла , хлорофилла  , суммарное содержание феофитина и феофорбида соизмеримо с содержанием хлорофилла , поэтому поправка на присутствие этих пигментов вносится при расчете концентрации хлорофилла . Содержание хлорофиллида обычно несоизмеримо мало по сравнению с содержанием хлорофилла , поэтому поправка на его присутствие не вносится.

1.5. Определяемое вещество - хлорофилл - легко разрушается под воздействием света, при повышении температуры и в кислой среде, поэтому при проведении любых процедур, начиная с момента отбора пробы и до окончания спектрофотометрирования, следует обеспечить нахождение объекта анализа (пробы, фильтра с осадком или экстракта) в затемненном прохладном месте при отсутствии паров кислоты.

1.6. Продолжительность анализа одной пробы от момента ее отбора до окончания спектрофотометрирования без учета времени хранения пробы, фильтра с осадком и экстракта не должна превышать 3 ч.

2. ССЫЛКИ НА СТАНДАРТЫ, СОВМЕСТНО С КОТОРЫМИ ДОЛЖЕН ПРИМЕНЯТЬСЯ НАСТОЯЩИЙ СТАНДАРТ

ГОСТ 17.1.5.04 Охрана природы. Гидросфера. Приборы и устройства для отбора, первичной обработки и хранения проб природных вод. Общие технические условия.

ИСО 5667-2* Качество воды. Отбор проб. Часть 2. Руководство по методам отбора проб.

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

3. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

В основе метода - спектрофотометрирование экстракта пигментов до и после его подкисления раствором соляной кислоты. Расчеты концентрации хлорофилла основаны на известных удельных спектральных показателях поглощения света хлорофиллом и основными компонентами, мешающими анализу.

Для приготовления экстракта пробу воды фильтруют через мембранный фильтр с нанесенным на нем слоем углекислого бария или магния, осадок размельчают (гомогенизируют), пигменты экстрагируют водным ацетоном из гомогената и удаляют центрифугированием из экстракта светорассеивающую взвесь.

4. РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

4.1. Силикагель по ГОСТ 3956.

4.2. Ацетон ч.д.а. по ГОСТ 2603.

4.3. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

4.4. Кислота соляная х.ч. по ГОСТ 3118.

4.5. Барий углекислый ч.д.а. по ГОСТ 4158.

4.6. Магний углекислый основной ч.д.а. по ГОСТ 6419.

4.7. Бумага фильтровальная - по нормативно-технической документации (НТД).

4.8. Фильтры мембранные размерами пор 0,6-0,9 мкм: отечественного производства "Владипор" типа МФА-МА NN 6-9 (0,6-0,9 мкм) (см. приложение 1, п.2) или типа МФЦ N 4 (0,6 мкм) по НТД; производства зарубежных фирм Synpor N 4 (0,85 мкм) или N 5 (0,6 мкм), Millipore НА, Whatman GF/F.

5. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ И ОБОРУДОВАНИЕ

5.1. Спектрофотометр. Выделяемый спектральный интервал должен быть не более 2-3 нм, точность установки длин волн в диапазоне 430-750 нм не ниже ±2 нм, погрешность измерений по шкале оптических плотностей не более 0,01 Б. Например, спектрофотометры: двухлучевой типа СФ-18 или однолучевой типа СФ-46 по НТД.

5.2. Центрифуга лабораторная. Вместимость пробирок 10 см, число гнезд 6(12), ускорение 4000-5000 . Например, типа ЦЛН-2 или ОПн-ВУХЛ 4.2 по НТД.

5.3. Установка фильтровальная с воронками под фильтры мембранные диаметром от 35 до 142 мм (см. приложения 3 и 4).

5.4. Гомогенизатор механический вместимостью 10-15 см. Ступка фарфоровая N 1-3 (диаметр 50-90 мм) с пестиком N 2 (диаметр 22-34 мм) по ГОСТ 9147. Рекомендуется также устройство из стекла, схема которого дана в приложении 5.

5.5. Насос вакуумный, типа НВР-1 или ЗНВР-1Д, или отсасыватель хирургический ОХ-10 по НТД.

5.6. Батометр (см. приложение 1, п.1).

5.7. Канистры полиэтиленовые черного цвета вместимостью 3, 5, 10 и 20 дм.

5.8. Ведро полиэтиленовое или эмалированное.

5.9. Эксикатор диаметром 140, 190 или 250 мм по ГОСТ 25336.

5.10. Пробирки стеклянные градуированные с притертой пробкой на 10 см с ценой деления 0,1 см по ГОСТ 1770 и НТД.

6. ПОДГОТОВКА РЕАКТИВОВ И ФИЛЬТРОВ

6.1. Порошок углекислого бария () тщательно растирают в фарфоровой ступке с добавлением небольшого количества дистиллированной воды или фильтрованной природной. Из полученной массы удаляют самую грубую фракцию, оседающую со скоростью более 0,5 см·с, после чего эту массу используют для приготовления суспензии. Рекомендуемая концентрация в суспензии 30 г·дм. Порция суспензии, добавляемой в фильтровальную воронку перед фильтрованием, берется из расчета 20 мг на 1 см поверхности фильтра.

6.2. Мембранные фильтры готовят в зависимости от типа материала фильтра. Некоторые типы фильтров выпускают готовыми к использованию (например, стекловолокнистые фильтры типа GF/F), другие требуют предварительного вымачивания или даже кипячения в воде. Например фильтры типа Synpor необходимо трижды прокипятить по 10-15 мин в свежих порциях дистиллированной воды. После кипячения следует провести выбраковку деформированных фильтров. Готовые фильтры хранят в сухом состоянии.

6.3. Приготовление 1 дм 90%-ного водного ацетона проводят смешением 0,9 дм 100%-ного ацетона и 0,1 дм дистиллированной воды. В приготовленный раствор добавляют порцию из расчета 1-2 г на 1 дм раствора, суспензию тщательно перемешивают в течение 20-30 с и хранят не более 3-5 сут в склянках из темного стекла.

6.4. 0,5 см концентрированной соляной кислоты растворяют в 10 см ацетона. Приготовленный раствор хранят не более суток.